前列腺干細胞抗原在前列腺上皮內瘤發生繼發性癌變中的預測意義

閆振宇

(南陽市中心醫院病理科,河南　南陽　473009)

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前列腺干細胞抗原在前列腺上皮內瘤發生繼發性癌變中的預測意義

閆振宇

(南陽市中心醫院病理科,河南南陽473009)

摘要〔〕目的探討前列腺干細胞抗原(PSCA)與前列腺上皮內瘤(PIN)發生繼發性癌變的相關性。方法115例孤立性PIN患者根據病理分級分為低級別PIN(LGPIN)和高級別PIN(HGPIN)兩組，采用核酸原位雜交法檢測PSCA mRNA的表達，采用Logistic單因素、多因素回歸分析PSCA與PIN繼發性癌變的關系。結果PSCA mRNA在HGPIN組織中的陽性表達率顯著高于LGPIN組織(P<0.01)；孤立性LGPIN、HGPIN，未繼發前列腺癌患者PSCA mRNA陽性率均顯著低于繼發前列腺癌患者(P<0.01)；單因素和多因素的Logistic回歸分析結果提示對于孤立性的LGPIN和HGPIN，最初的活檢PSCA mRNA的水平均能對繼發癌癥的出現有預測價值(P<0.01)。結論PSCA在PIN進展為前列腺癌的過程中有著非常重要的預測價值。

關鍵詞〔〕前列腺干細胞抗原；前列腺上皮內瘤；前列腺癌

第一作者：閆振宇(1971-)，男，主治醫師，主要從事臨床病理診斷研究。

前列腺上皮內瘤(PIN)是現在采用的前列腺導管和腺泡病變的名稱，也被描述為導管內或導管-腺泡的非典型增生，病理學可分為3級，其中2、3級屬于高級別的PIN(HGPIN)，相關研究已證實其是組織結構中最可能進展成為前列腺癌的一種癌前病變〔1〕；而1級則為低級別的PIN(LGPIN)，其進展為癌的風險相對HGPIN顯著降低。前列腺干細胞抗原(PSCA)是糖蛋白，具有123個氨基酸，屬于前列腺特異性的優勢表達的一個細胞表面標記，將近82%的HGPIN樣本中PSCA mRNA呈強陽性〔2〕。本研究旨在探討PIN中PSCA mRNA表達水平與前列腺癌的發生和發展的關系。

1資料與方法

1.1一般資料2005年1月至2010年1月我院孤立性PIN患者115例，均得到了直腸超聲引導的前列腺活檢的確診，活檢平均使用9(6-12)點法，活檢開始時，均未出現共存癌且未曾被診斷為前列腺癌、未接受過去勢治療。排除經重復活檢、開放手術或尿道切除取得組織后被確診為癌的患者。其中LGPIN 50例，HGPIN 65例，由LGPIN繼發為癌的8例，由HGPIN繼發為癌的25例，共33例。LGPIN組年齡32～68歲，HGPIN組年齡35～70歲。隨訪60～77(平均67.4)個月。隨訪過程中，所有患者在活檢最初診斷為PIN≤18個月中，接受前列腺活檢的初次12點隨訪。對活檢均使用標準法，在外周區域采用兩個不間斷的六分儀的活組織儀自左向右采集。首次隨訪中依然為PIN的患者，1年后采用相同的方法施行前列腺活檢的第2次12點隨訪，且將此作為研究終點〔3〕。初次診斷性活檢之前，先通過放射免疫法對血清前列腺特異抗原(PSA)進行測量，然后實施直腸指診(DRE)。收集并完全包埋所有通過穿刺活檢所收集的樣本。選取能對病變診斷有清晰顯示的最大組織塊，用4%的多聚甲醛(pH=7.4的0.1% DEPC和0.1 mol/L的PBS)及時進行處理，最后包埋于石蠟內。將石蠟切塊以5 μm的厚度切片，包埋于覆蓋著聚乙烯的載玻片內。

1.2研究方法對PSCA mRNA施行原位雜交法標記。脫蠟、脫水、消化為組織塊(厚5 μm)，采用人PSCA反義探針(異羥基洋地黃毒苷標記)，于48℃下進行雜交、過夜。洗滌，采用生物素化的鼠抗異羥基洋地黃毒苷抗體于37.5℃下進行1 h的孵育，然后在相同溫度環境中使用鏈霉親和素過氧化酶同樣進行20 min的孵育。接著將3,3-二氨基聯苯(DAB)滴入，呈棕黃色。蘇木素復染。于載玻片上，用感覺探針雜交或PBS在無RNA酶環境中進行整個過程，作陰性對照。每個玻片均在Olympus BX-53的光學顯微鏡下進行閱讀。按200倍放大后，隨機抽取10個視野進行觀察，均勻染成褐色細胞質的細胞作PSCA mRNA陽性表達。

1.3統計學方法采用SPSS19.0軟件進行t檢驗和Logistic回歸分析。

2結果

2.1PSCA mRNA的表達情況PSCA mRNA在LGPIN組織表達普遍為陰性，陽性表達率約18.0%(9/50)，平均陽性細胞比例為(9.3±1.8)%；而在HGPIN組織陽性表達率為80.0%(52/65)，平均陽性細胞比例為(30.3±1.9)%，提示PSCA mRNA在HGPIN組織中的陽性表達率高于LGPIN組織(P<0.01)。

2.2繼發前列腺癌組織內PSCA mRNA的表達繼發前列腺癌的腫瘤細胞內PSCA mRNA呈陽性表達，細胞平均陽性率〔(70.4%±9.8)%(30%～90%)〕明顯高于最初活檢是PIN的患者〔(26.7±4.5)%〕(P<0.05)。針對孤立性LGPIN、HGPIN，未出現前列腺癌細胞的陽性率〔(15.2±2.7)%，(5.1%±0.8)%〕與出現繼發前列腺癌〔(47.5±6.4)%，(24.3±3.3)%〕均具有顯著差異(P<0.01)。

2.3單、多變量Logistic回歸分析對孤立性LGPIN患者應用單、多變量Logistic回歸分析預測其發生癌癥可能性的結果顯示，只有最初的活檢PSCA mRNA的水平(4.27±0.56)能對繼發癌癥的危險進行預測(P<0.01)，而12點(1.13±0.64)、6點活檢(1.51±0.47)的改變和DRE(1.25±0.64)、血清PSA值(1.57±0.54)、最初活檢期間發現的孤立性LGPIN(0.92±1.04)均無法將繼發癌癥的危險進行顯著預測(P>0.05)。單變量回歸分析孤立性HGPIN患者的結果顯示，最初活檢期間HGPIN的存在(1.27±0.03)、12點活檢(1.27±0.03)及活檢組織中PSCA mRNA的水平(1.09±0.52)均能對隨訪期間發生的繼發癌進行有效預測(P<0.05)，但是最初活檢和12點活檢期間存在的孤立性HGPIN不再是預測癌癥發生的指標(P>0.05)。在孤立性LGPIN中也適用同樣的結果，最初6點活檢、DRE結果、血清PSA值的變化均無法對癌癥的發生進行有效預測(P>0.05)。見表1。

表1　孤立性LGPIN、HGPIN預測繼發前列腺癌的單、多因素Logistic回歸分析

3討論

通過原位雜交法對PIN標本和前列腺癌標本的研究結果顯示，相比于HGPIN和LGPIN，前列腺癌的PSCA mRNA表達的密度、強度均顯著上升〔4〕。HGPIN中PSCA mRNA表達的上升很可能是前列腺癌的發展進程中的早期事件之一〔5〕。PSCA mRNA表達的水平與前列腺腫瘤的病理機制相關，且有望對孤立性PIN發展成前列腺癌所存在的風險進行預測〔6〕。

在臨床上，對孤立性PIN進行穿刺活檢的意義主要是在其之后的活檢過程中可以發現存在的前列腺癌，故這種識別孤立性PIN可能發展為前列腺癌患者有著非常重要的價值〔7〕。雖然最近在臨床上有著重要參考價值的DRE和血清PSA結果被大量評估，用以對孤立性PIN繼發為前列腺癌的風險進行預測，但是目前研究結果尚不一致。本研究結果發現，在有/沒有繼發前列腺癌相應的孤立性HGPIN和LGPIN中，血清PSA濃度變化無顯著性的意義，說明在發生疾病的過程中，孤立性HGPIN和LGPIN本身并不引起血清PSA濃度顯著提高〔8〕。Logistic回歸分析顯示，6點法活檢無法預測孤立性HGPIN患者繼發前列腺癌的風險，但是12點法活檢卻能對此類風險進行有效預測。然而在多變量分析中，這兩種方法均無預測價值。因此，在孤立性PIN患者確定發展為臨床前列腺癌中，PSCA mRNA的表達水平具有重要的預測作用〔9〕。

本實驗中，孤立性PIN患者確診后發展為前列腺癌需隨訪≥5年。對PSCA mRNA表達水平與最初的前列腺活檢確診為孤立性的HGPIN和LGPIN患者臨床結局間的關系的研究結果顯示，在最初的活檢PSCA mRNA呈陽性表達的孤立性HGPIN和LGPIN患者中，在隨訪活檢中，均有病例進展為前列腺癌；而呈陰性表達的患者中，在隨后至少為5年的隨訪活檢期間，未出現前列腺癌的病例。針對最初活檢中有陽性表達的PSCA mRNA的孤立性HGPIN或者LGPIN患者，存在顯著進展成臨床前列腺癌趨勢〔10〕。PSCA mRNA可以作為孤立性HGPIN或LGPIN進展成臨床前列腺癌獨立的預測指標。

目前尚不清楚PSCA的生物學功能及確切的調控機制。雖然很多因素會調節PSCA表達，但是其表達的重要調節點之一是轉錄水平。此外，蛋白激酶C和細胞與細胞間的聯系也可能介導或參與PSCA的表達。PSCA同源物呈現出多樣化的功能，與致癌作用也有關聯。也有學者認為PSCA存在祖細胞樣或肝細胞樣的功能〔11〕。在PIN細胞中，PSCA的表達可能影響細胞增殖和轉化，從而在前列腺癌發生、發展中發揮重要意義。

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〔2014-09-19修回〕

(編輯苑云杰)

基金項目：安陽市科技攻關計劃項目(No.2008032031)

中圖分類號〔〕R737.25〔

文獻標識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2015)21-6133-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.21.061