臨床血脂測(cè)定建議

附件1

臨床血脂測(cè)定建議

血脂測(cè)定是血脂異常防治的重要組成部分,測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確是有效開展血脂異常防治工作的基本要求。多種因素影響血脂測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性,包括受試者和標(biāo)本情況、測(cè)定方法、儀器試劑、測(cè)定操作等。現(xiàn)根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)分會(huì)有關(guān)建議和我國有關(guān)行業(yè)或國家標(biāo)準(zhǔn),考慮我國目前血脂測(cè)定實(shí)際情況,綜合中國成人血脂異常防治指南修訂聯(lián)合委員會(huì)的意見,就血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、載脂蛋白(Apo) A1、Apo B及脂蛋白(a)[Lp(a)]等血脂項(xiàng)目的測(cè)定提出建議,以促進(jìn)我國血脂測(cè)定進(jìn)一步規(guī)范化與標(biāo)準(zhǔn)化,保障血脂異常防治工作的有效開展。

1 受試者準(zhǔn)備及標(biāo)本采集與處理

許多分析前因素會(huì)影響血脂水平,主要包括:生物學(xué)因素,如個(gè)體間、性別、年齡和種族;行為因素,如飲食、肥胖、吸煙、緊張、飲酒、飲咖啡和鍛煉等;臨床因素,如(1) 疾病繼發(fā)(內(nèi)分泌或代謝性疾病、腎臟疾病、肝膽疾病及其他),(2) 藥物誘導(dǎo)(抗高血壓藥,免疫抑制劑及雌激素等);標(biāo)本收集與處理,如禁食狀態(tài)、血液濃縮、抗凝劑與防腐劑、毛細(xì)血管與靜脈血、標(biāo)本貯存等。建議采取以下措施減少可控分析前因素對(duì)血脂檢測(cè)結(jié)果的影響:

① 采集標(biāo)本前受試者處于穩(wěn)定代謝狀態(tài),至少2周內(nèi)保持一般飲食習(xí)慣和穩(wěn)定體重。

② 采集標(biāo)本前受試者24 h內(nèi)不進(jìn)行劇烈身體活動(dòng)。

③ 采集標(biāo)本前受試者禁食約12 h.

④ 用靜脈血作血脂測(cè)定標(biāo)本,抽血前受試者坐位休息至少5min,除特殊情況外,受試者取坐位接受抽血。

⑤ 靜脈穿刺時(shí)止血帶使用不超過1min.

⑥ 血液標(biāo)本保持密封,避免震蕩。

⑦ 用血清作血脂分析樣品,血液標(biāo)本在1～2 h內(nèi)離心,分離血清(含促凝劑采血管可在更短時(shí)間內(nèi)離心)。

⑧ 及時(shí)分析血清樣品,盡量避免樣品存放,若必須儲(chǔ)存,需保持樣品密封,短期 (3天內(nèi)) 可存于4℃,長期需存于-70℃以下。

2 測(cè)定方法選擇

血脂測(cè)定各方法原理不同,分析性能、易操作性和分析成本也有差異,血脂常規(guī)測(cè)定應(yīng)酌情選擇合適的測(cè)定方法。

2.1血清TC測(cè)定

血清TC測(cè)定方法包括化學(xué)法、色譜法和酶法等,其中酶法最為簡便、易自動(dòng)化、分析性能良好,是目前TC常規(guī)測(cè)定普遍使用的方法。其他方法目前僅用于某些特殊情況(如特定化學(xué)法和色譜法用作參考方法)。建議采用酶法進(jìn)行血清TC常規(guī)測(cè)定。

2.2血清TG測(cè)定

血清TG測(cè)定方法包括化學(xué)法、色譜法和酶法等,酶法同樣是目前普遍采用的TG常規(guī)測(cè)定方法。目前多數(shù)TG酶法測(cè)定的是總甘油,部分酶法扣除游離甘油。建議采用酶法進(jìn)行血清TG常規(guī)測(cè)定,一般可使用總甘油測(cè)定方法,必要時(shí)應(yīng)考慮使用可消除游離甘油影響的測(cè)定方法。

2.3血清HDL-C測(cè)定

血清HDL-C測(cè)定曾出現(xiàn)過許多方法,大致可分為超速離心法、電泳法、色譜法,沉淀法、勻相法等。早期HDL-C常規(guī)測(cè)定主要采用的是沉淀法,經(jīng)嚴(yán)格論證的沉淀法可實(shí)現(xiàn)較高的分析特異性,但其主要缺點(diǎn)是需預(yù)先對(duì)標(biāo)本進(jìn)行沉淀、離心等處理,結(jié)果易受高TG的影響。目前HDL-C常規(guī)測(cè)定的主要方法為勻相法,包括清除法、PEG修飾酶法、選擇性抑制法、免疫分離法等,勻相法的最大優(yōu)點(diǎn)是使用方便,不需樣品處理,分析性能良好,但部分方法可能存在特異性問題。建議采用勻相法進(jìn)行血清HDL-C常規(guī)測(cè)定。

2.4血清LDL-C測(cè)定

血清LDL-C測(cè)定方法包括超速離心法、電泳法、色譜法、公式計(jì)算法、沉淀法、勻相法等,常規(guī)采用的主要方法為公式計(jì)算法、沉淀法和勻相法。公式計(jì)算法曾是國際上使用最普遍的LDL-C測(cè)定方法,目前在部分國家仍被廣泛使用。此法常用公式是Friedewald公式:LDL-C= TC-HDL-C- TG/5(mg/dl)或LDL-C=TC-HDL-C-TG/2.2(mmol/L)。其最大的優(yōu)點(diǎn)是無需檢測(cè)、計(jì)算簡便,在TG低于2.8 mmol/L(250 mg/dl)的情況下有一定的可靠性;局限性是不能用于TG>4.5 mmol/L(TG> 400 mg/dl)或某些異常脂蛋白血癥的標(biāo)本,LDL-C結(jié)果的可靠性受TC、TG和HDL-C 3項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定質(zhì)量的影響。部分國家曾用沉淀法測(cè)定LDL-C,但因其特異性有限且操作繁瑣,應(yīng)用不甚廣泛。勻相法是我國目前測(cè)定LDL-C的主要方法,包括清除法、杯芳烴法、可溶性反應(yīng)法和保護(hù)性試劑法等,這類方法使用方便,可分析高TG樣品,但部分方法可能存在特異性問題。建議常規(guī)采用勻相法測(cè)定LDL-C。

2.5血清Apo A1、Apo B和Lp(a)測(cè)定

血清Apo A1、Apo B 和Lp(a)測(cè)定基本上基于免疫化學(xué)原理。早期測(cè)定多采用免疫電泳法、免疫擴(kuò)散法、放射免疫法和酶聯(lián)免疫吸附法等,這些方法操作復(fù)雜,分析性能有限,現(xiàn)已很少使用。目前主要采用免疫比濁法,包括透射比濁法和散射比濁法,這些方法使用方便,分析性能良好,部分Lp(a)測(cè)定方法可能存在較明顯的特異性問題。建議采用免疫比濁法常規(guī)測(cè)定血清Apo A1、Apo B 和Lp(a)。

3 分析系統(tǒng)選擇

上述方法所需運(yùn)行的特定儀器、試劑和校準(zhǔn)物及其工作參數(shù)等稱為分析系統(tǒng)。目前血脂常規(guī)測(cè)定普遍采用商品儀器、試劑和校準(zhǔn)物,品牌眾多,因此同一方法下可有眾多分析系統(tǒng)。不同分析系統(tǒng)的分析性能常不同,因此選擇可靠的分析系統(tǒng)是保證血脂分析質(zhì)量的關(guān)鍵。

3.1分析系統(tǒng)類型

按分析儀器的自動(dòng)化程度,可分為全自動(dòng)(全自動(dòng)生化分析儀)、半自動(dòng)(半自動(dòng)分析儀)和手工(分光光度計(jì))分析系統(tǒng)。半自動(dòng)和手工分析系統(tǒng)除包括分析儀器、試劑和校準(zhǔn)物外,還包括移液和溫育等設(shè)備或器具。目前我國絕大多數(shù)臨床實(shí)驗(yàn)室使用全自動(dòng)分析系統(tǒng),少數(shù)小型實(shí)驗(yàn)室可能使用半自動(dòng)分析系統(tǒng)。自動(dòng)化程度越高,影響因素越少。建議采用全自動(dòng)分析系統(tǒng)進(jìn)行血脂常規(guī)測(cè)定,適宜時(shí)可使用半自動(dòng)分析系統(tǒng)。

按儀器、試劑和校準(zhǔn)物來源,分析系統(tǒng)可分為3種:(1)封閉系統(tǒng):儀器、試劑和校準(zhǔn)物來自同一廠商,配套使用,工作參數(shù)內(nèi)置。(2)開放系統(tǒng):試劑和校準(zhǔn)物來自同一廠商,配套使用,儀器另選,參數(shù)一般由試劑廠商提供。(3)組合系統(tǒng):儀器、試劑和校準(zhǔn)物來自不同廠商或機(jī)構(gòu),由實(shí)驗(yàn)室自己組合并建立工作參數(shù)。目前在我國3種分析系統(tǒng)均廣泛應(yīng)用,可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室具體情況進(jìn)行選擇。

3.2分析系統(tǒng)質(zhì)量技術(shù)指標(biāo)

所選用的分析系統(tǒng)應(yīng)符合下列質(zhì)量技術(shù)指標(biāo)。

3.2.1精密度、正確度和準(zhǔn)確度

精密度指在多次獨(dú)立檢驗(yàn)分析中重復(fù)分析同一樣品所得結(jié)果的一致程度,反映分析系統(tǒng)的隨機(jī)誤差,用變異系數(shù)表示。血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、ApoA1、ApoB和Lp(a)測(cè)定的變異系數(shù)應(yīng)分別小于3%、5%、4%、4%、3%、3%和4%。

正確度指在多次獨(dú)立檢驗(yàn)分析中重復(fù)分析同一樣品所得結(jié)果的均值與靶值的差異,反映分析系統(tǒng)的系統(tǒng)誤差,用偏倚(B)表示。靶值一般指參考(標(biāo)準(zhǔn))物質(zhì)定值或參考方法測(cè)定值。血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、ApoA1、ApoB和Lp(a)測(cè)定的偏倚應(yīng)分別在±3%、±5%、±5%、±4%、±5%、±5%和±10%范圍內(nèi)。

準(zhǔn)確度指在多次獨(dú)立檢驗(yàn)分析中單次分析多個(gè)代表性樣品所得結(jié)果與靶值的最大差異,用總誤差表示。靶值一般指參考方法或其他可靠方法的測(cè)定值。在分析系統(tǒng)特異性良好的前提下,準(zhǔn)確度由精密度和正確度決定(用公式表示為:總誤差 =偏倚絕對(duì)值+ 1.96X變異系數(shù))。血清TC、TG、HDL-C、LDL-C測(cè)定的總誤差應(yīng)分別小于9%、15%、13%和12%。

精密度、正確度和準(zhǔn)確度,尤其準(zhǔn)確度是分析系統(tǒng)的主要分析質(zhì)量指標(biāo)。目前我國絕大多數(shù)血脂分析系統(tǒng)精密度良好,部分分析系統(tǒng)可能存在正確度和準(zhǔn)確度問題。

3.2.2特異性

特異性是影響準(zhǔn)確度的重要因素。分析系統(tǒng)應(yīng)具備只作用于目標(biāo)血脂指標(biāo)、不受其他血清成分影響的能力。目前我國TC和TG分析系統(tǒng)特異性良好,部分脂蛋白和載脂蛋白分析系統(tǒng)可能存在特異性問題。

3.2.3校準(zhǔn)

校準(zhǔn)是正確度的決定因素。分析系統(tǒng)校準(zhǔn)物的定值應(yīng)使臨床標(biāo)本測(cè)定結(jié)果可溯源到已有的參考系統(tǒng)。

3.2.4檢測(cè)范圍

分析系統(tǒng)檢測(cè)范圍應(yīng)至少覆蓋下列血脂范圍:TC: 2～10 mmol/L,TG:0.3～10.0 mmol/L,HDL-C:0.3～2.5 mmol/L, LDL-C:0.5～7.0 mmol/L,Apo A1:0.5～2.0g/L,Apo B:0.5～2.0g/L, Lp(a):5～800 mg/L。

3.3分析系統(tǒng)性能驗(yàn)證

任何新選用的分析系統(tǒng),在用于臨床樣品檢驗(yàn)前,均應(yīng)進(jìn)行性能驗(yàn)證,以保證分析系統(tǒng)性能符合上述質(zhì)量技術(shù)指標(biāo)。具體驗(yàn)證方法可參閱有關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或文獻(xiàn)。

3.4血脂分析

使用經(jīng)過驗(yàn)證的分析系統(tǒng)進(jìn)行臨床標(biāo)本的血脂分析,按分析系統(tǒng)或試劑說明書規(guī)定的程序進(jìn)行分析操作。

4 質(zhì)量控制和保證

臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)規(guī)定血脂測(cè)定各主要環(huán)節(jié)的工作條件和程序,血脂測(cè)定應(yīng)按規(guī)定進(jìn)行。

我國醫(yī)療機(jī)構(gòu)中標(biāo)本采集和檢驗(yàn)分析工作多分屬不同部門,部門間應(yīng)密切溝通,保證相關(guān)工作程序的有效實(shí)施,盡量減小分析前因素對(duì)血脂測(cè)定的影響。

臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)工作經(jīng)驗(yàn)、行業(yè)交流、科學(xué)文獻(xiàn)等選用性能可靠的血脂測(cè)定方法和分析系統(tǒng)(主要是試劑和校準(zhǔn)物品牌)。應(yīng)盡量保持使用同種分析系統(tǒng),不宜隨意、頻繁更換。

臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)進(jìn)行內(nèi)部質(zhì)量控制。質(zhì)控品應(yīng)適宜血脂分析,足夠均勻、穩(wěn)定,濃度在主要醫(yī)學(xué)決定水平附近,至少有兩個(gè)水平;應(yīng)盡量長期保持使用同種質(zhì)控品,不宜頻繁更換;每批檢驗(yàn)分析至少分析一次質(zhì)控品。

臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期參加國家或地區(qū)認(rèn)可的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)計(jì)劃。

5 結(jié)果報(bào)告與解釋

臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)以我國法定計(jì)量單位(mmol/L)報(bào)告TC、TG、HDL-C、LDL-C測(cè)定結(jié)果,需要時(shí),可另外給出傳統(tǒng)單位(mg/dl)結(jié)果。

血脂檢驗(yàn)報(bào)告應(yīng)注明我國血脂異常防治指南規(guī)定的主要醫(yī)學(xué)決定水平。

對(duì)血脂測(cè)定結(jié)果的解釋,需考慮分析變異、個(gè)體內(nèi)生物學(xué)變異的影響,血脂結(jié)果在醫(yī)學(xué)決定水平附近時(shí),需根據(jù)多次血脂測(cè)定結(jié)果做出判斷。