生地、丹參對2型糖尿病大鼠腹主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響

唐年亞

(南陽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校科研處，河南 南陽 473000)

生地、丹參對2型糖尿病大鼠腹主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響

唐年亞

(南陽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校科研處，河南 南陽 473000)

目的觀察生地、丹參對2型糖尿病(T2DM)大鼠腹主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響。方法 采用鏈脲佐菌素(STZ)加高糖高脂飲食制作T2DM動(dòng)物模型。用日立H-600透射電鏡觀察T2DM大鼠腹主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果 生地、丹參組T2DM大鼠腹主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞及其線粒體腫脹、破壞程度比模型組明顯減輕。結(jié)論 生地、丹參均對T2DM大鼠腹主動(dòng)脈內(nèi)皮超微結(jié)構(gòu)有不同程度的保護(hù)作用。

生地；丹參；2型糖尿病；內(nèi)皮細(xì)胞；超微結(jié)構(gòu)

血管內(nèi)皮細(xì)胞具有復(fù)雜的酶系統(tǒng)，能合成與分泌多種生物活性物質(zhì)〔1〕，如組織纖維酶原活性物和前列環(huán)素、內(nèi)皮素以及具有舒張血管作用的內(nèi)皮細(xì)胞舒張因子。內(nèi)皮細(xì)胞表面有血管緊張素轉(zhuǎn)換酶，能使血漿中的血管緊張素Ⅰ變?yōu)檠芫o張素Ⅱ，使血管收縮。內(nèi)皮細(xì)胞還能降解5-羥色胺、組織胺和去甲腎上腺素等。2型糖尿病(T2DM)血糖增高容易致使血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂,其活性物質(zhì)分泌出現(xiàn)失衡，嚴(yán)重可引起血管內(nèi)皮細(xì)胞排列紊亂甚至脫落,使內(nèi)皮下層直接暴露于血液之中,引起血管反復(fù)血栓、管腔狹窄、炎性病變等,造成局部組織并發(fā)癥的產(chǎn)生〔2〕。本實(shí)驗(yàn)觀察T2DM大鼠腹主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)治療前后的變化。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及藥物 清潔級Wistar大鼠90只，60～70 g，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d開始實(shí)驗(yàn)。中藥生地、丹參回流提取成中藥水液制劑用于灌胃治療。西藥格列齊特作對照。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器 2.5%戊二醛、1%四氧化鋨；LKB-V型超薄切片機(jī)；日立H-600透射電鏡。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 造模方法 隨機(jī)選取10只大鼠為正常組，以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，其余80只以高糖高脂飼料喂養(yǎng)30 d，后腹腔注射STZ(30～45 mg/kg)，繼續(xù)高糖高脂飲食，7 d后取餐后2 h血糖值≥11.1 mmol/L的大鼠進(jìn)行分組治療。若造模不成功，可腹腔補(bǔ)注一次STZ，治療周期為45 d。

1.3.2 分組治療 造模成功的80只大鼠被隨機(jī)分成8組：模型組、西藥組(格列齊特組)，丹參高、中、低劑量組，生地高、中、低劑量組。按人鼠等效劑量折算，對各組進(jìn)行灌胃治療，1次/d；其中正常組、模型組生理鹽水灌胃，余下各組中藥制劑灌胃治療。

1.3.3 標(biāo)本采集與制備 治療結(jié)束后，在正常組、模型組、丹參中劑量組、生地中劑量組中各隨機(jī)選取1只大鼠斷頭處死，立即取出腹主動(dòng)脈(1 cm長度)，2.5%戊二醛瓶裝固定，繼入1%四氧化鋨中固定2 h，脫水、包埋、切片，經(jīng)醋酸鈾和檸檬酸鉛等重金屬電子雙重染色后，置于H-600透射電鏡下觀察攝像。

2 結(jié) 果

圖1所示，正常組：內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)正常，連續(xù)性好，無中斷，內(nèi)皮細(xì)胞長軸與血液流動(dòng)方向一致；細(xì)胞核居中，核所在部位略隆起，細(xì)胞基底面附著于基板上；內(nèi)皮細(xì)胞核仁大而明顯。線粒體數(shù)一般、嵴清晰、整齊。模型組：內(nèi)皮細(xì)胞顯著腫脹，連續(xù)性中斷，有明顯的內(nèi)皮脫落；胞質(zhì)電子密度低，細(xì)胞器少見；線粒體明顯腫脹，嵴腫脹紊亂或溶解，見脂滴、糖原顆粒；基底膜厚薄不均，可見明顯透亮區(qū)(電子密度低)，提示有水腫，連續(xù)性中斷。丹參中劑量組：內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)稍差，連續(xù)性好，無明顯中斷；胞核形態(tài)不規(guī)則，胞核內(nèi)異染色質(zhì)增多，邊集于核膜下，線粒體數(shù)目無明顯增多，腫脹，嵴模糊、紊亂。生地中劑量組：內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，連續(xù)性差中斷，有脫落現(xiàn)象；胞核形態(tài)不規(guī)則，核異染色質(zhì)增多；線粒體數(shù)目多，體積增大，嵴模糊。

圖1 各組大鼠腹主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察

3 討 論

與正常組相比，模型組內(nèi)皮細(xì)胞明顯脫落，內(nèi)皮下基層紊亂并暴露于血液之中，提示有明顯的血管并發(fā)癥，這與該組大鼠體毛稀疏凌亂、色暗偏黃，形瘦多瘡，活動(dòng)遲緩的外在表現(xiàn)相吻合。與模型組比較，生地、丹參均能穩(wěn)定內(nèi)皮下基層的完整形態(tài)，保護(hù)血管內(nèi)皮超微結(jié)構(gòu)，并與兩組大鼠的外在表現(xiàn)相吻合，未見明顯形瘦、生瘡、遲鈍，毛色微黃無澤。同時(shí)也與臨床生地、丹參均能改善糖尿病病人癥狀是一脈相承。但是，生地、丹參也有各自作用特點(diǎn)，即在維持血管內(nèi)皮細(xì)胞正常形態(tài)，改善內(nèi)皮細(xì)胞腫脹方面，丹參的作用明顯比生地要強(qiáng)，都強(qiáng)于模型組；在維持線粒體形態(tài)與數(shù)量方面，生地的作用強(qiáng)于丹參，表明生地更能從內(nèi)皮細(xì)胞的能量方面維持其形態(tài)的穩(wěn)定性。但兩者在保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞方面為何有此差異有待于進(jìn)一步深入地研究。

1 Schulz R，Rassaf T，Massion PB，etal.Recent advances in the understanding of the role of nitric oxide in cardiovascular homeostasis〔J〕.Pharmacol Ther，2005；108(3):225-56.

2 陳穗樺，夏 元，姜 濤.糖尿病新生血管性青光眼視神經(jīng)血管內(nèi)皮細(xì)胞在透射電鏡下的改變〔J〕.眼科研究，2006；24(2):204-5.

〔2015-06-11修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢園)

河南省教育廳科技研究重點(diǎn)項(xiàng)目(No.12B360019)

唐年亞(1979-)，男，碩士，主要從事糖尿病臨床與基礎(chǔ)研究。

R285.5

A

1005-9202(2016)24-6090-04；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.24.020