喉鱗癌中肝細(xì)胞生長因子和間質(zhì)表皮轉(zhuǎn)化因子的表達(dá)及意義

李建民 鄭慧媛 冶 娟 董春花 郭 兵

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院耳鼻喉頭頸外科，青海 西寧 810001)

喉鱗癌中肝細(xì)胞生長因子和間質(zhì)表皮轉(zhuǎn)化因子的表達(dá)及意義

李建民 鄭慧媛 冶 娟 董春花 郭 兵

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院耳鼻喉頭頸外科，青海 西寧 810001)

目的 探討喉鱗癌患者術(shù)后組織中肝細(xì)胞生長因子(HGF)和間質(zhì)表皮轉(zhuǎn)化因子(C-met)的表達(dá)特征，關(guān)注其在不同臨床病理特征中的表達(dá)差別。方法 59例喉鱗癌的臨床資料及術(shù)后的蠟塊組織作為觀察組，32例聲帶息肉的臨床資料及術(shù)后的蠟塊組織作為對照組，應(yīng)用免疫組化方法檢測兩組中HGF和C-met的表達(dá)。結(jié)果 兩組中HGF和C-met的陽性率差異顯著，觀察組中HGF和C-met的陽性率與腫瘤的脈管侵犯和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，HGF的陽性率與分化程度相關(guān)，HGF和C-met呈正相關(guān)性。結(jié)論 HGF和C-met高表達(dá)是喉鱗癌發(fā)生和發(fā)展的重要促進(jìn)因素。喉鱗癌中HGF和C-met可能具有內(nèi)在協(xié)同作用，共同促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展。

喉鱗癌；肝細(xì)胞生長因子(HGF)；間質(zhì)表皮轉(zhuǎn)化因子(C-met)；免疫組化

鱗癌是喉最常見的惡性腫瘤，主要發(fā)生在煙酒濫用的成年男性，以鱗狀細(xì)胞分化為特征。病變形成中與基因突變和蛋白的異常表達(dá)相關(guān)〔1〕。肝細(xì)胞生長因子(HGF)是肝細(xì)胞特有的血小板衍生物，具有高增殖性，并可以誘導(dǎo)上皮和成纖維細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞離散，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞離開原發(fā)灶形成遷移〔2,3〕。間質(zhì)表皮轉(zhuǎn)化因子(C-met)是酪氨酸激酶家族的成員，屬于HGF的受體，通過與HGF的特異性結(jié)合后激活多種細(xì)胞信號(hào)通路，使細(xì)胞具有遷移能力〔4,5〕。本實(shí)驗(yàn)關(guān)注喉鱗癌中HGF和C-met的表達(dá)特征及相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 我院經(jīng)病理診斷中鱗狀細(xì)胞癌并行手術(shù)根治的患者59例作為觀察組，年齡43～75歲，平均61.2歲。均留取術(shù)后的石蠟包埋組織。均符合WHO中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理醫(yī)師再次閱片證實(shí)；其中高分化20例，中分化13例，低分化26例。32例聲帶息肉術(shù)后留取的石蠟包埋組織作為對照組，其中男16例，女16例，年齡35～69歲，平均56.7歲。兩組常規(guī)資料均無明顯差異。

1.2 HGF和C-met表達(dá)的檢測 HGF和C-met的表達(dá)均應(yīng)用免疫組化SP法，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)步驟，減少人為誤差。

1.3 免疫組化檢測HGF和C-met的表達(dá) HGF以細(xì)胞質(zhì)(部分可能細(xì)胞膜著色)中出現(xiàn)淡黃色棕褐色顆粒為陽性反應(yīng)細(xì)胞，C-met以細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞膜中出現(xiàn)淡黃色-棕褐色顆粒為陽性反應(yīng)。選擇上皮細(xì)胞分布區(qū)，隨機(jī)計(jì)數(shù)5個(gè)高倍視野，取平均值作為最終的評定結(jié)果，以陽性率<5%定為陰性，以≥5%定為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 兩組中HGF和C-met陽性率的比較 HGF和C-met的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 兩組中HGF和C-met陽性率的比較〔n(%)〕

2.2 觀察組不同臨床特征中HGF和C-met陽性率的比較 HGF和C-met的陽性率與腫瘤的脈管侵犯和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，HGF的陽性率與分化程度相關(guān)。見表2。

表2 觀察組不同臨床特征中HGF和C-met陽性率比較〔n(%)〕

臨床特征nHGFC?met年齡 ≤55歲2913(44 83)15(51 72) >55歲3018(60 00)20(66 67) χ2/P值1 3613/0 24331 3644/0 2428性別 男3920(51 28)24(61 54) 女2011(55 00)11(55 00) χ2/P值0 0733/0 78660 2342/0 6284脈管侵犯 無4822(45 83)25(52 08) 有119(81 82)10(90 91) χ2/P值4 6474/0 03115 5904/0 0181淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無4015(37 50)19(47 50) 有1916(84 21)16(84 21) χ2/P值11 2713/0 00087 1940/0 0073分化程度 高?中339(27 27)18(54 55) 低2622(84 62)17(65 38) χ2/P值19 1768/<0 00010 7080/0 4001分型 聲門上型166(37 50)10(62 50) 聲門型3420(58 82)19(55 88) 聲門下型95(55 56)6(66 67) χ2/P值2 0226/0 36370 4349/0 8046

2.3 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者不同淋巴結(jié)最大徑HGF和C-met陽性率的比較 ≤3 cm和>3 cm分組HGF和C-met陽性率差別不明顯。見表3。

表3 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者不同淋巴結(jié)最大徑HGF和C-met陽性率的比較〔n(%)〕

轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)最大徑nHGFC?met≤3cm1312(92 31)11(84 62)>3cm64(66 67)5(83 33)χ2/P值2 0299/0 15420 0051/0 9432

2.4 觀察組中HGF和C-met表達(dá)的相關(guān)性 HGF和C-met具有正相關(guān)性(r=0.49,P=0.046 3)。

3 討 論

喉鱗癌伴有明顯的鱗狀分化，常有各種各樣的角化形成的角化珠，并且侵襲性生長是鱗狀細(xì)胞癌的首要特征。侵襲表現(xiàn)為穿透基底膜，向下方組織蔓延，并伴有一定程度的間質(zhì)反應(yīng)。脈管侵犯是其惡性的附加特征。這些特征在形成和進(jìn)展過程中常伴有蛋白表達(dá)的失調(diào)、上皮間質(zhì)的轉(zhuǎn)化過程〔6,7〕。HGF位于人類第7號(hào)染色體長臂(7q21.1)，大小約70 kb，包括18個(gè)外顯子和17個(gè)內(nèi)含子。HGF含有6個(gè)結(jié)構(gòu)域，其中α鏈有4個(gè)kringle區(qū)，N端有一發(fā)夾樣的結(jié)構(gòu)區(qū)，而在β鏈上有絲氨酸蛋白酶樣的結(jié)構(gòu)〔8,9〕。其中發(fā)夾樣結(jié)構(gòu)與前2個(gè)kringle區(qū)結(jié)構(gòu)是HGF在激發(fā)生物學(xué)功能中所需要的，β鏈具有的絲氨酸蛋白酶樣結(jié)構(gòu)是C-met與其結(jié)合的位點(diǎn)，與絲氨酸蛋白酶原的催化區(qū)具有一定程度的同源性〔10,11〕。也有觀點(diǎn)認(rèn)為由于激活部位的2個(gè)氨基酸出現(xiàn)了替換，因此其不具有蛋白酶的催化作用，而缺少β鏈的HGF失去了特定功能〔12〕。C-met屬于受體酪氨酸激酶超家族成員之一，是原癌基因MET編碼的具有自主磷酸化活性的跨膜受體，其編碼該受體的基因位于7號(hào)染色體q31區(qū)，約110 kb，包含3個(gè)功能不同的結(jié)構(gòu)域，即胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)〔13,14〕。陳仲偉等〔15〕觀察HGF和C-met在舌部鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)二者在腫瘤中高表達(dá)，并認(rèn)為二者可以作為判斷舌鱗狀細(xì)胞癌生物學(xué)行為、惡性潛能和預(yù)測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移趨勢的參考指標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示HGF和C-met高表達(dá)是促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的重要因素。HGF參與喉黏膜的鱗狀上皮由幼稚到成熟的過程。HGF和C-met之間具有一定的正向調(diào)節(jié)作用。HGF與C-met受體蛋白特異性結(jié)合后，誘導(dǎo)C-met受體蛋白構(gòu)型發(fā)生明顯的改變，并有效激活受體胞內(nèi)蛋白激酶結(jié)構(gòu)域中的酪氨酸蛋白激酶(PTK)，而被激活的PTK不僅可以引起自身酪氨酸殘基磷酸化，還可以對底物蛋白進(jìn)行催化，并經(jīng)瀑布效應(yīng)或級聯(lián)反應(yīng)，使作用的信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)一步放大，最終轉(zhuǎn)入細(xì)胞核內(nèi)的轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)域中，引起細(xì)胞的生物學(xué)行為發(fā)生明顯的改變〔16,17〕。在正常生理?xiàng)l件下，HGF和C-met形成有效的結(jié)合后，可以使上皮細(xì)胞間的連接松散，尤其是腫瘤細(xì)胞的黏附性下降，而易于離開原發(fā)灶，此時(shí)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性增強(qiáng)，細(xì)胞易于遷移，轉(zhuǎn)移潛能升高〔18〕。區(qū)域淋巴結(jié)的最大徑不僅與腫瘤原發(fā)灶、區(qū)域淋巴結(jié)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(TNM)分期有關(guān)，還可能與預(yù)后相關(guān)，提示兩種蛋白表達(dá)與轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的最大徑無關(guān)，但是其大樣本量的觀察結(jié)果尚需要進(jìn)一步研究。

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〔2015-03-19修回〕

(編輯 苑云杰)

李建民(1970-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事耳鼻喉頭頸外科研究。

R739

A

1005-9202(2016)24-6173-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.24.061