HBME-1、Galectin-3及34βE12對甲狀腺微小乳頭狀癌的鑒別診斷價(jià)值

徐永龍丁金旺周榮璟何 偉彭 友張 臥羅中堯潘 鋼項(xiàng)晶晶羅定存葉柳青

HBME-1、Galectin-3及34βE12對甲狀腺微小乳頭狀癌的鑒別診斷價(jià)值

徐永龍1丁金旺2周榮璟3何 偉2彭 友2張 臥2羅中堯2潘 鋼2項(xiàng)晶晶2羅定存2葉柳青3

甲狀腺微小乳頭狀癌；HBME-1；Galectin-3；34βE12；鑒別診斷

甲狀腺微小乳頭狀癌（papillary thyroid microcarcinoma，PTMC）是指腫瘤最大徑≤1.0cm的乳頭狀癌，也是現(xiàn)階段45歲以上人群最好發(fā)的甲狀腺惡性腫瘤[1]。由于體積較小，發(fā)病隱匿，部分PTMC鏡下表現(xiàn)缺乏典型的乳頭狀癌形態(tài)特征，因此與某些甲狀腺良性病變（如乳頭狀增生）不易區(qū)分，尤其是甲狀腺良性病變比較復(fù)雜、細(xì)胞數(shù)目和層次較多、核有一定異型時(shí)與PTMC鑒別尤為困難。隨著免疫組織化學(xué)（IHC）技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，有必要尋找一種敏感性高、特異性強(qiáng)、能夠鑒別甲狀腺腫瘤良惡性的標(biāo)記物來輔助臨床病理診斷。既往文獻(xiàn)[2-4]報(bào)道，人骨髓內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物（HBME-1）、半乳糖凝集素3（Galectin-3）及高分子量角蛋白（34βE12）對鑒別甲狀腺乳頭狀癌與良性疾病具有重要價(jià)值，但迄今在PTMC的研究并不多。為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)PTMC、減少其誤診和漏診，本實(shí)驗(yàn)采用IHC技術(shù)檢測HBME-1、Galectin-3及34βE12在189個(gè)PTMC病灶和106個(gè)甲狀腺良性病變中的表達(dá)狀況，并探討其對PTMC鑒別診斷的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取杭州市第一人民醫(yī)院腫瘤外科2008年8月—2014年8月經(jīng)手術(shù)治療的甲狀腺良惡性疾病患者290例，入選病例臨床資料完整，病理診斷明確，術(shù)前均未接受任何處理。依據(jù)2004 年WHO內(nèi)分泌腫瘤病理分類與診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]分為PTMC組和甲狀腺良性疾病組（對照組）。PTMC組184例，男26例，女158例，年齡19～72歲，平均（47.47± 9.75）歲，病程（18.80±27.23）個(gè)月，PTMC病灶共189個(gè)，腫瘤直徑0.1～1cm，伴有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移54例。對照組106例，男20例，女86例，年齡28～74歲，平均（46.88±9.58）歲，病程（27.47±61.08）個(gè)月，其中結(jié)節(jié)性甲狀腺腫78例、甲狀腺腺瘤16例，橋本氏甲狀腺炎10例，亞急性甲狀腺炎2例。兩組性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。所有患者對手術(shù)及病理檢查均知情同意。

1.2 方 法 所有標(biāo)本均來自于手術(shù)切除的甲狀腺良惡性腫瘤的新鮮組織，均經(jīng)10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，分別進(jìn)行蘇木素-伊紅（HE）和免疫組化染色后光鏡觀察。其中免疫組織化學(xué)（IHC）采用En VisionTM二步染色法，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，梯度乙醇脫水，中性樹膠封固。用已知陽性切片作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。免疫組化主要試劑HBME-1鼠抗人單克隆抗體、Galectin-3鼠抗人單克隆抗體及34βE12鼠抗人單克隆抗體均購自Dako公司，并嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。對可疑病例進(jìn)行反復(fù)檢測。

1.3 結(jié)果判斷 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果由兩名主治以上醫(yī)生獨(dú)立閱片并記錄。本研究以甲狀腺腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)棕黃色～棕褐色顆粒且染色強(qiáng)度高于背景非特異性染色為陽性細(xì)胞。以陽性細(xì)胞所占比例和著色強(qiáng)度為依據(jù)，按半定量方法分級(jí)如下[6]：無明顯陽性細(xì)胞為陰性（-），陽性細(xì)胞數(shù)＜25%為弱陽性（+），陽性細(xì)胞數(shù)＜50%為中度陽性（++），陽性細(xì)胞數(shù)＞50%為強(qiáng)陽性（+++），本研究將（+）、（++）及（+++）均計(jì)為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料（年齡）采用t檢驗(yàn)；兩組病例的性別構(gòu)成及陽性率的比較采用成χ2檢驗(yàn)。采用MedCalc 14.8.1軟件制作受試者工作特征曲線（ROC）及計(jì)算曲線下面積（AUC）。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 兩組患者HBME-1、Galectin-3及34βE12表達(dá)陽性率比較

2 結(jié)果

2.1 兩組患者HBME-1、Galectin-3及34βE12表達(dá)陽性率比較 HBME-1陽性表達(dá)主要見于細(xì)胞膜，少數(shù)可伴有細(xì)胞質(zhì)著色（插頁圖1）；Galectin-3陽性表達(dá)主要見于細(xì)胞質(zhì)，部分可伴有細(xì)胞核著色（插頁圖2）；34βE12陽性表達(dá)則主要見于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜（插頁圖3）。HBME-1、Galectin-3及34βE12在PTMC中的表達(dá)陽性率分別高達(dá)89.95%、95.23%、93.65%，多數(shù)為中等以上強(qiáng)度（++～+++）表達(dá)，且三者同時(shí)表達(dá)陽性的比例高達(dá)79.89%；而HBME-1、Galectin-3及34βE12在甲狀腺良性病變患者的陽性率分別為16.98%、28.3%、18.87%，多數(shù)為弱陽性（+）表達(dá)，且無三者同時(shí)表達(dá)陽性的病例。兩組HBME-1、Galectin-3及34βE12表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），見表1。

2.2 HBME-1、Galectin-3及34βE12對PTMC的鑒別診斷效能 以單獨(dú)檢測HBME-1、Galectin-3及34βE12作為PTMC的判斷標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算各指標(biāo)診斷PTMC的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值和準(zhǔn)確度，三者中以Galectin-3的敏感度最佳，高達(dá)95.23%，HBME-1和Galectin-3則稍低（89.95%、93.65%）；特異度上，Galectin-3最低（71.70%），HBME-1最高（83.02%），34βE12居中（81.13%）；就準(zhǔn)確度而言，三者比較接近，分別為87.45%、86.78%、89.15%。見表2。

通過制作受試者工作特征曲線（ROC）后發(fā)現(xiàn)，HBME-1、Galectin-3及34βE12對鑒別PTMC與甲狀腺良性疾病具有較好的診斷價(jià)值（插頁圖4），進(jìn)一步分析數(shù)據(jù)獲得各指標(biāo)的AUC分別為0.891、0.914、0.932，見表3。

表2HBME-1、Galectin-3及34βE12在PTMC與甲狀腺良性疾病的鑒別診斷效能（%）

表3 HBME-1、Galectin-3及34βE12診斷PTMC 的ROC曲線下面積

3 討論

甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）是甲狀腺癌中最常見的組織學(xué)亞型，近20年甲狀腺癌發(fā)病率不斷飆升，但增長的主要是乳頭狀癌，尤其是直徑≤1cm的甲狀腺微小乳頭狀癌（papillary thyroid microcarcinoma，PTMC）[1]，因?yàn)轶w積小，病灶隱匿，在大體檢查時(shí)常被漏掉。目前臨床上診斷的主要依據(jù)是光鏡下的乳頭狀結(jié)構(gòu)和特征性的細(xì)胞核形態(tài)，但并非所有PTMC都具有典型的鏡下改變，尤其在合并某些良性甲狀腺疾病背景時(shí)診斷常常面臨困難。目前研究[2-4]顯示，人骨髓內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物（HBME-1）、半乳糖凝集素-3（Galectin-3）以及高分子量角蛋白（34βE12）在起源于濾泡的甲狀腺乳頭狀癌中高表達(dá)，在甲狀腺良性疾病中弱表達(dá)或不表達(dá)，推測其可作為診斷甲狀腺微小乳頭狀癌的標(biāo)志物。本研究著重探討 HBME-1、Galectin-3及 34βE12對鑒別PTMC與甲狀腺良性疾病的臨床價(jià)值。

HBME-1是間皮細(xì)胞表面微絨毛的一種抗原成分，最初發(fā)現(xiàn)于惡性間皮瘤，近來逐漸被用于甲狀腺惡性病變的診斷。Ozolins等[2]發(fā)現(xiàn)96%的PTC表達(dá)HBME-1，但在良性甲狀腺組織無表達(dá)。Abd-El Raouf研究[3]也進(jìn)一步證實(shí)，HBME-1在PTC（包括經(jīng)典與濾泡亞型PTC）中的表達(dá)顯著高于良性甲狀腺疾病。在最近一項(xiàng)包含PTMC的研究[7]中，HBME-1對診斷PTC的敏感度為86%，特異度為100%，如聯(lián)合其他指標(biāo)則診斷準(zhǔn)確度更高。本研究發(fā)現(xiàn)HBME-1在189個(gè)PTMC病灶中的表達(dá)陽性率為89.95%，在良性病變中大多數(shù)為陰性，僅少數(shù)弱陽性表達(dá)，這一結(jié)論與以往的文獻(xiàn)報(bào)道相一致[7]，提示HBME-1是診斷PTMC較好的分子標(biāo)記物。

Galectin-3是β-半乳糖苷結(jié)合蛋白，在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、黏附、凋亡和惡變等過程中發(fā)揮重要作用。文獻(xiàn)[3，7]報(bào)道，Galectin-3在正常甲狀腺組織及結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、腺瘤等良性病變中表達(dá)較少，而在PTC的細(xì)胞漿中幾乎均有表達(dá)。Ma等[7]對43例PTC（包括經(jīng)典型、濾泡亞型和微小癌）和16例良性甲狀腺組織的研究發(fā)現(xiàn)，Galectin-3在甲狀腺良惡性疾病中的靈敏度為95.3%，特異度為100%。本研究中，Galectin-3在 PTMC中的表達(dá)陽性率最高，為95.23%，且多數(shù)為中等以上強(qiáng)度（++～+++）表達(dá)，ROC曲線分析顯示其對鑒別甲狀腺良惡性病變的AUC值達(dá)0.914，說明Galectin-3在PTMC中有較強(qiáng)的診斷價(jià)值。值得注意的是，本研究還發(fā)現(xiàn)Galectin-3在甲狀腺良性病變中也有28.3%存在弱陽性（+）表達(dá)，Coli等[8]認(rèn)為甲狀腺良性病變中Galectin-3的表達(dá)說明該病變具有分化為癌（主要為甲狀腺乳頭狀癌）的趨勢，這進(jìn)一步印證了Galectin-3在PTMC發(fā)生發(fā)展中的作用，因此筆者建議對該部分病例應(yīng)加強(qiáng)隨訪與監(jiān)測。

高分子量角蛋白（34βE12）是前列腺基底細(xì)胞的特異性標(biāo)記物，其在前列腺及乳腺良、惡性病變鑒別診斷，尿路上皮癌與前列腺癌鑒別診斷及肺神經(jīng)內(nèi)分泌癌與非神經(jīng)內(nèi)分泌癌鑒別診斷中具有一定價(jià)值[9]。目前應(yīng)用于甲狀腺乳頭狀癌的研究并不多，而在PTMC方面則未見研究報(bào)道。Hashimoto等研究[4]發(fā)現(xiàn)大多數(shù)PTC中34βE12呈陽性表達(dá)，而僅有極少數(shù)甲狀腺良性病變呈陽性表達(dá)，34βE12在PTC中的靈敏度為82.5%，特異度為100%，診斷準(zhǔn)確度為92.0%。國內(nèi)林茂華等[10]研究顯示，86例PTC中84例呈中度以上強(qiáng)度的陽性表達(dá)（++～+++），60例濾泡性腺瘤中僅有6例呈中度以下強(qiáng)度的陽性表達(dá)（+～++），兩者之間具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。本研究顯示，34BE12對鑒診斷別PTMC與甲狀腺良性疾病的AUC為0.932，高于HBME-1和Galectin-3，其診斷的靈敏度為93.65%，特異度81.13%，陽性預(yù)測值89.95%，陰性預(yù)測值97.76%，準(zhǔn)確度89.15%。因此，筆者認(rèn)為34βE12也可以作為診斷PTMC的重要標(biāo)記物。

綜上所述，HBME-1、Galectin-3及34βE12在PTMC的表達(dá)顯著高于良性病變，其對診斷PTMC的敏感性和特異性均較高，可以作為臨床上診斷PTMC比較理想的免疫組化標(biāo)志物，可在臨床病理診斷中推廣應(yīng)用。

［1］Veiga LH，Neta G，Aschebrook-Kilfoy B，et al.Thyroid cancer incidence patterns in Sao Paulo，Brazil，and the U.S. SEER Program，1997-2008［J］.Thyroid，2013，23（6）：748-757.

［2］Ozolins A，Narbuts Z，Strumfa L，et al.Immunohistochemical expression of HBME-1，E-cadherin，and CD56 in the differential diagnosis of thyroidnodules［J］.Medicina（Kaunas），2012，48（10）：507-514.

［3］ Abd-El Raouf SM，Ibrahim TR.Immunohistochemical expression of HBME-1 and galectin-3 in the differential diagnosis of follicular-derivedthyroid nodules［J］.Pathol Res Pract，2014，210（12）：971-978.

［4］Hashimoto K，Morimoto A，Kato M，et al.Immunocytochemical analysis for differential diagnosis of thyroid lesions using liquid-based cytology［J］.Nagoya允Med Sci，2011，73（1-2）：15-24.

［5］Ronald AD，Ricardo VL，Philipp UH，et al.World Health Organization classification of tumors pathology and genetics of tumors of endocrine organs［M］.United Kingdom and Europe：Oxford University Press，2004：57-66.

［6］佟杰，王巖，笪冀平，等.CK19、HBME-1、Galectin-3等表達(dá)在甲狀腺乳頭狀微小癌與良性病變鑒別診斷中的意義［允］.中華腫瘤雜志，2011，33（8）：599-604.

［7］Ma H，Xu S，Yan J，et al.The value of tumor markers in the diagnosis of papillary thyroid carcinoma alone and in combination［J］.Pol允Pathol，2014，65（3）：202-209.

［8］Coli A，Bigotti G，Parente P，et al.A typical thyroid nodules express both HBME-1 and Galectin-3，two phenotypic markers of papillary thyroid carcinoma［J］.Exp Clin Cancer Res，2007，26（2）：221-227.

［9］Yamada K，Maeshima AM，Tsuta K，et al.Combined highgrade neuroendocrine carcinoma of the lung：clinicopathological and immunohistochemical study of 34 surgically resected cases［J］.Pathol Int，2014，64（1）：28-33.

［10］林茂華，毛瑛玉，李婷，等.CK19、CyclinD1、HBME-1、34βE12、TPO、galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)及意義［允］.實(shí)用癌癥雜志，2013，28（6）：617-619.

（收稿：2015-07-01 修回：2015-08-20）

1浙江省松陽縣人民醫(yī)院內(nèi)科（松陽 323400）；2杭州市第一人民醫(yī)院（南京醫(yī)科大學(xué)附屬杭州醫(yī)院）腫瘤外科（杭州310006）；3杭州市腫瘤醫(yī)院病理科（杭州310002）

丁金旺，Tel：0571-56006981；E-mail：zjlsdjw@163.com