原花青素對應激大鼠hs-CRP、TNF-α和h-FABP表達的影響

魏　嚴　吳紅芳　劉安麗　華春秀　王　靜

(南陽醫學高等專科學校病理學教研室，河南　南陽　473061)

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原花青素對應激大鼠hs-CRP、TNF-α和h-FABP表達的影響

魏嚴吳紅芳劉安麗華春秀王靜

(南陽醫學高等專科學校病理學教研室，河南南陽473061)

摘要〔〕目的探討原花青素對應激大鼠超敏C-反應蛋白(hs-CRP)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和人心型脂肪酸結合蛋白(h-FABP)表達的作用。方法選擇Wistar雄性大鼠60只，根據隨機數字表法分成對照組、模型組及原花青素組各20只。對模型組及原花青素組進行足底電刺激應激建模，對照組不進行建模，持續20 d；造模前對原花青素組胃灌注原花青素(100 mg·kg-1·d-1)，而對照組及模型組均胃灌注等劑量的生理鹽水20 d。另選16只Wistar雄性大鼠進行亞組實驗，根據隨機數字表法分成A1、A2、A3、A4亞組，每組4只，均使用原花青素進行干預，其中A1組使用劑量為100 mg·kg-1·d-1；A2組為50 mg·kg-1·d-1，刺激時間均為20 d；A3和A4組使用劑量均為100 mg·kg-1·d-1，但A3組10 d，A4組的刺激時間為15 d。檢測各組大鼠血漿中的hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平以及心肌梗死范圍；并采用多元線性回歸方法分析影響原花青素組hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平的相關因素。結果原花青素組及模型組的hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平均顯著高于對照組，且原花青素組低于模型組(均P<0.05)；對照組大鼠未發現心肌梗死，原花青素組與模型組的心肌梗死范圍顯著高于對照組，且原花青素組低于模型組(P<0.05)；通過多元線性回歸分析法分析可知，原花青素劑量、足底電刺激時間、灌胃時間及心肌梗死范圍均為影響原花青素組hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平的相關因素。結論原花青素能夠明顯降低應激大鼠的hs-CRP、TNF-α以及h-FABP等指標的表達，具有預防和治療心臟損傷的作用，值得臨床深入研究。

關鍵詞〔〕原花青素；超敏C反應蛋白；腫瘤壞死因子；心型脂肪酸結合蛋白

第一作者：魏嚴(1982-)，女，碩士，講師，主要從事病理學與病理生理學、心臟應激保護方面的研究。

近年來有報道發現原花青素具有清除氧自由基和抗感染性反應及抗纖維化等諸多作用，但關于其對于心臟損傷的影響作用卻無相關報道〔1〕。超敏C反應蛋白(hs-CRP)是機體遭受微生物入侵亦或組織損傷等炎性刺激后肝細胞合成的一種急性時相蛋白，可作為心臟炎癥反應的標志物；腫瘤壞死因子(TNF-α)是可直接殺傷機體內腫瘤細胞而對正常細胞并無明顯影響的一種細胞因子，近年來研究顯示二者水平均在心臟病變患者中存在較大變化，可作為患者心臟損傷的評價指標。人心型脂肪酸結合蛋白(h-PABP)在心臟細胞質內含量較高，可對心肌收縮供應能量，是一種新型的心臟損傷標志物。本研究旨在探索原花青素對心臟損傷的臨床治療效果及機制。

1資料和方法

1.1臨床資料選擇Wistar雄性大鼠60只(南陽醫學高等專科學校病理學教研室提供)，8～10周齡，體重220～260 g，平均(250.4±13.5)g。根據隨機數字表法分成對照組、模型組及原花青素組各20只。另選16只Wistar雄性大鼠進行亞組實驗，8～10周齡，體重220～250 g，平均(248.6±12.6)g。根據隨機數字表法分成A1、A2、A3、A44個亞組，每組4只。各組大鼠的周齡、體重差異無統計學意義(P>0.05)具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1基礎實驗對模型組及原花青素組大鼠制作足底電刺激應激模型，將大鼠于玻璃箱內固定30 min，后移至電足休克籠內進行足底電刺激30 min，持續20 d；對照組大鼠不進行足底電刺激。造模前對原花青素組大鼠行胃灌注原花青素，劑量為100 mg·kg-1·d-1，而對照組及模型組均胃灌注等劑量的生理鹽水，各組灌胃時間均為20 d。

1.2.2原花青素延伸實驗對另16只大鼠均按相同方法建立足底電刺激應激模型，并應用原花青素進行干預。其中A1和A2組刺激時間均為20 d，但A1組使用原花青素劑量為100 mg·kg-1·d-1；A2組為50 mg·kg-1·d-1。A3和A4組均使用劑量為100 mg·kg-1·d-1原花青素進行干預，但A3組的刺激時間為10 d，A4組的刺激時間為15 d。四組的其他處理方法相同。

1.3觀察指標

1.3.1處死大鼠后剔出心房、右室和藍染區域利用日立7600型全自動生化分析儀(日本日立公司生產)檢測各組大鼠血漿的hs-CRP、TNF-α水平，試劑盒均來自北京科美東亞生物公司，嚴格依照說明書進行操作。

1.3.2冰凍切片后經TTC染色、分離、濾紙吸干利用德靈全自動生化免疫分析儀(德靈公司生產)檢測h-FABP水平，試劑盒為儀器自配，檢測方法采用雙抗體夾心酶聯免疫法。

1.3.3心肌梗死范圍指標稱重計算心肌梗死區質量在左心室質量中的比例(IW/WLV)以及缺血區質量在左心室質量中的比例(WR/WLV)。

1.4統計學方法采用SPSS13.0軟件進行方差分析和SNK-q檢驗。相關因素分析使用多元線性回歸分析法。

2結果

2.1各組大鼠血漿中hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平比較原花青素組及模型組的hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平均顯著高于對照組，且原花青素組低于模型組(均P<0.05)。見表1。

2.2各組大鼠的心肌梗死范圍情況比較對照組大鼠未發現心肌梗死，且原花青素組WR/WLV〔(33.7±2.2)%〕、IW/WLV〔(21.4±3.5)%〕低于模型組〔(45.2±7.9)%、(31.6±5.8)%〕(P<0.05)。

2.3影響原花青素組hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平的相關因素分析hs-CRP、TNF-α及h-FABP三者之間的變化情況趨于一致，三者均呈現出共同上升(下降)的趨勢，因此將其三者作為一個整體進行研究，將原花青素組hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平作為因變量，將原花青素劑量、足底電刺激時間、灌胃時間、心肌梗死范圍作為自變量，通過多元線性回歸分析法分析可知，原花青素劑量、足底電刺激時間、灌胃時間及心肌梗死范圍均為影響原花青素組hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平的相關因素(P<0.05)。見表2。

表1　各組大鼠血漿中hs-CRP、TNF-α及

與對照組比較:1)P<0.05；與模型組比較:2)P<0.05

表2　影響原花青素組hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平的

3討論

為急性心肌梗死患者檢測心肌損傷標志物具有一定的防治作用。hs-CRP、TNF-α作為心臟損傷的常用指標，近年來研究較多，而h-FABP作為一種新型心臟損傷標志物，則未受到足夠關注，邱潔等〔2，3〕研究指出，h-FABP能在較大程度上反映患者的心臟損傷嚴重度，對其進行檢查具有重要意義。Verardo等〔4〕報道，原花青素能較好地預防大鼠的心肌損傷，對有心肌梗死的大鼠具有較好的癥狀緩解作用。h-FABP作為心臟細胞質內含量較高的蛋白質，可對心肌收縮供應能量，若心肌細胞處于缺血狀態，則其能夠由心肌細胞釋放進入血液，從而為心肌的收縮供應能量。代謝動力學實驗結果顯示，h-FABP的血漿含量水平在心肌梗死產生的3 h后即可上升至峰值，同時其在有不穩定心絞痛的患者群體中的水平亦有明顯上升，即使是微小性心肌梗死，h-FABP水平也會上升〔5〕。hs-CRP是一類價值較高的心臟標志物，其在心肌梗死時的含量明顯上升，同時在心肌缺血時亦有明顯的上升趨勢。同時心臟是形成內源性TNF-α的重要區域，TNF-α能夠經過各類途徑誘導炎癥反應及細胞凋亡，因此上述三類指標均可用于評價心臟損傷的情況〔6〕。本研究結果提示足底電刺激能對大鼠產生應激反應，造成hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平顯著增高；而原花青素干預能夠有效改善其炎性癥狀，抑制心肌細胞的損傷，與Baselga-Escudero等〔7〕的報道結果相符合。同時，證實了原花青素能夠明顯改善大鼠的心肌損傷。此外，研究還提示，足底電刺激時間延長可能加重大鼠的心肌損傷，造成心肌梗死范圍增大，從而使hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平增高；而原花青素具有抗氧化作用及對心肌細胞的保護作用，劑量越高、灌胃時間越長，其作用效果越明顯。因此原花青素劑量、灌胃時間、足底電刺激時間及心肌梗死范圍均能在一定程度上影響原花青素組hs-CRP、TNF-α及h-FABP的水平變化。Zhang等〔8〕報道，原花青素的應用劑量為100 mg·kg-1·d-1時對心肌損傷的預防作用明顯大于50 mg·kg-1·d-1時的劑量，這再次證實了本文的研究結果。

參考文獻4

1Luiz RL，Vila TV，de Mello JC，etal.Proanthocyanidins polymeric tannin from Stryphnodendron adstringens are active against Candida albicans biofilms 〔J〕.BMC Complement Altern Med，2015；19(15)：68-9.

2邱潔，曹愛紅，張萍，等.葡萄籽原花青素聯合阿托伐他汀治療老年頸動脈粥樣硬化患者的觀察〔J〕.中華老年醫學雜志，2012；31(5)：371-5.

3鐘書輝，張艷，李樂雯，等.原花青素對心肌缺血再灌注大鼠血清T-AOC、CRP及NO的影響〔J〕.中國生化藥物雜志，2011；32(3)：228-9.

4Verardo V，Cevoli C，Pasini F，etal.Analysis of oligomer proanthocyanidins in different barley genotypes using high-performance liquid chromatography-fluorescence detection-mass spectrometry and near-infrared methodologies 〔J〕.J Agric Food Chem，2015；63(16)：4130-7.

5趙雅寧，曹書華，郭霞，等.葡萄籽原花青素對慢性間歇性低氧大鼠腦組織炎癥反應及學習記憶能力的影響〔J〕.鄭州大學學報(醫學版)，2014；49(1)：29-32.

6苗智如，廖麗娜，張敏敏，等.原花青素及其組合物對泡沫細胞形成的影響〔J〕.浙江醫學，2013；35(18)：1644-7.

7Baselga-Escudero L，Pascual-Serrano A，Ribas-Latre A，etal.Long-term supplementation with a low dose of proanthocyanidins normalized liver miR-33a and miR-122 levels in high-fat diet-induced obese rats 〔J〕.Nutr Res，2015；35(4)：337-45.

8Zhang H，Sun XQ，Cao JM，etal.Protective effect of epimedium combined with oligomeric proanthocyanidins on exercise-induced renal ischemia-reperfusion injury of rats 〔J〕.Int J Clin Exp Med，2014；7(12)：5730-6.

〔2015-05-11修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

基金項目：南陽市科技攻關計劃項目(No.2014GG039)

中圖分類號〔〕R541〔

文獻標識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2016)01-0040-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.018