肝細胞肝癌組織中miR-21表達水平及與預后的相關性

劉　峰　梁國棟　王　巖　劉海瑞　王　斌　楊玉波

(吉林省腫瘤醫院肝膽胰胃外科，吉林　長春　130012)

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肝細胞肝癌組織中miR-21表達水平及與預后的相關性

劉峰梁國棟王巖劉海瑞王斌楊玉波

(吉林省腫瘤醫院肝膽胰胃外科，吉林長春130012)

摘要〔〕目的探討肝細胞肝癌患者組織中miR-21的表達水平及其預后意義。方法共收集50例肝細胞肝癌的患者，采用免疫組化法檢測肝細胞肝癌及配對癌旁組織中miR-21的表達水平，分析miR-21蛋白的表達與患者臨床病理特征及預后生存的相關性。結果肝細胞肝癌組織中miR-21表達水平顯著高于癌旁組織(58.0% vs 6.0%，χ2= 31.07,P<0.000 1)。miR-21高表達與臨床T分期相關(χ2=8.043,P=0.018)；但miR-21蛋白表達水平與患者年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期、N分期及分化程度均無顯著關聯(P>0.05)。高表達miR-21的肝細胞肝癌患者總生存時間明顯降低(P=0.032)，但患者無疾病進展生存期差異無統計學意義(P=0.116)。 結論肝細胞肝癌患者miR-21高表達可能作為腫瘤患者預后不良的重要標志物之一，而與腫瘤的發生及發展的機制性研究尚需進一步驗證。

關鍵詞〔〕 肝細胞肝癌；miR-21；免疫組織化學

第一作者：劉峰(1968-)，男，副主任醫師，主要從事消化道腫瘤外科的臨床研究。

目前雖然有多種臨床手段治療肝細胞肝癌，但患者預后差，且5年生存率僅約10%〔1〕。miRNA作為內源性非編碼小分子RNA，參與至少30%蛋白編碼基因的調控及多種疾病發生與進展〔2〕。研究顯示miR-21可能成為肝癌不良預后的標志物之一〔3〕。miR-21高表達在多種腫瘤中，且其表達程度參與腫瘤的發生與發展，但在肝癌中的研究尚未見報道，且缺乏預后生存的證據。本研究擬通過免疫組化方法檢測肝細胞肝癌樣本中miR-21的表達水平及其預后意義。

1材料與方法

1.1研究對象收集2013年1月至2014年1月吉林省腫瘤醫院肝膽外科住院肝細胞肝癌患者50例，其中男29例，女21例。年齡>50歲28例，<50歲22例；腫瘤大小<5 cm 20例，>5 cm 30例；低分化29例，中/高分化21例；臨床分期ⅡA期6例，ⅡB期7例，ⅢA期12例，ⅢB期14例，ⅢC期11例；T分期：T2期9例，T3期21例，T4期20例；N分期：N0 7例，N1期15例，N2期13例，N3期15例。由兩位臨床病理醫生根據肝細胞肝癌臨床病理分型對患者評定TNM分期。術后將患者腫瘤組織與癌旁組織分別進行病理分析，癌旁組織選擇正常的肝組織，本實驗已獲吉林省腫瘤醫院倫理委員會批準。

1.2免疫組化將石蠟切片置于60℃烤箱中烘片3 h，脫蠟至水后浸于枸櫞酸緩沖溶液中高壓復性5 min，選用3%的H2O2封閉內源性過氧化酶并使用羊血清抑制非特異性結合。以1∶1 000倍稀釋miR-21抗體(美國CST公司)并4℃過夜。染色強度判定由兩位來自吉林省腫瘤醫院病理醫生負責。根據染色陽性細胞數進行評分： 0分為無色，1分為<10%細胞，2分為10%～50%細胞，3分>50%細胞表達miR-21。根據染色評分結果將患者分為miR-21高表達(2～3分)與低表達(0～1分)。

1.3統計學方法應用SPSS17.0軟件進行χ2檢驗、t檢驗和Kaplan-Meier。

2結果

2.1肝細胞肝癌及癌旁組織中miR-21蛋白的表達水平50例樣本中29例患者miR-21高表達，其中評分2分11例，3分18例。配對的癌旁組織3例為miR-21高表達，miR-21在肝癌中的表達明顯高于癌旁組織(χ2= 31.07,P<0.000 1)。

2.2miR-21表達水平與肝細胞肝癌臨床病理因素的相關性研究miR-21高表達與T分期相關(P= 0.018)。但miR-21表達水平與患者年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期及分化程度均無顯著關聯(P>0.05)。見表1。

表1　miR-21表達水平與肝細胞肝癌患者

2.3預后統計統計患者隨訪時間總計為27個月，其中失訪4例，失訪率達8.0%。高表達miR-21的肝細胞肝癌患者總生存時間明顯短于miR-21低表達者(P=0.032)(圖1)，而無疾病進展生存時間則無顯著性差異(P=0.116)(圖2)。

圖1　miR-21表達水平與患者總生存率的相關性

圖2　miR-21表達水平與患者無疾病生存率的相關性

3討論

80%的肝細胞肝癌患者對于化療療效不佳，而化療敏感的患者在治療一段時間后也將產生耐藥。近來已有研究證實，miRNA是一種非編碼RNA(UTR)，通過靶基因 3'UTR的結合來調節靶基因表達程度，從而參與腫瘤細胞生長、增殖、分化和凋亡等信號通路的調控過程〔4〕。相關研究顯示miR-21在肝細胞肝癌耐藥機制中起著重要作用，參與細胞趨化運動并與腫瘤細胞侵襲轉移緊密關聯。miR-21在高表達的乳腺癌、結直腸癌及胃癌等惡性腫瘤中患者預后生存差〔5，6〕，Romanska等〔7〕研究顯示miR-21表達水平與臨床分化程度無相關性(P<0.05)，但miR-21表達陽性率隨著腫瘤臨床分期升高而增加。而有關miR-21在肝細胞肝癌中的預后生存研究少見。

在進一步實驗中本研究團隊將通過基礎實驗驗證miR-21在人肺癌細胞系(hepG2)等肝癌細胞中的生物學作用，進一步表明miR-21在肝癌細胞中表達的相關機制研究，為臨床肝細胞肝癌的診斷、預后評估和臨床新治療模式提供前期基礎。

參考文獻4

1Ferlay J,Shin HR,Bray F,etal.Estimates of worldwide burden of cancer in 2008:GLOBOCAN 2008〔J〕.Int J Cancer,2010;127(12):2893-917.

2Wierstra L,Alves J,Fox M.A typical proliferation associated transcription factor〔J〕.Biol Chem，2007;388(12):1257-74.

3Kang BW,Lee D,Chung HY,etal.Tetraspanin CD151 expression associated with prognosis for patients with advanced gastric cancer〔J〕.J Cancer Res Clin Oncol,2013;139(11):1835-43.

4Allen KE,Weiss GJ.Resistance may not be futile:microRNA biomarkers for chemoresistance and potential therapeutics〔J〕.Mol Cancer Ther,2010;9(12);3126-36.

5Zhong M,Ma X,Sun CJ,etal.MicroRNAs reduce tumor growth and contribute to enhance cytotoxicity induced by gefitinib in non-small cell lung cancer〔J〕.Chem Biol interact,2010;184(3):431-8.

6Z?ller M.Tetraspanins:push and pull in suppressing and promoting metastasis〔J〕.Nat Rev Cancer,2009;9(1):40-55.

7Romanska HM,Berditchevski F.Tetraspanins in human epithelial malignancies〔J〕.J Pathol,2011;223(1):4-14.

〔2015-01-07修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

通訊作者：梁國棟(1983-)，男，主治醫師，博士，主要從事普通外科的臨床研究。

基金項目：吉林省科技廳項目(200705274)

中圖分類號〔〕R735.2〔

文獻標識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2016)01-0105-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.047