大理地區不同血清學檢測試劑對雞血中HEV的檢測

劉 敏 李麗娟（通訊作者） 肖 文 鄒云梅 耿成銳

（1.大理大學公共衛生學院，云南大理671000；2.大理大學東喜瑪拉雅資源與環境研究所，云南大理671000；3.大理大學農學與生物科學學院，云南大理671000）

大理地區不同血清學檢測試劑對雞血中HEV的檢測

劉 敏1，2李麗娟1（通訊作者） 肖 文2鄒云梅3耿成銳3

（1.大理大學公共衛生學院，云南大理671000；2.大理大學東喜瑪拉雅資源與環境研究所，云南大理671000；3.大理大學農學與生物科學學院，云南大理671000）

目的 了解大理地區雞中戊型肝炎病毒（HEV）感染情況及比較兩家公司生產的HEV檢測試劑對雞血清HEV抗體的檢測效果。方法 分別采集大理古城和下關菜市場雞血92份和91份，應用兩家公司生產的HEV抗體試劑盒檢測雞血清中HEV抗體。結果 183份雞血清中用試劑A1、A2、B1和B2檢測，分別檢出2份、2份、2份和3份陽性結果，陽性率分別為1.09%、1.09%、1.09%和1.64%。兩家公司生產的戊型肝炎病毒IgM抗體診斷試劑和戊型肝炎病毒IgG抗體診斷試劑對同一份雞血清檢測，沒有相同的陽性結果，陰性結果符合率很高。結論 大理地區雞中存在HEV，同時兩家公司生產的HEV抗體檢測試劑可以作為研究雞群中HEV的流行病調查，但檢測靈敏度不高，需研制更靈敏的檢測試劑。

戊型肝炎病毒；雞；HEV-抗體檢測試劑；血清學檢測

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus，HEV）引起的一種急性限性傳染性疾病，主要經糞-口途徑傳播[1]，全球廣泛分布。研究顯示HEV是一種無囊膜的單股正鏈RNA病毒[2]，一般呈不規則球形，基因組全長約7.3kb[3]，包含三個開放讀碼框分別編碼具有各自功能的蛋白質，其中用于檢測HEV的IgM抗體診斷試劑盒和IgG抗體診斷試劑盒就是通過這些蛋白質的特殊抗原表位進行識別[4-5]。機體感染HEV一段時間后，首先產生的是IgM抗體，但IgM抗體在急性期后較快消退，一般可持續2～3個月[6]。而IgG抗體出現晚于IgM抗體，但在急性期內含量持續增多，一直到恢復期，并且可繼續維持高水平1.0～4.5年，甚至更久[7]。而禽戊型肝炎病毒（Avian hepatitis E virus，Avian HEV）在2004年第八次國際病毒分類委員會上與豬戊型肝炎病毒被歸為戊肝病毒屬（Hepevirus），其與人戊型肝炎病毒和豬戊型肝炎病毒的同源性較低，但在ORF2蛋白上存在共有的抗原表位，因而采用檢測人戊型肝炎病毒抗體的試劑在理論上是可行的，但檢驗的效果可能不理想。本實驗采用兩家公司都生產的IgM抗體診斷試劑盒和IgG抗體診斷試劑盒對大理地區183份雞血血清進行HEV抗體檢驗，探究大理地區雞中HEV的存在狀況及比較兩家公司生產的HEV檢測試劑檢驗效果哪種更好。

1 資料與方法

1.1 一般資料：雞血血清樣本采集時間為2015年7月23日，分別從古城菜市場采集雞血血清92份，從下關泰興菜市場采集雞血血清91份，共183份。

1.2 試劑：試劑A1：上海科華生物工程股份有限公司生產的戊型肝炎病毒IgM抗體診斷試劑盒（酶聯免疫法）；試劑A2：上海科華生物工程股份有限公司生產的戊型肝炎病毒IgG抗體診斷試劑盒（酶聯免疫法）。試劑B1：北京萬泰藥業有限公司生產的戊型肝炎病毒IgM抗體診斷試劑盒（酶聯免疫法）；試劑B2：北京萬泰藥業有限公司生產的戊型肝炎病毒IgG抗體診斷試劑盒（酶聯免疫法）。以上實際操作及結果判定按照各自的說明書嚴格進行。（注：+表示陽性結果，-表示陰性結果，陰性表示陰性對照，陽性表示陽性對照，空白表示空白對照）。

1.3 方法：無菌采集大理地區古城和和下關兩菜市場的雞血血清，靜置過夜分離血清。分別用試劑A1、A2和試劑B1、B2對同一份雞血血清標本進行實驗室檢測，使用Excel處理軟件分別比較試劑A1和B1對雞血血清中IgM抗體檢測結果，比較試劑A2和B2對雞血血清中IgG抗體檢測結果。

2 結果

2.1 大理地區雞血血清戊型肝炎病毒抗體檢測：使用戊型肝炎病毒抗體檢測試劑盒A1、A2、B1和B2對大理地區雞血血清中戊型肝炎病毒抗體的檢測結果見表1。

表1 大理地區雞血血清戊型肝炎病毒抗體檢測結果

2.2 對古城92份雞血血清IgM抗體檢測結果：采用試劑A1對古城菜市場采集的雞血血清的IgM抗體進行檢測，只有A3和B10孔是陽性結果，陽性率為2.17%（2/92），其余結果都是陰性結果。

采用試劑B1對古城菜市場采集的雞血血清的IgM抗體進行檢測，只有C1孔是陽性結果，陽性率為1.09%（1/92），其余結果都是陰性結果。

由以上試驗結果可發現，試劑A1和B1陽性結果相同的為0份，陰性結果相同的有89份。

2.3 對下關91份雞血血清IgM抗體檢測結果：采用試劑A1對下關菜市場采集的雞血血清的IgM抗體進行檢測，無陽性結果，結果都是陰性結果。

采用試劑B1對古城菜市場采集的雞血血清的IgM抗體進行檢測，只有H3孔是陽性結果，陽性率為1.10%（1/91），其余結果都是陰性結果。

由以上試驗結果可發現，試劑A1和B1陽性結果相同的為0份，陰性結果相同的有90份。

2.4 對古城92份雞血血清IgG抗體檢測結果：采用試劑A2對古城菜市場采集的雞血血清的IgG抗體進行檢測，無陽性結果，結果都是陰性結果。

采用試劑B2對古城菜市場采集的雞血血清的IgG抗體進行檢測，只有D2孔是陽性結果，陽性率為1.09%（1/92），其余結果都是陰性結果。

由以上試驗結果可發現，試劑A2和B2陽性結果相同的為0份，陰性結果相同的有91份。

2.5 對下關91份雞血血清IgG抗體檢測結果：采用試劑A2對下關菜市場采集的雞血血清的IgG抗體進行檢測，C5和D2孔是陽性結果，陽性率為2.20%（2/91），其余結果都是陰性結果。

采用試劑B2對下關菜市場采集的雞血血清的IgG抗體進行檢測，B2和C2孔是陽性結果，陽性率為2.20%（2/91），其余結果都是陰性結果。

由以上試驗結果可發現，試劑A2和B2陽性結果相同的為0份，陰性結果相同的有87份。

3 討論

本實驗研究顯示A1、A2、B1和B2對大理地區雞血血清中HEV抗體的陽性率分別為1.09%、1.09%、1.09%和1.64%，結果證明了HEV在大理地區雞群中存在，與耿彥生[8]等研究報道的雞血清抗體陽性率3.58%的結果相似。

試劑A1和試劑B1對HEV-IgM抗體檢測陽性檢出率相同，該結果與王昌敏等[9]研究表明的兩種戊型肝炎病毒IgM抗體捕獲法診斷試劑對各類樣本檢測結果完全相同的研究結果相反。出現上述情況的原因可能是雞中的HEV屬于禽戊型肝炎病毒，與哺乳動物HEV有較大的差異，使得采用基因Ⅰ型HEV結構區內ORF2和ORF3重組蛋白或合成肽為抗原[11]和以E2蛋白為構象型抗原[5]的兩家公司生產的診斷試劑檢出不相符。試劑B2對HEV-IgG抗體檢測陽性檢出率略高于試劑A2，與閆強等實驗結論一致。

由于禽HEV和人HEV的ORF2區域在氨基酸水平具有56%～62%同源性，ORF2蛋白抗原及相應單克隆或多克隆抗體存在交叉反應，因此用哺乳動物HEV ORF2蛋白為抗原制備HEV檢測試劑可以檢測禽HEV抗體，但檢測的靈敏度可能不高。因此進行HEV在雞群中的流行病調查，采取這兩家任一廠家生產的診斷試劑盒都是可行的，但是要更準確研究雞中HEV存在狀況，研制針對禽HEV的檢測試劑是很有必要的。

［1］ D awson GJ，Mushahwar IK，Chau KH，et al.Detection of longlasting antibody to hepatitis E virus in a US traveler to Pakistan［J］.Lancet，1992，340（8816）：426-427.

［2］ Balayan MS.Evidence for a virus in non-A，non-B hepatitis transmitted via the fecal-oral route［J］.Intervirology，1983，20（1）：23-31.

［3］ Reyes GR，Purdy MA.Isolation of cDNA from the virus responsible for enterically transmitted non-A，non-B hepatitis［J］.Science，1990，247（4948）：1335.

［4］ 楊燕，韓紅星，李小勇，等.兩種方法檢測戊型肝炎病毒IgM抗體的臨床驗證［J］.檢驗醫學與臨床，2014，11（22）：3183-3184.

［5］ 閆強，杜海蓮，王穎彬，等.兩種戊型肝炎IgG抗體檢測試劑的比較［J］.中國人獸共患病學報，2008，24（12）：1087-1099.

［6］ Emerson SU，Purcell RH.Hepatitis E virus［J］.Rev Med Virol，2003，13（3）：145-154.

［7］ Seriwatana J，Shrestha MP，Scott RM，et al.Clinical and epidemiological relevance of quantitating hepatitis E virus specific immunoglobulin M［J］.Clin Diagn Lab Immunol，2002，9（5）：1072-1078.

［8］ 耿彥生，張碩，趙晨燕，等.我國家禽戊型肝炎病毒感染情況的調查［J］.中國人獸共患病學報，2010，26（5）：429-432.

［9］ 王昌敏，劉長明，趙素元，等.兩種HEV-IgM抗體捕獲法診斷試劑盒的實驗室評價與分析［J］.新疆醫學，2006，36：69-70.

［10］Haqshenas G，Shivaprasad HL，Woolcock PR，et al.Genetic identification and characterization of a novel virus related to human hepatitis E virus from chickens with hepatitis splenomegaly syndrome in the United States［J］. J Gen Virol，2001，82（Pt10）：2449-2462.

［11］Dawson GJ，Chau KH，Cabal CM，et al.Solid-phase enzymelinked immunosorbent assay for hepatitis E virus IgG and IgM antibodies utilizing recombinant antigens and synthetic peptides［J］.J Virol Methods，1992，38（1）：175-186.

R331

B 學科分類代碼： 31044

1001-8131（2016）05-0553-02

2016-05-04

云南省科技廳基礎研究面上項目（2013FB060）；大理市科學技術項目（2014F06）