T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞及B細(xì)胞在急性原發(fā)免疫性血小板減少癥患兒外周血中的表達(dá)

蘇文芳，陳梅英，鄭振光

(龍巖市第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建 龍巖 364003)

T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞及B細(xì)胞在急性原發(fā)免疫性血小板減少癥患兒外周血中的表達(dá)

蘇文芳，陳梅英，鄭振光

(龍巖市第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建 龍巖 364003)

目的 觀察T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞及B細(xì)胞在急性原發(fā)免疫性血小板減少癥(ITP)患兒外周血中的表達(dá)情況。方法選取我院2015年2月至2016年2月收治的30例急性ITP患兒作為觀察組，另選同期來(lái)我院體檢的30例健康兒童作為對(duì)照組，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩組受試者外周靜脈血中T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞及B細(xì)胞水平，并進(jìn)行比較。結(jié)果觀察組患兒外周靜脈血中的CD8+水平為(28.04±4.16)%，明顯高于對(duì)照組的(21.21±2.83)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；觀察組患兒血清中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平分別為(54.35±4.86)%、(25.08±3.73)%、(0.98±0.16)，均較對(duì)照組的(63.18±4.91)%、(35.27±4.35)%、(1.62±0.30)顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；觀察組患兒血清中的NK細(xì)胞和B細(xì)胞水平分別為(12.35±6.17)%、(12.78±9.03)%，與對(duì)照組的(11.18±5.96)%、(11.27±8.95)%比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論T淋巴細(xì)胞亞群在急性原發(fā)ITP患兒中比例異常，NK細(xì)胞和B細(xì)胞在兒童急性ITP中的表達(dá)未見(jiàn)異常。

T淋巴細(xì)胞亞群；NK細(xì)胞；B細(xì)胞；免疫性血小板減少癥

急性原發(fā)免疫性血小板減少癥(primary immune thrombocytopenia，ITP)為內(nèi)科血小板計(jì)數(shù)減少引起最常見(jiàn)的出血性疾病，是一種獲得性自身免疫性疾病，以往也稱為特發(fā)性血小板減少性紫癜。當(dāng)前對(duì)于ITP的發(fā)病機(jī)制還尚未明確，但隨著免疫學(xué)和分子生物技術(shù)的發(fā)展，細(xì)胞因異常及細(xì)胞免疫也越來(lái)越受到重視[1]。筆者將我院收治的30例急性ITP患兒作為研究對(duì)象，檢測(cè)其外周靜脈血中的T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞及B細(xì)胞水平，并將檢測(cè)結(jié)果同健康體檢兒童進(jìn)行對(duì)比，探討其在ITP中的發(fā)病機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2015年2月至2016年2月收治的30例急性ITP患兒作為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：患兒入院時(shí)均接受血常規(guī)檢查、骨髓檢查以及抗血小板抗體測(cè)定，明確確診為急性ITP，符合全國(guó)第五屆血栓與止血學(xué)術(shù)會(huì)議提出診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]；排除繼發(fā)性血小板減少癥患兒，假性血小板減少癥、脾功能亢進(jìn)以及各種自身免疫性疾病等引起的血小板減少疾病。另選同期來(lái)我院體檢的30例健康兒童作為對(duì)照組。觀察組中男性20例，女性10例，年齡2個(gè)月～14歲，平均(4.88±3.02)歲；對(duì)照組中男性22例，女性8例，年齡3個(gè)月～14歲，平均(4.74±2.92)歲。兩組受檢者的性別、年齡等一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。所有研究對(duì)象采集標(biāo)本前4周內(nèi)均無(wú)輸血、糖皮激素使用史以及疫苗接種。本研究均經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患兒家屬均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 本研究所用試劑和儀器均購(gòu)自美國(guó)BD公司，流式細(xì)胞儀型號(hào)為FACS Calibur。

1.2.2 檢測(cè)方法 晨起空腹?fàn)顟B(tài)下抽取外周靜脈血2 mL，將血清采用乙二胺四乙酸抗凝(EDTA)處理后，取新鮮EDTA抗凝血標(biāo)本100 μL，加入樣品測(cè)定管后再加入20 μL的四色免洗淋巴細(xì)胞亞群分析試劑(FITC/PI/PerCP/APC)，充分混合后加入2 mL血溶素，充分混合搖勻，10 min后送流式細(xì)胞儀檢測(cè)。檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞)、NK細(xì)胞和B細(xì)胞，并計(jì)算出百分率。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組受檢者的T淋巴細(xì)胞亞群水平比較 觀察組患兒外周靜脈血中CD3+水平、CD4+水平及CD4+/ CD8+均較對(duì)照組顯著降低，CD8+水平較對(duì)照組顯著提高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組受檢者的T淋巴細(xì)胞亞群水平比較(±s)

表1 兩組受檢者的T淋巴細(xì)胞亞群水平比較(±s)

組別觀察組對(duì)照組t值P值例數(shù)30 30 CD3+(%) 54.35±4.86 63.18±4.91 7.000 6＜0.05 CD4+(%) 25.08±3.73 35.27±4.35 9.740 1＜0.05 CD8+(%) 28.04±4.16 21.21±2.83 7.435 3＜0.05 CD4+/CD8+0.98±0.16 1.62±0.30 10.310 1＜0.05

2.2 兩組受檢者的NK細(xì)胞和B細(xì)胞水平比較 兩組受檢者血清中NK細(xì)胞水平和B細(xì)胞水平相當(dāng)，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表2。

表2 兩組受檢者的NK細(xì)胞和B細(xì)胞水平比較(±s，%)

表2 兩組受檢者的NK細(xì)胞和B細(xì)胞水平比較(±s，%)

組別觀察組對(duì)照組t值P值例數(shù)30 30 NK細(xì)胞12.35±6.17 11.18±5.96 0.747 0＞0.05 B細(xì)胞12.78±9.03 11.27±8.95 0.650 5＞0.05

3 討 論

ITP為兒童期好發(fā)的一種自身免疫性出血疾病，根據(jù)發(fā)病病因的不同，將其分為原發(fā)性ITP和繼發(fā)性ITP，臨床中原發(fā)性ITP較為常見(jiàn)。ITP為一種自限性疾病，80%～90%的患兒在6個(gè)月內(nèi)自行痊愈，有10%～20%的患兒會(huì)發(fā)展為慢性ITP[3]。關(guān)于ITP的發(fā)病原因，國(guó)內(nèi)外大多學(xué)者認(rèn)為與疫苗接種、發(fā)病前期感染有關(guān)[4]。有研究認(rèn)為，在ITP患兒發(fā)病前1～4周常常有風(fēng)疹、水痘以及流行性腮腺炎等病毒感染史[5]。關(guān)于誘發(fā)ITP的發(fā)病原因和機(jī)制至今雖尚未明確，但近年來(lái)，越來(lái)越多的研究證實(shí)ITP患者除了與自身體液免疫異常有關(guān)外，還與患者外周靜脈血中T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)、細(xì)胞因子表達(dá)以及細(xì)胞功能改變等密切相關(guān)。

T淋巴細(xì)胞在免疫反應(yīng)中具有重要作用，其在抗原刺激活化下，可產(chǎn)生功能各異的淋巴因子，參與體液免疫調(diào)節(jié)過(guò)程。絕大多數(shù)的血小板自身抗體是依賴于輔助性的T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的，機(jī)體免疫功能紊亂是造成ITP發(fā)病的主要原因[6]。T淋巴細(xì)胞亞群之間是否能保持正常的水平、比例及功能是機(jī)體能否保持正常免疫應(yīng)答的關(guān)鍵。本研究采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)急性原發(fā)ITP患兒外周靜脈血中的T淋巴細(xì)胞亞群，發(fā)現(xiàn)患兒外周靜脈血中CD3+水平、CD4+水平以及CD4+/CD8+均較健康對(duì)照組顯著降低，CD8+水平較對(duì)照組顯著提高。這一結(jié)果與文獻(xiàn)[7-8]研究結(jié)果一致，提示急性原發(fā)ITP患兒不僅存在明顯體液免疫紊亂，而且還存在細(xì)胞免疫功能異常。其原因可能是ITP患兒T淋巴比例失調(diào)，使得血清中輔助T淋巴細(xì)胞水平減少，抑制T淋巴細(xì)胞水平升高，功能降低，導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞效應(yīng)發(fā)揮不充分，B細(xì)胞功能亢進(jìn)[9]，CD4+T細(xì)胞水平降低，促進(jìn)自身反應(yīng)性B細(xì)胞水平升高，產(chǎn)生大量漿細(xì)胞，并分泌抗血小板抗體，縮短血小板生存時(shí)間，同時(shí)抑制骨髓巨核細(xì)胞，造成成熟障礙，破壞血小板[10]。因此，CD4+/CD8+細(xì)胞水平表達(dá)異常造成B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生針對(duì)血小板的自身抗體，是引發(fā)ITP的直接原因。輔助T淋巴細(xì)胞水平下降，CD8+細(xì)胞毒性的T淋巴細(xì)胞水平升高，T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)血小板的減少的整個(gè)過(guò)程。有研究指出，在慢性ITP患者中，其外周血液中的B細(xì)胞水平顯著高于健康對(duì)照組[11]。在本研究中，觀察組和對(duì)照組外周靜脈血中的B細(xì)胞水平相當(dāng)，這與汪儉等[12]研究結(jié)果一致，但觀察組患兒是否存在B細(xì)胞功能異常，還需要進(jìn)一步研究，明確B細(xì)胞與ITP發(fā)病機(jī)制。NK細(xì)胞是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，該細(xì)胞不僅與抗病毒感染、腫瘤以及免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，還在某些情況下參與自身免疫性疾病的發(fā)生[13]。激活狀態(tài)下的NK細(xì)胞可對(duì)ITP自身免疫反應(yīng)產(chǎn)生抑制作用。患兒機(jī)體中T淋巴細(xì)胞亞群比例失衡后，NK細(xì)胞數(shù)量和活性也會(huì)隨之下降，ITP患兒機(jī)體中NK細(xì)胞減少和活性降低后，其抑制B細(xì)胞的激活、增殖、分化以及抗體應(yīng)答的功能也會(huì)受到影響[14]。在本研究中，觀察組患兒血清中NK細(xì)胞水平為(12.35±6.17)%，與健康對(duì)照組的(11.18±5.96)%差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這與以往文獻(xiàn)[15]報(bào)道的結(jié)果存在差異，可能是本研究樣本量過(guò)少，且研究對(duì)象均為急性期原發(fā)ITP患兒有關(guān)。

綜上所述，急性原發(fā)ITP患兒存在T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)失衡，但NK細(xì)胞和B細(xì)胞表達(dá)未見(jiàn)異常，關(guān)于其在急性ITP的發(fā)病機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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Expression of T lymphocyte subsets,NK cells and B cells in peripheral blood of children with acute primary immune thrombocytopenia.

SU Wen-fang,CHEN Mei-ying,ZHENG Zhen-guang.Department of Clinical Laboratory, Longyan Second Hospital,Longyan 364003,Fujian,CHINA

ObjectiveTo observe the expression of T lymphocyte subsets,NK cells and B cells in peripheral blood of children with acute primary immune thrombocytopenia(ITP).MethodsA total of 30 cases of children with acute ITP,who admitted to our hospital from February 2015 to February 2016 were selected as the observation group.At the same time,30 healthy children for physical examination in our hospital were chosen as the control group.T lymphocyte subsets,NK cell and B cell level in peripheral blood of the two groups were detected and compared by flow cytometric.ResultsCD8+level in the peripheral venous blood of the observation group was(28.04±4.16)%,which was significantly higher than that in the control group of(21.21±2.83)%,P＜0.05;CD3+,CD4+,CD4+/CD8+levels of the observation group were(54.35±4.86)%,(25.08±3.73)%,(0.98±0.16),respectively,which were significantly lower than those of the control group of(63.18±4.91)%,(35.27±4.35)%,(1.62±0.30),P＜0.05;there was no significantly different between the observation group and the control group in NK cell and B cell level,(12.35±6.17)%vs(11.18±5.96)%,(12.78±9.03)% vs(11.27±8.95)%,P＞0.05.ConclusionThe proportion of T lymphocyte subsets in children with acute primary ITP is abnormal,and the expression of NK and B cells in children with acute ITP is normal.

T lymphocyte subsets;NK cell;B cell;Immune thrombocytopenia(ITP)

R558+.2

A

1003—6350（2016）22—3656—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.22.015

2016-04-25)

蘇文芳。E-mail：Wenfans@126.com