大葉性肺炎患兒誘導痰中T細胞亞群和細胞因子的變化及意義

張朝霞，劉智屏，肖智輝，陳俐麗，李博

(暨南大學第二臨床醫學院深圳市人民醫院兒科，廣東 深圳 518020)

大葉性肺炎患兒誘導痰中T細胞亞群和細胞因子的變化及意義

張朝霞，劉智屏，肖智輝，陳俐麗，李博

(暨南大學第二臨床醫學院深圳市人民醫院兒科，廣東 深圳 518020)

目的 研究大葉性肺炎患兒誘導痰中T細胞亞群和細胞因子的變化及其臨床意義。方法選擇2014年9月至2015年9月在我院兒科接受診治的大葉性肺炎患兒64例作為觀察組，另選同期在我院進行健康體檢的健康兒童60例作為對照組，比較兩組受檢者誘導痰內的T細胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)，炎性細胞因子水平(IL-6、IL-8及TNF-α)，以及T細胞亞群有關細胞因子水平(IFN-γ、TGF-β及IL-17A)。結果觀察組患兒的誘導痰內的CD3+(67.84±8.62)%、CD4+(46.08±6.93)%及CD4+/CD8+(2.07±0.21)均較對照組的(55.37±6.25)%、(30.82±5.07)%、(1.40±0.17)明顯更高，差異均有統計學意義(P＜0.05)；兩組受檢者的CD8+(24.23±3.06)%及(24.63± 3.62)%比較，差異無統計學意義(P＞0.05)；觀察組患兒誘導痰內的IL-6(358.27±29.13)ng/L、IL-8(2.13±0.07)ng/L及TNF-α(3.08±0.92)ng/L水平均較對照組的(150.24±32.28)ng/L、(0.58±0.02)ng/L、(0.39±0.23)ng/L明顯更高，差異均有統計學意義(P＜0.05)；觀察組患兒誘導痰內IFN-γ(5.19±2.63)×10-4及TGF-β(3.31±1.09)×10-2顯著低于對照組的(23.42±3.92)×10-4及(6.18±2.11)×10-2，而IL-17A(3.46±1.24)×10-5顯著高于對照組的(2.94±1.30)×10-5，差異均有統計學意義(P＜0.05)。結論大葉性肺炎患兒誘導痰中的T細胞亞群以及細胞因子均呈現出異常變化，對此類指標進行監測有助于臨床的診斷與治療。

大葉性肺炎；誘導痰；T細胞亞群；細胞因子

大葉性肺炎屬于細菌性肺炎，是小兒肺炎的常見類型，主要致病菌為肺炎雙球菌，其病理表現呈大葉性分布。由于大葉性肺炎通常起病較急，且以高熱、胸痛等為主要癥狀，嚴重者會出現驚厥、昏迷，甚至休克等，對患兒健康及生命均造成嚴重威脅，需予以高度重視。臨床通常將免疫功能出現失衡作為導致大葉性肺炎發病的一項重要因素。據報道，在該病發病過程中細胞免疫也參與其中[1-2]。在對大葉性肺炎患兒誘導痰相關研究中發現，其T細胞亞群和細胞因子等均出現明顯失衡現象，進一步證實，其在該病發病機制中起到一定作用。有學者提出，誘導痰相關檢測結果能夠直接反映出患兒病理變化特點，明確大葉性肺炎患兒誘導痰內T細胞亞群和細胞因子等變化及意義，對該病診斷、治療及預后評估等均起到有效提示作用[3-4]。本文通過研究分析大葉性肺炎患兒誘導痰中T細胞亞群和細胞因子的變化及意義，旨在更好地輔助臨床治療，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年9月至2015年9月在我院兒科接受診治的大葉性肺炎患兒64例作為觀察組，男性38例，女性26例；年齡8個月～12歲，平均(5.24±0.27)歲。納入標準：(1)所有患兒的臨床癥狀及體征均符合大葉性肺炎的相關診斷標準，并經過實驗室檢查及X線片診斷證實；(2)初診患兒；(3)年齡≥8個月；(4)近1個月內未患有其他過敏或免疫性疾病及慢性疾病。排除標準：(1)其他種類的肺炎患兒；(2)存在嚴重的心、肝、腎等臟器的功能性不全；(3)患兒病歷資料數據缺失。另選同期在醫院進行正常健康體檢的兒童60例作為對照組，男性40例，女性20例；年齡8個月～11歲，平均(5.18±0.29)歲。兩組兒童的性別及年齡等相關資料比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究已獲得受試者家屬簽字知情同意，并經醫院倫理委員會批準。

1.2 研究方法

1.2.1 誘導痰炎性細胞因子的檢測 在患兒家屬的知情同意下通過超聲霧化并吸入高滲鹽水的方式對兩組受試者實施痰誘導，提取樣本后，通過酶聯免疫吸附(ELISA)法對白細胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、白細胞介素-8(interleukin-8，IL-8)及腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)實施檢測，相關試劑盒均產自深圳的晶美公司，操作時需嚴格遵照試劑盒的說明書進行。

1.2.2 誘導痰內T細胞亞群的檢測 利用貝克曼流式細胞儀及儀器自帶試劑盒對誘導痰內的CD3+、CD4+及CD8+進行檢測，操作時需嚴格按試劑盒的說明書進行。

1.2.3 誘導痰內T細胞亞群有關細胞因子水平的檢測 通過實時熒光定量PCR法測定干擾素-γ(interferon，IFN-γ)，轉化生長因子-β(transforming growth factor，TGF-β)，以及白細胞介素-17A(interleukin-17A，IL-17A)。檢測過程中所用試劑盒選用產自QIAGEN公司的SYBRGreen試劑。

1.3 觀察指標 比較兩組誘導痰內的T細胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)，炎性細胞因子水平(IL-6、IL-8及TNF-α)，以及T細胞亞群有關細胞因子水平(IFN-γ、TGF-β及IL-17A)。

1.4 統計學方法 應用SPSS20.0統計軟件進行數據分析，計量數據以均數±標準差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組受試者誘導痰內的T細胞亞群比較 觀察組患者誘導痰內的CD3+、CD4+及CD4+/CD8+均較對照組明顯更高，差異均有統計學意義(P＜0.05)，但兩組受試者的CD8+比較差異無統計學意義(P＞0.05)，見表1。

表1 兩組受試者誘導痰內的T細胞亞群比較(±s)

表1 兩組受試者誘導痰內的T細胞亞群比較(±s)

組別CD3+(%)CD4+(%)CD8+(%)CD4+/CD8+觀察組(n=64)對照組(n=60) t值P值67.84±8.62 55.37±6.25 9.170 0.000 46.08±6.93 30.82±5.07 13.917 0.000 24.23±3.06 24.63±3.62 0.666 0.507 2.07±0.21 1.40±0.17 19.449 0.000

2.2 兩組受試者誘導痰內炎性細胞因子水平比較 觀察組患者誘導痰內的IL-6、IL-8及TNF-α水平均較對照組明顯更高，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 兩組受試者誘導痰內炎性細胞因子水平比較(±s)

表2 兩組受試者誘導痰內炎性細胞因子水平比較(±s)

組別IL-6(ng/L)IL-8(ng/L)TNF-α(ng/L)觀察組(n=64)對照組(n=60) t值P值358.27±29.13 150.24±32.28 37.716 0.000 2.13±0.07 0.58±0.02 165.273 0.000 3.08±0.92 0.39±0.23 22.008 0.024

2.3 兩組受試者誘導痰內T細胞亞群有關細胞因子水平比較 觀察組受試者誘導痰內IFN-γ及TGF-β顯著低于對照組，而IL-17A顯著高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表3。

表3 兩組受試者誘導痰內T細胞亞群有關細胞因子水平比較(±s)

表3 兩組受試者誘導痰內T細胞亞群有關細胞因子水平比較(±s)

組別IFN-γ(×10-4)TGF-β(×10-2)IL-17A(×10-5)觀察組(n=64)對照組(n=60) t值P值5.19±2.63 23.42±3.92 30.583 0.000 3.31±1.09 6.18±2.11 9.602 0.000 3.46±1.24 2.94±1.30 2.280 0.024

3 討 論

大葉性肺炎是指因肺炎鏈球菌等細菌感染導致的一個肺葉或者一個肺段區域內發生的肺泡炎，其為臨床典型的急性肺器官實質性炎癥，以冬春季節多見。該病好發于3歲及以上的兒童，主要原因是小兒呼吸道的防御功能較弱，易遭受外界細菌入侵并引起感染。當細菌侵襲患兒肺泡時，將以變態反應方式提升肺泡壁中的毛細血管自身通透性，進而使得漿液和纖維素滲出。細菌在含有豐富蛋白的滲出物中可以快速大量繁殖，并經肺泡間孔和細支氣管向相鄰的肺組織繼續蔓延，最終波及一個肺段甚至整個肺葉[5]。臨床對于大葉性肺炎治療的傳統方式以抗菌素治療為主。但是，隨著免疫學發展以及不斷深入的研究發現，當致病菌感染患兒肺部后，與患兒免疫系統之間會發生作用，并使其免疫機能失常[6-7]。因此，在應用抗感染類藥物治療大葉性患兒的同時，及時對其誘導痰進行分析，了解患兒機體內T細胞亞群和細胞因子的表達情況，必要時應用針對性的免疫調節類藥物，可幫助提高臨床療效。

本文研究發現，觀察組誘導痰內的CD3+、CD4+及CD4+/CD8+均較對照組明顯更高(P＜0.05)，但兩組CD8+比較，差異無統計學意義(P＞0.05)。符合Nemoto等[8]和袁紅瑛等[9]的報道結果，提示患有大葉性肺炎的患兒存在較為明顯的細胞免疫功能紊亂。CD3+、CD4+雙陽性細胞群是具有誘導輔助功能的一類T淋巴細胞的重要亞群，其可對免疫細胞產生輔助誘導作用。其中CD4+降低會造成機體免疫力下降，而其含量上升則會導致免疫機能亢進。CD3+、CD8+雙陽性細胞群則屬于T淋巴細胞的一類抑制/細胞毒性細胞，兩者均具有特異性功能，可殺死靶細胞，并起到抗病毒以及抗腫瘤的作用。

本文還發現，觀察組誘導痰內的IL-6、IL-8及TNF-α水平均較對照組明顯更高，這說明大葉性肺炎患兒存在一定的炎癥反應癥狀。且觀察組誘導痰內IFN-γ及TGF-β顯著低于對照組，而IL-17A顯著高于對照組，與Sharma等[10]和朱曉華等[11]的報道相符。提示哮喘患兒機體內的免疫平衡已被打破。究其原因，T細胞在細胞免疫中十分關鍵，其屬于一類重要的免疫細胞，起到調節作用。其還包含多種亞群和類型，不同類型T細胞的表型和功能均存在區別。Th細胞受到抗原刺激后會生成Th1和Th2，其中Th1通常和對抗細胞內部的細菌免疫反應有關，與之相關的細胞因子包含IFN-γ。通常情況下，Th1和Th2兩者之間存在交叉抑制和互相調節的關系，并保持動態平衡，而當該平衡被打破，則會引起機體發生病理變化，此種變化常與感染類疾病以及免疫性疾病息息相關。Th17為新型Th細胞，可分泌出IL-17A等類型的細胞因子，起到促炎性反應的功能，利于成纖維細胞以及上皮細胞大量合成并分泌趨化因子以及炎性細胞因子，如TNF-α和IL-8等[12]。IL-6和局部感染相關，其能夠發揮較好的抗病毒活性。IL-8為趨化性細胞因子，具有利于炎癥細胞發生趨化作用的功能。而TNF-α也能較好地反饋患者機體的炎癥反應。由于大葉性肺炎患兒機體內炎癥反應活動較為強烈，因此上述指標水平均可呈現出程度各異的異常變化。這在胡曉艷等[13]和Paats等[14]的報道中也可發現類似結論。

綜上所述，大葉性肺炎患兒誘導痰中的T細胞亞群以及細胞因子均呈現出異常變化，對此類指標進行監測有助于臨床的診斷與治療。

[1]高海兵,楊鳳美,黃婷,等.肺炎支原體肺炎患兒淋巴細胞亞群的動態變化[J].中國醫藥,2015,10(8):1119-1122.

[2]李紅.36例小兒肺炎支原體肺炎免疫功能檢測及觀察[J].中國實用醫藥,2015,10(35):41-42.

[3]呂響紅,宮蕾,楊志斌,等.肺炎支原體肺炎患兒血清T輔助細胞亞群水平變化及意義[J/CD].中華婦幼臨床醫學雜志(電子版),2015, 11(4):454-457.

[4]Lee W,Chung WS,Hong KS,et al.Clinical usefulness of bronchoalveolar lavage cellular analysis and lymphocyte subsets in diffuse interstitial lung diseases[J].Ann Lab Med,2015,35(2):220-225.

[5]嚴慧,金玉蘭,張雙,等.小劑量糖皮質激素對兒童支原體肺炎療效及T細胞亞群的影響[J].中國藥業,2015,24(18):25-26.

[6]Schürmann M,Schürmann D,Schindler R,et al.Impaired thymic function and CD4+T lymphopenia,but not mannose-binding lectin deficiency,are risk factors for Pneumocystis jirovecii pneumonia in kidney transplant recipients[J].Transpl Immunol,2013,28(4): 159-163.

[7]王麗燕,白麗霞,朱鐳,等.支原體肺炎和支氣管肺炎兒童T淋巴細胞亞群比較[J].中國藥物與臨床,2015,15(9):1298-1301.

[8]Nemoto Y,Kanai T,Takahara M,et al.Th1/Th17-mediated interstitial pneumonia in chronic colitis mice independent of intestinal microbiota[J].J Immunol,2013,190(12):6616-6625.

[9]袁紅瑛,王勇,張繼學,等.成人病毒性肺炎患者肺泡灌洗液中T細胞亞群檢測的臨床意義[J].中國現代醫學雜志,2015,25(7):41-43.

[10]Sharma SK,Roumanes D,Almudevar A,et al.CD4+T-cell responses among adults and young children in response to Streptococcus pneumoniae and Haemophilus influenzae vaccine candidate protein antigens[J].Vaccine,2013,31(30):3090-3097.

[11]朱曉華,陳強,柯江維,等.支氣管肺炎患兒免疫功能變化的臨床分析[J].中國當代兒科雜志,2013,15(3):175-178.

[12]樓蘭芳,李小兵,張蘭青,等.小兒肺炎支原體感染后血清免疫球蛋白、紅細胞免疫及外周血T淋巴細胞亞群的變化情況分析[J].中國婦幼保健,2015,30(3):385-387.

[13]胡曉艷,錢衛疆,張雙船,等.肺炎支原體肺炎患兒細胞免疫功能的變化及脾氨肽的輔助治療作用[J].海南醫學,2012,23(21):5-7.

[14]Paats MS,Bergen IM,Hanselaar WE,et al.T helper 17 cells are involved in the local and systemic inflammatory response in community-acquired pneumonia[J].Thorax,2013,68(5):468-474.

Change and significance of T lymphocyte subsets and cell factor in induced sputum in children with lobar pneumonia.

ZHANG Zhao-xia,LIU Zhi-ping,XIAO Zhi-hui,CHEN Li-li,LI Bo.Department of Pediatrics,the Shenzhen People's Hospital,the Second Clinical Medical College of Jinan University,Shenzhen 518020,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo study the change and clinical significance of T lymphocyte subsets and cell factor in induced sputum in children of lobar pneumonia.MethodsFrom September 2014 to September 2015,64 children with lobar pneumonia in Department of Pediatrics in our hospital were selected as the observation group,and 60 healthy children were enrolled as the control group.T lymphocyte subsets(CD3+,CD4+,CD8+and CD4+/CD8+),the levels of cytokines(IL-6,IL-8 and TNF-α),and cytokine levels(IFN-γ,TGF-β and IL-17A)in induced sputum were compared between the two groups.ResultsCD3+,CD4+and CD4+/CD8+in the observation group were(67.84±8.62)%,(46.08± 6.93)%,(2.07±0.21),which were significantly higher than those in the control group of(55.37±6.25)%,(30.82±5.07)%, (1.40±0.17),and the differences were statistically significant(P＜0.05).CD8+showed no statistically significant difference between the two groups,(24.23±3.06)%vs(24.63±3.62)%,P＞0.05.The levels of IL-6,IL-8 and TNF-α in the observation group were(358.27±29.13)ng/L,(2.13±0.07)ng/L(3.08±0.92)ng/L,which were significantly higher than those in the control group of(150.24±32.28)ng/L,(0.58±0.02)ng/L,(0.39±0.23)ng/L,with statistically significant difference(P＜0.05).IFN-γ and TGF-β in the observation group were(5.19±2.63)×10-4and(3.31±1.09)×10-2,which were significantly lower than those in the control group of(23.42±3.92)×10-4and(6.18±2.11)×10-2,while the IL-17A was significantly higher in the observation group than the control group,(3.46±1.24)×10-5vs(2.94±1.30)×10-5,with statistically significant difference(P＜0.05).ConclusionIn the induced sputum of children with lobar pneumonia,T cell subsets and cytokines show abnormal changes,and monitoring of the indicators is helpful to clinical diagnosis and treatment.

Lobar pneumonia;Induced sputum;T cell subsets;Cytokines

R725.6

A

1003—6350（2016）22—3658—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.22.016

2016-04-13)

張朝霞。E-mail：2578604036@qq.com