羊梅迪-維斯納病的診斷

孫麗麗　山東省榮成市蔭子畜牧獸醫(yī)站　264300

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羊梅迪-維斯納病的診斷

孫麗麗山東省榮成市蔭子畜牧獸醫(yī)站264300

1　流行病學(xué)

該病的傳播為水平傳播，其傳播途徑為消化道和呼吸道。乳腺和肺臟是病毒排出的主要通道。實驗觀察發(fā)現(xiàn)，在梅迪-維斯納病發(fā)病率高的羊圈內(nèi)出生的羔羊，于出生當(dāng)時及出生后10小時、6周和1年后隔離，然后觀察8年，結(jié)果于出生當(dāng)時被隔離的羔羊未觀察到感染，而其他3群分別有28％、75％和81％出現(xiàn)癥狀。在感染雙親的羊圈內(nèi)生活的時間越長，發(fā)病率越高，病情越嚴(yán)重。該病也可經(jīng)呼吸道的飛沫傳播，攝入被病毒污染的牧草也可引起感染。羊的性別和年齡對該病的易感性無直接影響。易感綿羊經(jīng)肺內(nèi)注射病羊的肺細(xì)胞和分泌物也能實驗性地傳播該病。

2　臨床癥狀

該病的潛伏期通常在2～3年以上。病羊首先表現(xiàn)為掉群，同時出現(xiàn)干咳并逐漸消瘦，呼吸困難日益明顯，病情進行性加重，直到死亡。維斯納病病羊最初表現(xiàn)為步樣異常、運動失調(diào)和輕癱，尤其是后肢更為明顯。有時可見頭部呈異常姿態(tài)，唇或顏面肌震顫。病情緩慢增進和惡化，最后陷入對稱性麻痹而死亡。

3　病理學(xué)診斷

（1）病理剖檢變化。梅迪病病羊除明顯消瘦外，病變主要出現(xiàn)于肺及局部淋巴結(jié)。剖檢可見肺明顯膨大，肺的體積和重量比正常肺大2～4倍，肺和胸壁之間發(fā)生粘連，胸膜和肺質(zhì)地變硬呈棕色或暗紅色，觸之有橡皮樣感。肺小葉間質(zhì)明顯增寬。肺切面干燥，透過漿膜可見到大量粟粒狀灰色小點。縱膈淋巴結(jié)和支氣管淋巴結(jié)腫大和水腫。患維斯納病的羊，一般無眼觀變化，老齡羊的后肢骨骼肌顯著萎縮，少數(shù)病例腦膜輕度充血，或腦、脊髓切面有小的黃色斑點。關(guān)節(jié)的病變主要為滑液囊膜和黏液囊膜增生，關(guān)節(jié)囊纖維化及關(guān)節(jié)軟骨和骨變性，發(fā)病關(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)面干燥，有纖維蛋白沉著。乳房有硬節(jié)。

（2）病理組織學(xué)變化。主要病變是間質(zhì)性肺炎，在血管周圍、支氣管周圍或肺泡之間有淋巴樣細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞呈彌漫性浸潤，伴有肺泡壁肥厚和淋巴樣細(xì)胞呈結(jié)節(jié)狀集聚。維斯納病的初期病變呈彌漫性腦脊髓炎，可見淋巴樣細(xì)胞或小膠質(zhì)細(xì)胞增生、浸潤或圍管性細(xì)胞浸潤。早期在神經(jīng)組織見有星形膠質(zhì)細(xì)胞環(huán)繞血管的病灶，隨著病程發(fā)展，病灶融合成片，邊緣密度增強而中心則形成微小的空泡。病變從初期的室管膜下廣泛地蔓延到腦和脊髓實質(zhì)。繼而小腦、大腦、腦橋、延腦和脊髓等的白質(zhì)呈彌漫性脫鞘。

4　病原學(xué)診斷

（1）病料的采集和處理。無菌采集潛伏期和發(fā)病期病羊的脈絡(luò)叢、脾、縱膈淋巴結(jié)、唾液腺、肺、血液及腦脊髓液進行病毒分離培養(yǎng)和動物感染試驗。

（2）分離培養(yǎng)。梅迪-維斯納病毒可以在綿羊的室管膜脈絡(luò)叢、腎、唾液腺和綿羊胎肺的原代、繼代和傳代細(xì)胞培養(yǎng)物內(nèi)增殖，其中以來源于綿羊室管膜脈絡(luò)叢細(xì)胞和綿羊胎肺細(xì)胞最常用。將無菌或除菌后的病料接種于細(xì)胞培養(yǎng)物內(nèi)，在2～3周內(nèi)產(chǎn)生細(xì)胞病變，形成巨大的合胞體細(xì)胞 （也稱多核巨細(xì)胞、融合細(xì)胞），每個合胞體細(xì)胞中含有2～20個細(xì)胞核，以合胞體細(xì)胞為中心，周圍是折光性強的梭形細(xì)胞。病變細(xì)胞最后崩解。經(jīng)過連續(xù)傳代后，致細(xì)胞病變的時間可縮短到培養(yǎng)的第3～15天。經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)傳代的病毒對羊仍有致病力。

（3）動物回歸試驗。梅迪病采集病羊的肺制成懸液，經(jīng)鼻內(nèi)、胸腔或靜脈接種易感綿羊，1個月后撲殺檢查，感染羊的肺出現(xiàn)梅迪病的病變。維斯納病采集病羊組織制成懸液，經(jīng)腦內(nèi)接種易感綿羊，1個月內(nèi)感染羊的腦脊髓液中淋巴細(xì)胞增多，表現(xiàn)出維斯納病的神經(jīng)癥狀或病理組織學(xué)變化。用梅迪病毒感染山羊，出現(xiàn)腦炎、關(guān)節(jié)炎和間質(zhì)性進行性肺炎，并檢出抗體。

（4）電子顯微鏡檢查。采取病羊的病變肺組織作超薄切片電鏡直接鏡檢，或?qū)⒎谓M織制成乳劑后經(jīng)差速離心處理，再以硫酸鎂或聚乙二醇濃縮，并通過柱層析提純后，用磷鎢酸負(fù)染。在電鏡下觀察病毒顆粒的形態(tài)特征。成熟的梅迪-維斯納病毒呈球形，直徑為90～100nm。病毒核心致密，直徑為30～40nm。用感染細(xì)胞培養(yǎng)物做超薄切片電鏡觀察，在感染細(xì)胞的周圍可見典型的病毒顆粒，呈球形，直徑約95nm，內(nèi)有2個或多個核芯，其絕大多數(shù)為圓形，少數(shù)為桿形或錐形。并可看到病毒粒子從感染細(xì)胞的細(xì)胞膜上釋放。

5　血清學(xué)診斷

已報道的血清學(xué)方法有中和試驗、補體結(jié)合試驗、被動血凝試驗、熒光抗體試驗、免疫擴散及酶聯(lián)免疫測定法等。以感染的細(xì)胞培養(yǎng)物作為抗原，用補體結(jié)合試驗和中和試驗可檢測出病羊血清中的抗體。補體結(jié)合抗體于感染后3～4周可被檢出，中和抗體在感染后第2～3個月可被檢出，均能持續(xù)數(shù)年。為了確定該病在畜群中的存在，可以應(yīng)用免疫擴散試驗，但對單個動物的確診，應(yīng)聯(lián)合使用上述3種方法中的至少2種。目前，廣泛應(yīng)用免疫擴散試驗對羊群進行監(jiān)測。