聯合檢測34βE12、p65、CK5/6對前列腺癌鑒別診斷的意義

全藝，王會鎮

(瓊海市人民醫院泌尿外科，海南 瓊海 571400)

聯合檢測34βE12、p65、CK5/6對前列腺癌鑒別診斷的意義

全藝，王會鎮

(瓊海市人民醫院泌尿外科，海南 瓊海 571400)

目的 探討聯合檢測34βE12、p65、角蛋白CK5/6對前列腺癌鑒別診斷的意義。方法采用免疫組化法觀察2012年9月至2015年9月間收集的34βE12、p65、CK5/6在70例良性增生(BPH)、140例前列腺癌(PCA)、16例前列腺低級別上皮內瘤(LGPIN)和20例前列腺高級別上皮內瘤(HGPIN)間的表達差異。結果在34βE12的比較中，良性增生組織、PCA、LGPIN和HGPIN中陰性率分別為10.00%(7/70)、79.29%(111/140)、6.25%(1/16)和35.00%(7/20)，PCA組陰性率比其他三組間表達水平高，差異有統計學意義(Z=185.344，P＜0.01)。在p65的比較中，良性增生組織、PCA、LGPIN和HGPIN中陰性率分別為4.29%(3/70)、91.43%(128/140)、6.25%(1/16)和15.00% (3/20)，PCA組陰性率比其他三組間表達水平高，差異有統計學意義(Z=267.107，P＜0.01)。在CK5/6的比較中，良性增生組織、PCA、LGPIN和HGPIN中陰性率分別為11.43%(8/70)、88.57%(124/140)、0(0/16)和30.00%(6/20)，PCA組陰性率比其他三組間表達水平高，差異有統計學意義(Z=228.111，P＜0.01)。結論單獨檢測一項指標無法區分四種組織，通過聯合檢測34βE12、p65、CK5/6表達水平有助于區分四種前列腺組織。

前列腺癌；免疫組化；34βE12；p65；CK5/6

前列腺癌是男性中發病率最高的惡性腫瘤之一，在我國的發病率也呈現逐年上升的趨勢[1]。然而，目前對于前列腺惡性病變和良性增生的鑒別仍然是病理診斷的難點，臨床上多以前列腺特異抗原(PSA)表達水平和前列腺體積進行判斷存在較高的誤診率[2]。已有研究報道34βE12、p65、CK5/6等多種蛋白在前列腺癌組織和良性增生組織間的表達水平存在差異[3-5]。因此，本研究嘗試聯合檢測上述三種蛋白在不同前列腺組織中的表達水平，探討三者在前列腺良惡性疾病中的診斷效用。

1 資料與方法

1.1 材料 選取我院2012年9月至2015年9月收治的70例良性增生(BPH)患者、140例前列腺癌(PCA)患者、16例前列腺低級別上皮內瘤(LGPIN)患者和20例前列腺高級別上皮內瘤(HGPIN)患者。抗34β E12單克隆抗體和試劑盒購自杭州言科生物科技有限公司，抗p65單克隆抗體和試劑盒購自福州北京普利萊基因技術有限公司，抗CK5/6單克隆抗體和試劑盒購自上海江萊生物有限公司。所有的標本均經10%中性甲醛固定，使用石蠟包埋。

1.2 方法 免疫組織化學檢測采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶(SP)法，陽性對照為已知陽性的前列腺組織切片，陰性對照為磷酸鹽緩沖液(PBS)代一抗，具體的操作步驟參照SP試劑盒說明書。

1.3 陽性判斷標準 顯微鏡下觀察各組織切片，棕黃色顆粒狀為陽性信號，p65為胞核著色，34βE12和CK5/6為胞質著色。分級標準：基底細胞層無著色細胞(-)；基底細胞層少數細胞散在著色(+)；基底細胞層著色有間斷(++)；基底細胞層著色連續、明顯(+++)。三指標均為+判定為為陽性菌株。若有一項未著色，其他兩組進行著色和發酵優化。

1.4 統計學方法 應用SPSS20.0軟件包進行數據處理，計數資料采用秩和檢驗，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 34βE12在四種不同組織中的表達水平比較 良性增生組織、LGPIN和HGPIN組織中34βE12大多為陽性表達，PCA組織中大多為陰性表達，PCA組與其他三組間表達水平比較差異具有統計學意義(Z=185.344，P＜0.01)，見表1、圖1。

表1 四種組織中34βE12表達水平比較[例(%)]

圖1 34βE12陽性表達(細箭頭)和陰性表達(粗箭頭)

2.2 p65在四種不同組織中的表達水平比較 良性增生組織、LGPIN和HGPIN組織中p65大多為陽性表達，PCA組織中大多為陰性表達，PCA組與其他三組間表達水平差異有統計學意義(Z=267.107，P＜0.01)，見表2、圖2。

表2 四種組織中p65表達水平比較[例(%)]

圖2 p65陽性表達(細箭頭)和陰性表達(粗箭頭)

2.3 CK5/6在四種不同組織中的表達水平比較 良性增生組織、LGPIN和HGPIN組織中CK5/6大多為陽性表達，PCA組織中大多為陰性表達，PCA組與其他三組間表達水平比較差異具有統計學意義(Z= 228.111，P＜0.01)，見表3、圖3。

表3 四種組織中CK5/6表達水平比較[例(%)]

圖3 CK5/6陽性表達(細箭頭)和陰性表達(粗箭頭)

2.4 四種組織中的三種蛋白陽性率比較 四種組織中三種蛋白聯合檢測陽性率比較差異具有統計學意義(Z=391.83，P＜0.01)，見表4。

表4 四種組織中的三種蛋白陽性率比較[例(%)]

3 討 論

判斷前列腺增生組織的良惡性程度是提高前列腺癌治療效率的有效手段。在前列腺的臨床診斷中，多以PSA抗原濃度和前列腺體積對前列腺癌進行判斷，準確性較差。尋找合適的分子標志物有助于改善前列腺癌的診斷方式。有報道稱，檢測34βE12、p63、CK5/6有助于區分乳腺癌的良惡性組織[6]。由于前列腺的底層細胞和乳腺均為肌上皮細胞，具有一定的相似性。且三種蛋白在前列腺癌組織中的表達水平與良性增生組織中具有顯著差異[3-5]。因此本研究嘗試檢測上述三種蛋白聯合檢測對前列腺癌鑒別診斷的意義。

34βE12是一個質量為57～66 kD的角蛋白，僅在前列腺腺體的基底細胞中表達，可以作為基底細胞的標志物在臨床上多用于臨床診斷，然而由于良性增生組織中中也存在假陰性、前列腺癌組織中也存在假陽性因此單獨使用效果不佳[7-8]。p65是一種核蛋白，在多種癌癥組織中存在突變，其陰性表達與癌癥的發生和發展均具有一定的相關性[9-10]。由于p65僅在前列腺假復層上皮組織的基底細胞肌上皮細胞中表達而在神經內分泌細胞和前列腺分泌腺細胞中不表達，因此也是前列腺基底細胞的良好標記物[10]。CK5/6是另外一種基地細胞標記物，在正常組織中多呈陽性表達，而在癌癥組織中多為陰性[11-12]。但在報道中，三種蛋白單獨檢測均不能很好的將不同類型的前列腺增生組織區分開來。因此，本研究嘗試將三種蛋白聯合檢測以改善診斷效果。

本研究證實，在良性前列腺增生組織中34βE12、p65和CK5/6大多呈(++)或(+++)表達，提示在正常組織中三種蛋白均有較強的陽性表達。而在LGPIN和HGPIN中大多表達為(++)和(+)。提示，前列腺PIN中基底細胞存在缺失情況。而在PCA組織中三種蛋白的表達多呈現(-)，提示三種蛋白的表達在前列腺癌組織中存在缺失，基底細胞幾乎完全消失。由于34βE12、p65和CK5/6分別標記了基底細胞的細胞核和細胞質因此，三種蛋白的聯合應用增加了檢測的準確性，降低了假陰性和假陽性的出現概率。

綜上所述，單獨檢測一項指標無法區分四種組織，通過聯合檢測34βE12、p65、CK5/6表達水平有助于區分四種前列腺組織。

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Combined detection of 34βE12,p65 and CK5/6 in prostate cancer and its clinical significance.

QUAN Yi,WANG Hui-zhen.Department of Urology,People Hospital of Qionghai City,Qionghai 571400,Hainan,CHINA

Objective To investigate the clinical significance of combined detection of 34βE12,p65 and CK5/ 6 in the diagnosis of prostate cancer.MethodsThe expression of 34βE12,p65 and CK5/6 in 70 cases of benign prostatic hyperplasia(BPH),20 cases of low-grade prostatic intraepithelial neoplasia(LGPIN),140 cases of prostate cancer (PCA)and 16 cases of high-grade prostatic intraepithelial neoplasia(HGPIN)were analyzed by immunohistochemical method from September 2013 to September 2015.ResultsIn the comparisons of 34βE12,the negative rate in the PCA group[79.29%(111/140)]was significantly higher than the BPH group[10.00%(7/70)],LGPIN group[6.25%1/(16)]and HGPIN group[35.00%(7/20)](Z=185.344,P＜0.01).In the comparisons of p65,the negative rate in the PCA group [91.43%(128/140)]was significantly higher than the BPH group[4.29%(3/70)],LGPIN group[6.25%(1/16)]and HGPIN group[15.00%(3/20)](Z=267.107,P＜0.01).In the comparisons of CK5/6,the negative rate in the PCA group [88.57%(124/140)]was significantly higher than the BPH group[11.43%(8/70)],LGPIN group[0.00%(0/16)]and HGPIN group[30.00%6/(20)](Z=228.111,P＜0.01).ConclusionA single indicator cannot be used to distinguish the four tissues,and combined detection of the expression levels of 34βE12,p65 and CK5/6 can be helpful to distinguish four kinds of prostate tissues.

Prostate cancer;Immunohistochemistry;34βE12;p65;CK5/6

R737.25

A

1003—6350（2016）09—1415—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.09.014

2015-10-19)

海南省衛生廳科學研究課題(編號：瓊衛 20125PT-35)

全藝。E-mail：quanyi1974@sina.com