試析如何利用微生物檢測(cè)法實(shí)現(xiàn)板藍(lán)根及其制劑的質(zhì)量控制

朱玉琛

哈藥集團(tuán)世一堂制藥廠 150000

試析如何利用微生物檢測(cè)法實(shí)現(xiàn)板藍(lán)根及其制劑的質(zhì)量控制

朱玉琛

哈藥集團(tuán)世一堂制藥廠 150000

目的：主要對(duì)板藍(lán)根采取微生物檢測(cè)的方式劑量范圍作出合理研究，并且得到相應(yīng)的劑量曲線，從而根據(jù)板藍(lán)根相關(guān)曲線圖對(duì)各種制造商所生產(chǎn)的板藍(lán)根片作出檢驗(yàn)，進(jìn)而達(dá)到質(zhì)量要求。方法：通過采取菌敏試驗(yàn)的方式來對(duì)板藍(lán)根水提取的液體中各種種類的抑菌性作出合理檢驗(yàn)，并且建立了板藍(lán)根鑒定法。結(jié)果：通過對(duì)板藍(lán)根中不同的菌敏感進(jìn)行檢驗(yàn)后得知，枯草芽孢菌的抑菌圈周圍不模糊，而且具有很強(qiáng)的敏感度。結(jié)論：通過利用微生物檢測(cè)的手段對(duì)板藍(lán)根的相應(yīng)成分有效控制，能夠達(dá)到良好的可行效果，從而能夠采取以往的檢測(cè)手法對(duì)板藍(lán)根藥材等相關(guān)制劑做出討論。

板藍(lán)根；微生物檢定法；生物效價(jià)

板藍(lán)根和西藥性質(zhì)之間存在一定的差異性，中藥通常具有很多的活性成分能夠達(dá)到藥理的效果。目前，我國(guó)醫(yī)藥行業(yè)對(duì)中藥的相關(guān)品質(zhì)引起了重視，中藥的品質(zhì)主要將理化測(cè)定作為對(duì)象，也就是所說的通過對(duì)中藥化學(xué)成分做出相關(guān)檢驗(yàn)。但是，由于中藥不單只是起到活性成分的效果，也不是各種活性成分聚集在一起，特別是針對(duì)復(fù)方制劑藥物而言，相關(guān)人員只能對(duì)小部分成為做出合理控制，并不能對(duì)所有的品質(zhì)以及臨床所產(chǎn)生的效果做出控制。為了確保中藥品質(zhì)具有一定的安全性，相關(guān)人員應(yīng)當(dāng)在確保品質(zhì)的基礎(chǔ)上采取活性測(cè)定的形式，用來對(duì)中藥的整體品質(zhì)做出有效評(píng)價(jià)，確保中藥可靠性。板藍(lán)根屬于我國(guó)一種中藥，它有很多的優(yōu)點(diǎn)，不但能夠清熱解毒，而且還能夠達(dá)到消腫的效果。板藍(lán)根有很多的成分，倘若使用指紋圖譜進(jìn)行控制其品質(zhì)對(duì)含量有一定的缺乏性，主要治療的癥狀和當(dāng)前醫(yī)學(xué)感染性疾病之間存在相同之處，具有殺菌等多方面的優(yōu)點(diǎn)，所以使用抗菌活性能夠體現(xiàn)出其價(jià)值。對(duì)此，本次試驗(yàn)主要依據(jù)西藥有效成分的相關(guān)方式對(duì)制劑采取生物效價(jià)檢定法進(jìn)行了分析。

1、儀器與試藥

儀器與試藥多功能微生物自動(dòng)測(cè)量分析儀；高效液相色譜儀，色譜工作站；色譜柱；紫外可見分光光度計(jì)；生化培養(yǎng)箱；單人單凈化工作臺(tái)；高壓蒸汽滅菌器；雙頻脫氣智能型超聲混均儀；冰箱。板藍(lán)根對(duì)照藥材；板藍(lán)根片（規(guī)格為每片0.36g）；抗生素Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基、抗生素Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基；乙醚、乙醇、丙酮等均為分析純。試驗(yàn)菌：傷寒沙門氏菌、乙型副傷寒沙門氏菌、福氏志賀氏菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌。上述菌種經(jīng)活化后，用無菌生理鹽水配制成菌液，備用。

2、方法和結(jié)果

2.1 板藍(lán)根提取液的制備

取板藍(lán)根對(duì)照藥材十克，四份，分別加入八倍量水、乙醚、乙醇、丙酮，500W超聲提取三十分鐘，蒸干，提取物加五十毫升蒸餾水超聲提取一小時(shí)，過濾、濃縮成一毫升含一克生藥的提取液，4℃密封保存?zhèn)溆谩ｎA(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在四種提取溶劑中，乙醇的提取效果最好以板藍(lán)根中代表成分靛玉紅和腺苷為檢測(cè)指標(biāo)，因此，本文選擇乙醇提取物進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。

2.2 選擇實(shí)驗(yàn)菌株

通過實(shí)際實(shí)驗(yàn)證實(shí)了板藍(lán)根提取液對(duì)多種菌株都有很好的抑菌效果，根據(jù)相關(guān)原則及技術(shù)，采用二倍稀釋法對(duì)不同標(biāo)準(zhǔn)菌株的最小抑菌濃度進(jìn)行檢測(cè)，平板轉(zhuǎn)染法測(cè)定最小殺菌濃度；通過檢測(cè)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，采用福氏志賀氏菌時(shí)，“上文中提到的藥液所致的抑菌圈有多層圈現(xiàn)象，抑菌圈不清晰，調(diào)換培養(yǎng)基種類，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基和磷酸鹽緩沖液的pH，都不能很好地消除多層圈現(xiàn)象。而其他四種菌株效果良好，菌層生長(zhǎng)旺盛，抑菌圈邊緣清晰，敏感度較高，可見板藍(lán)根提取液對(duì)枯草芽胞桿菌敏感，故選擇枯草芽胞桿菌為測(cè)定菌株。

2.3 制備雙碟

相關(guān)人員應(yīng)當(dāng)恰當(dāng)?shù)氖褂秒p碟，并且對(duì)其進(jìn)行合理的分配，采取濕熱菌后融化的形式，從而確保在雙碟下面攤布保持均勻的效果，然后將其放置到相應(yīng)工作臺(tái)做好凝固處理，并且將其當(dāng)做地底層。除此之外，相關(guān)人員采取滅菌培養(yǎng)方式或者是加熱融化的形式放置到不超過 50°的地方，緊接著加入相應(yīng)的溶液，并且在所有雙碟里面都放入 5毫升，從而做好底層攤布的工作，當(dāng)做菌層，最后將其放置到指定的地方進(jìn)行冷卻即可。

2.4 培養(yǎng)條件的設(shè)定

將對(duì)照所用藥材溶液制成溶液，并加入上文中制備的雙碟，放入恒溫培養(yǎng)箱中，將溫度分別調(diào)至 30°、35°、37°，結(jié)果顯示，在 30°時(shí)抑菌圈菌層較薄，35°時(shí)出現(xiàn)抑菌圈邊緣毛邊，37°時(shí)菌層生長(zhǎng)旺盛且抑菌圈邊緣清晰。培養(yǎng)時(shí)間十小時(shí)以內(nèi)藥液擴(kuò)散不完全，抑菌圈過小；培養(yǎng)十四小時(shí)左右有明顯的抑菌圈產(chǎn)生但仍殘留部分藥液，培養(yǎng)十八小時(shí)抑菌圈清晰，菌層生長(zhǎng)旺盛。培養(yǎng)十八小時(shí)后未見抑菌圈進(jìn)一步擴(kuò)大，反而會(huì)滋生其他細(xì)菌，影響測(cè)量。根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定培養(yǎng)溫度為37°，培養(yǎng)時(shí)間為十八小時(shí)。

2.5 中心濃度的選擇

采用二倍稀釋法配制板藍(lán)根提取液各種濃度的藥液，取備妥的雙碟27只，分為9組，每組3只。每組各碟內(nèi)3只牛津杯內(nèi)分別滴滿板藍(lán)根對(duì)照藥材 9種質(zhì)量濃度的藥液，在規(guī)定的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下培養(yǎng)18h，取出，用多功能微生物自動(dòng)測(cè)量分析儀測(cè)抑菌圈直徑大小，取平均值，結(jié)果數(shù)據(jù)分析得出0.0625g·mL-1對(duì)照藥材溶液的抑菌圈大小合適，符合實(shí)驗(yàn)要求，故定其為試驗(yàn)中心濃度，并定為1U·mL-1。

2.6 生物效應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的確定

精密移取板藍(lán)根對(duì)照藥材溶液，劑量按等比級(jí)數(shù)稀釋，以1∶0.8為劑距，中心濃度為0.0625g·mL-1，用蒸餾水稀釋成8種質(zhì)量濃度的溶液。令中心濃度為1U·mL-1，則分別為0.46、0.58、0.72、0.90、1.12、1.40、1.75和2.19U·mL-1的溶液。

3、討論

相關(guān)人員通常將藥物效價(jià)測(cè)定與相關(guān)強(qiáng)度對(duì)比等方面做出檢驗(yàn)的時(shí)候，一般利用生物檢測(cè)法的方式進(jìn)行檢驗(yàn)，這種方式主要對(duì)含量較少等制劑而言，是采取控制品質(zhì)通常應(yīng)用的一種方式；相關(guān)人員在對(duì)藥材進(jìn)行提取選擇的方式過程中，因?yàn)樘崛〉娜軇?duì)中藥藥效會(huì)產(chǎn)生一定的干擾，因此相關(guān)人員應(yīng)當(dāng)結(jié)合實(shí)際情況，利用各種各樣的提取方式對(duì)液劑進(jìn)行有效提取，結(jié)果表明：通過采取乙醇的方式對(duì)板藍(lán)根溶劑提出時(shí)，效果最為理想；相關(guān)人員利用生物檢定法可以根據(jù)多種制造廠家，多種藥品的相關(guān)抗菌效果做出合理的判斷，對(duì)抗菌活性做出合理的評(píng)價(jià)，從而能夠在最大程度上體現(xiàn)抗菌的有效性。不但能夠?qū)λ幤匪某煞忠约捌焚|(zhì)做出準(zhǔn)確檢查，與此同時(shí)還能夠?qū)υu(píng)價(jià)藥效的好壞，而且還可以采取和以往檢驗(yàn)方式之間進(jìn)行有效結(jié)合的形式來對(duì)藥品的整體品質(zhì)做出合理控制。

通過以上內(nèi)容的整體論述，可以看出：通過采取微生物檢測(cè)的方法能夠很好的對(duì)板藍(lán)根以及相關(guān)制劑做出有效的預(yù)防，并且起到預(yù)期效果，筆者根據(jù)多年經(jīng)驗(yàn)以及實(shí)際情況，提出相關(guān)見解，希望可以和相關(guān)人員互相學(xué)習(xí)，僅供參考。

[1]劉文,張明軍,郭斌,李漁歡,朱娜,文浪,伍勇.復(fù)方板藍(lán)根制劑對(duì)小鼠生長(zhǎng)性能和免疫力的影響[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志.2014(01)

[2]饒金華,王京輝,李東輝,傅欣彤,郭洪祝.板藍(lán)根口服液定性定量方法的研究[J].藥物分析雜志.2013(09)

[3]蕭毅鵬,李鎮(zhèn)華,李泳娜,林金結(jié).板藍(lán)根制劑所致 29例不良反應(yīng)回顧性分析[J].中醫(yī)臨床研究.2013(14)

[4]令紅艷.不同板藍(lán)根制劑腺苷含量測(cè)定及其抗炎作用比較[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志.2012(11)

[5]石燕紅,謝志勇,吳迎春,李醫(yī)明,王瑞,王崢濤.RP-HPLC測(cè)定板藍(lán)根制劑中R,S-告依春[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志.2011(08)

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1672-5018（2016）12-146-01