NPRL2與肝細胞癌大小相關性研究

吳成軍 王錫英 江金燕 許曉雅 潘德標 葉冠雄

溫州醫學院附屬第六醫院浙江省麗水市人民醫院普外科 浙江麗水 32300

NPRL2與肝細胞癌大小相關性研究

吳成軍 王錫英 江金燕 許曉雅 潘德標 葉冠雄

溫州醫學院附屬第六醫院浙江省麗水市人民醫院普外科 浙江麗水 32300

目的：NPRL2在肝細胞癌大小相關性。方法：收集本院手術切除的HCC組織標本56例,按肝癌大小分組：甲組≤2cm，乙組＞2cm ≤5cm，丙組＞5cm，采用熒光定量PCR法檢測NPRL2蛋白和mRNA的表達情況。結果：肝癌組織中NPRL2蛋白和NPRL2 mRNA的表達在丙組最高。結論：在肝癌中NPRL2 mRNA和蛋白水平較與腫瘤大小成正相關。

肝癌；抑癌基因；NPRL2

抑癌基因NPRL2（nitrogen permease regulator like 2）也稱腫瘤抑制候選基因4（tumor suppressor candidate 4,TUSC4）,廣泛存在于人體各種組織中，定位于人染色體3p21.3區域，Kok等[1]認為在該區域內存在一個乃至多個與腫瘤發生密切相關的抑癌基因。 Lerman等[2]從人 3號染色體短壁上克隆得到抑癌基因 NPRL2（nitrogen permease regulator like 2），研究發現該基因的失活與多種腫瘤的發生發展關系密切，但其具體的抑癌機制尚不明確。 研究發現，人類多種腫瘤組織（如肺癌、乳腺癌、鼻咽癌、卵巢癌和腎癌等）中的表達明顯降低。但其與肝細胞肝癌的的關系研究甚少。本文研究探討NPRL2在肝細胞肝癌中的表達情況與腫瘤大小關系，采用熒光定量PCR法檢測NPRL2蛋白和mRNA的表達情況。

1 資料與方法

1.1 研究對象：收集本院手術切除的HCC組織標本56例（經病理學證實為原發性肝細胞性肝癌,所獲標本均獲得本院倫理委員會批準書及患者知情同意書）。所有患者術前均未接受過放射治療和化學治療。新鮮組織在手術后立即去掉壞死組織、血塊，將收集的標本分2份，1份30min內以液氮保存，并放入-80℃冰箱中保存，另1份放入4%多聚甲醛溶液固定。

主要試劑：免疫組化化學試劑盒購自上海生工生物有限公司，NPRL2鼠抗人單克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，超敏SP試劑盒、DAB均購自上海Genetech公司，Trizol總RNA抽提試劑盒購自上海生工生物公司，逆轉錄酶（MMLV-RT）購自美國 Promega公司，Real-time PCR專用Sybergreen 熒光染料購自美國 Biorad 公司。

1.2 實驗方法:

熒光定量PCR檢測NPRL2 mRNA的表達：采用引物設計軟件（Primer 5.0）進行引物序列設計：NPRL2 上游引物：5 -CAGGGGTTACAGACTTGGGT-3ˊ，下 游 引 物 : 5 -TGTAACTGGGCTTGGTGAT-3 ,內參基因 GAPDH上游引物：5 -GAGACACCGCTCTTCTTG-3ˊ，下游引物：5 -TGACTGTCCGTTGAACTTG-3ˊ。按Trizol 常規法抽提組織總 RNA ,去除基因組DNA，RNA定量后逆轉錄；取才cDNA 1μl 進行熒光定量PCR實驗；分析實驗數據，出示實驗報告。

1.3 標本分組情況

甲組≤2cm，12例；乙組＞2cm ≤5cm，28例；丙組＞5cm，16例。

1.4 統計學方法：用SPSS17.0統計軟件分析，計量資料以均值±標準差表示，采用單因素方差分析檢驗組間差異的顯著性。計數資料以陽性率表示，采用卡方檢驗。

2 實驗結果

肝癌組織中NPRL2蛋白的檢測：

肝癌組織中NPRL2 mRNA的表達：各樣本的擴增曲線呈線性關系，溶解曲線呈單峰。丙組，乙組和甲組NPRL2基因的表達水平分別是：1.732±0.253、 4.043±0.362和5.123±0.182（P＜0.5）。

3 討論

NPRL2生物間有高度保守性，小鼠的NPRL2蛋白有97%和人類相同。研究證實，NPRL2在許多正常組織中均有表達，如：肝臟、腎臟、肺和胰腺。而在許多腫瘤中表達明顯降低，如肺癌、鼻咽癌、乳腺癌、卵巢癌和腎癌等。研究結果證實，該基因與DNA錯配修飾、細胞周期信號轉導以及細胞凋亡途徑密切相關。這些研究提示，NPRL2基因能有效干擾多種腫瘤細胞的生長，其可能在肝癌的發生和發展中起重要作用。本研究結果顯示，NPRL2蛋白的陽性信號主要定位于胞質和（或）胞核中。在肝癌中NPRL2 mRNA和蛋白水平與腫瘤表達成正相關。

綜上所述，NPRL2在肝癌中表達情況與腫瘤大小成正相關，可以運用在我們臨床工作中。

[1] Kok K.Nayler SL .Buys CH.Deletions of the short arm of chromosome 3 in solid tumors and the search for suppressor genes [J].Adv Cancer Res ,1997,71:27-92.

[2] Lerman MI.Minna JD.The 630-kb lung cancer homozygous deletion region on human chromosome 3p21.3; identification and evaluation of the resident candidate tumor suppressor gene[J].Cancer Res .2000.60(21):6116-6133.

R596.2

A

1672-5018（2016）12-028-01

浙江省麗水市科技局公益性資助項目 編號： 2013JYZB39。

吳成軍，男，（1974.3— ），四川鄰水人，醫學碩士，主任醫師，從事肝膽胰臨床及科研工作。