新疆地區口腔頜面部淋巴瘤患者EBV感染與臨床病理特征的相關性分析

胡露露 張晉 劉慧 龔忠誠 凌彬 克熱木·阿巴斯 尹小朋 邵博 王冰 林兆全

[摘要]目的：通過檢測口腔頜面部淋巴瘤患者的EBV水平，分析其與臨床病理特征之間的相關性。方法：選取2014年1月1日至2015年1月1日在新疆醫科大學第一附屬醫院收住的口腔頜面部淋巴瘤患者，采用ISH技術檢測EBV的水平，從性別、年齡、腫瘤部位、HL淋巴結內外、病灶數量、臨床分期、腫瘤分型、病理類型、LDH水平等方面分析其相關性。結果：ISH技術檢測EBV感染陽性者占45%。與性別、年齡、腫瘤部位、病灶數量無關（P>0.05）；與HL淋巴結內外發生部位（結內60%，結外25%，P=O.012）、臨床分期（I+II：30.8%，III+IV：71.4%，P=O.023）、腫瘤分型（NHL：54.9%，HL：11.1%，P=O.017）、病理類型（NKT：84.6%，BCL：23.1%，TCL：20%，HL：11.2%，P=O.034）、LDH水平（LDH>250mmol/l：60%，LDH≤250mmol/1.36%，P=O.026）有關（P<0.05）；HL淋巴結內外發生部位、臨床分期、腫瘤分型、病理類型、LDH水平均是頜面部淋巴瘤患者EBV感染的獨立危險因素（P<0.05）。結論：EBV感染在口腔頜面部淋巴瘤患者呈高度陽性表達，HL淋巴結內外發生部位、臨床分期、腫瘤分型、病理類型、LDH水平均是頜面部淋巴瘤患者EBV感染的獨立危險因素。

[關鍵詞]口腔頜面部腫瘤；惡性淋巴瘤；EB病毒；臨床病理特征；相關性分析

[中圖分類號]

R739.8

[文獻標志碼]A

[文章編號]1008-6455（2016）02-0024-04

淋巴瘤原發于淋巴結或淋巴組織，是一種惡性腫瘤，全身各部位均可發生。近年來，口腔頜而部淋巴瘤發病率上升快，占頭頸部腫瘤的3%，占全身淋巴瘤的8%-27%。EB病毒（EPstein-Barr virus，EBV）屬于皰疹病毒亞科，病毒潛伏，易致腫瘤發生。研究表明，許多腫瘤發生與EBV感染有關，如鼻咽癌、何杰金氏病、伯基特淋巴瘤等。本研究通過對在我院收治的40例口腔頜而部淋巴瘤患者進行分析，探索口腔頜而部淋巴瘤的臨床病理特征與EBV感染的相關性，為臨床治療提供理論依據。

1 對象和方法

1.1 一般資料

收集2014年1月1日201 5年1月1日在新疆醫科大學第一附屬醫院口腔頜而外科首診的，經病理學檢查確診為非霍奇金淋巴瘤的病例40例，其中男22例，女18例；年齡24-75歲，平均年齡（52.8±6.4）歲，中位年齡（51.7±5.6）歲，臨床分期：I期：12例，II期：14例，III期：14例，IV期：IO例。

1.2 儀器與試劑

CD20、CD79a、Pax-5. CD15、CD30. CD45Ro.CyclinDI、CD23、CD5、Ki-67、HMB45、S-IOO、CKpan、波形蛋白、CDIO，ALK、CD65、CD56封閉液+一抗，兔抗鼠免疫組化二抗試劑盒，DAB試劑盒，過氧化氫，多聚賴氨酸，0.01%檸檬酸鈉緩沖液；二甲苯，無水乙醇，石蠟，蘇木素，中性樹膠（中國常州山峰化工有限公司）。

超凈工作臺（美國Formal）；普通離心機（上海飛鴿）；倒置顯微鏡（日本Olympus）；組織包埋機（日本SAKURA）；脫水機（日本TIYODA）；超薄切片機（德國Leica）；臺式恒溫振蕩器（上海精宏）；計算機圖像分析系統（美國惠普）。

1.3 方法及診斷

入組病例為手術切除標本及活檢標本，均行HE染色及免疫組織化學染色，由2名高年資病理醫師閱片。參照WHO（2008版）造血與淋巴組織腫瘤分型。免疫組織化學采用二步法，包括CD20、CD79a、Pax-5、CD15、CD30、CD45Ro、CyclinDI、CD23、CD5、Ki-67、HMB45、S-IOO、CKpan、波形蛋白、CDIO、ALK、CD65、CD56等。

1.4 ISH檢測

應用ISH技術檢測40例淋巴瘤石蠟包埋組織EBV的感染情況，采用地高辛標記的EBER RNA寡核苷酸探針，與EBV編碼的小RNA互補結合。連續切片，厚度3-4μm，附于3氨丙基三乙氧硅烷（APEC）處理過的載玻片上。58℃烤片2h，二甲苯脫蠟lOmin，無水乙醇浸泡5min。空氣干燥，加胃蛋白酶于37℃環境下消化30min，梯度乙醇脫水、空氣干燥。滴加探針，加蓋玻片，37℃孵育過夜。PBS沖洗，加辣根過氧化物酶標記的地高辛抗體，37℃孵育30min，DAB顯色，蘇木精復染。分別使用陽性對照探針與陰性對照應用于已知的陽性切片。

1.5 結果判斷結果

陽性信號呈紫藍色，定位于細胞核，每（20×10）倍視野中陽性細胞數≤1%為1分，2%-lO%為2分，11%-50%為3分，大于等于51%為4分。1-4分為陽性，O分為陰性。

1.6 統計學方法

采用SPSS17.O統計軟件，淋巴結轉移與各臨床病理特征關系的單因素分析采用卡方檢驗，多因素分析采用Logistic回歸模型，以P

2 結果

2.1 頜而部淋巴瘤的臨床病理特征與EBV感染的相關性

入組的40例頜而部淋巴瘤患者中，出現EBV感染有18例，占45%。從性別、年齡、腫瘤部位、HL淋巴結內外、病灶數量、臨床分期、腫瘤分型、病理類型、LDH水平進行比較，性別、年齡、腫瘤部位、病灶數量各亞組間比較差異無統計學意義（P>O.05）；HL結內占60%，高于結外，差異有統計學意義（P<0.05）；臨床分期方而，III+IV期者71.4%，高于I+II期，差異有統計學意義（P<0.05）；腫瘤分型上，NHL占54.9%，HL占11.1%，差異有統計學意義（P<0.05）；病理分型中，NKT出現EBV感染者占76.9%，BCL占23.1%，TCL占200h，HL占11.1%，差異有統計學意義（P250mmol/l者占60%，高于LDH≤250mmol/l者，差異有統計學意義（P<0.05）；具體結果見表1所示。

2.2 頜而部淋巴瘤的臨床病理特征與EBV感染的多因素分析

對HL淋巴結發生部位、臨床分期、腫瘤分型、病理類型、LDH水平進行logistic多因素分析，結果發現，HL淋巴結發生部位、臨床分期、腫瘤分型、病理類型、LDH水平均是頜而部淋巴瘤患者EBV感染的獨立危險因素，其相對危險度見表2。

3 討論

惡性淋巴瘤發生于淋巴細胞及前體細胞，首發癥狀為肉眼可見的，呈局灶性的腫瘤性質的腫物。淋巴瘤分兩大類：霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤，后者占淋巴瘤總數的80%-90%。EBV主要入侵人體的口腔、鼻咽部淋巴組織，感染B淋巴細胞、T淋巴細胞，約90%成人血清中可檢測到EBV抗體，EBV隱性感染者可終身攜帶。截至目前的研究發現，EBV感染與鼻咽癌、淋巴瘤、淋巴組織增生性疾病有關。然而，EBV感染與淋巴瘤的臨床病理特征是否有相關性，研究者們仍未經研究證實。

在本研究ISH技術檢測EBV感染情況，出現EBV感染有18例，占45%。男性患者約45.5%出現EBV感染，女性占44.5%，60歲以下有52.2%出現EBV感染，60歲以上占35.3%。有研究者發現，該病發病男性患者偏多，年齡2-82歲，男女比例2.4：1。口腔頜而部淋巴瘤發生于牙齦、腭、頰、頜骨等部位，多為非霍奇金淋巴瘤。本研究中，發生于腮腺者占62.5%，牙齦區占71.4%，硬腭占57.1%，下頜骨占50%，在發病部位上無明顯差異。口腔頜而部淋巴瘤多為淋巴結外病變，有的表現為無淋巴結受累，發生于頜而骨的伯基特淋巴瘤都存在EBV感染。本研究中，NHL占54.9%，明顯高于HL的11.1%，HL結外者占60%，高于結內，提示HL淋巴結內外發病與EBV感染有關。此外，本研究還從病灶數目、臨床分期、腫瘤分型、LDH水平等方而進行比較發現，單發病灶占39. 3%，多發者占58.3%，無明顯差異，III+IV期者71.4%，高于I+II期；NKT出現EBV感染者占76.9%，BCL占23.1%，TCL占20%，HL占11.1%； LDH>250mmol/l者占60%，高于LDH≤250mmol/l者。表明，EBV感染與頜而部淋巴瘤的臨床分期、腫瘤分型、LDH水平具有相關性。

進一步對單因素分析結果行logistic多因素分析發現，HL淋巴結內外發生部位、臨床分期、腫瘤分型、病理類型、LDH水平均是頜而部淋巴瘤患者EBV感染的獨立危險因素。在EBV的作用機制上，EBV通過gp350結合CD21，通過受體介導的細胞內吞作用進入被感染細胞，感染B淋巴細胞后，DNA自我復制。在口腔頜而部淋巴瘤中，NHL較HL更多見，約占總數的5%。EBV與經典型HL所有亞型相關，但EBV感染是NHL的非主要事件，是病因、促發因素、伴隨因素尚未證實。Kimura指出，口腔頜而部淋巴瘤與EBV感染有關的常發生于淋巴結外組織。口腔頜而部EBV陽性淋巴瘤以NK/T為主，EBV感染與NK/T細胞淋巴瘤的生、發展密切相關。這均與本研究結果相近似。

綜上所述，EBV感染在口腔頜而部淋巴瘤患者呈高度陽性表達，與性別、年齡、腫瘤部位、病灶數量無關，HL淋巴結內外發生部位、臨床分期、腫瘤分型、病理類型、LDH水平均是頜而部淋巴瘤患者EBV感染的獨立危險因素，可能在淋巴瘤的發生、發展過程中發揮重要作用。EBV感染與口腔頜而部淋巴瘤發生發展的具體機制仍需進一步實驗研究，為臨床上尋找淋巴瘤新的治療方式提供理論依據。