一次性完成結核分枝桿菌鑒定與利福平耐藥突變基因檢測的新方法

孟繁榮 牛 群 雷 杰 劉煒雯 譚守勇 劉志輝

一次性完成結核分枝桿菌鑒定與利福平耐藥突變基因檢測的新方法

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目的建立一種可同時進行結核分枝桿菌鑒定并檢測結核分枝桿菌利福平耐藥突變基因的分子方法。方法以“TGTTCTTCAAGGAGAAGCG”、“TCGTCGGCGGTCAGGTA”為上下游引物對101株結核分枝桿菌復合群及52株非結核分枝桿菌臨床分離株進行rpoB基因擴增及序列測定，并應用BLAST數據庫和DNAMAN軟件進行菌種與rpoB基因突變分析。結果在153例分枝桿菌臨床分離株中，104例鑒定為結核分枝桿菌復合群，49例被鑒定為非結核分枝桿菌，與16SrDNA基因序列鑒定方法符合率為96.73%，與傳統分枝桿菌菌種鑒定方法符合率為83%;在104例鑒定為結核分枝桿菌復合群菌株中，54例被檢測到rpoB基因突變，與比例法檢測利福平耐藥表型的符合率為96.15%。結論應用本引物進行rpoB基因序列分析可以一次性完成結核分枝桿菌鑒定與利福平耐藥突變基因檢測工作，有較大的臨床應用價值。

菌種鑒定;序列分析;利福平耐藥

【Author's address】 Guangzhou Chest Hospital，Guangzhou，510095，China

耐多藥結核病(MDR-TB)是結核病控制與臨床診療中的難題。目前其診斷主要依據臨床分離菌株的抗結核藥物敏感性結果，實驗過程包括分枝桿菌分離培養、菌種鑒定和結核分枝桿菌藥物敏感性試驗，過程繁瑣，耗時長，即便是目前較為快速先進的MGIT960也需4周左右，難以滿足臨床早期診斷的需求。涂片染色抗酸菌檢查簡便、快速，但不能鑒別分枝桿菌菌種和指示細菌耐藥性，不能診斷MDR-TB?！?br>