補腎健脾 解毒利咽法對IgA腎病模型大鼠血清TNF-a、IL-6的影響

王銀萍，張冬梅，王宏安，張洪寶，張守琳

(長春中醫藥大學附屬醫院腎病科，長春 130021)

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補腎健脾 解毒利咽法對IgA腎病模型大鼠血清TNF-a、IL-6的影響

王銀萍，張冬梅，王宏安，張洪寶，張守琳*

(長春中醫藥大學附屬醫院腎病科，長春 130021)

摘要：目的探討補腎健脾、解毒利咽法治療IgA腎病(IgAN)的作用機制。方法將72只Wistar大鼠隨機分為空白組，模型組，洛丁新組，補腎健脾、解毒利咽法高、中、低劑量組。采用口服BSA 和尾靜脈注射LPS 方法建立IgAN大鼠模型。觀察給藥8周后大鼠各時相尿紅細胞計數、24 h尿蛋白定量(UTP)、血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)的含量變化。結果與模型組相比，各組大鼠24 h UTP均有所下降，其中中藥中劑量組下降最為顯著(P<0.05)； 中藥各治療組尿紅細胞計數明顯減少(P<0.05)，以中藥中劑量組減少顯著(P<0.01)；洛丁新組尿中紅細胞計數無下降(P>0.05)。與空白組比較，模型組大鼠血清中TNF-α、IL-6均明顯升高，P<0.05)。與模型組比較，治療組大鼠血清中TNF-α、IL-6明顯減少(P<0.05)，以中藥中劑量組療效最顯著(P<0.01)。結論補腎健脾、解毒利咽法能降低IgAN模型大鼠血尿、蛋白尿，減少血清中TNF-α及IL-6的含量。

關鍵詞：補腎健脾;解毒利咽;IgA腎病;模型大鼠;TNF-α;IL-6

IgA腎病(IgAN)是我國比較常見的腎小球疾病，其發病率較高，約占慢性腎炎的30%～40%,是導致終末期腎病的主要原因之一[1-2]。其病理特征為腎小球系膜區呈彌漫性的IgA沉積伴以系膜增生，臨床主要表現為血尿及蛋白尿。補腎健脾、解毒利咽法由我院國醫大師任繼學教授提出，能有效降低IgAN患者血尿及尿蛋白，延緩腎功能惡化。為進一步探討該法治療IgAN的療效作用機制，進行本實驗研究。報道如下。

1材料與方法

1．1動物選擇6周齡健康清潔級雄性Wistar大鼠72只，體質量160～200 g，由吉林大學白求恩醫學院動物實驗室提供，實驗動物合格證號：SCXK(遼)2013-000。

1．2儀器、試劑及藥物熒光顯微鏡TXM-500C，上海天省儀器有限公司；全自動酶標儀318C，上海昨非實驗室設備有限公司；組織破碎機BIO-950，上海般諾生物科技有限公司。TNF-α及IL-6ELISA檢測試劑盒，由上海信裕生物科技有限公司提供；牛血清白蛋白、脂多糖，美國sigma公司；熒光素標記兔抗大鼠IgA抗體，北京博奧森生物技術有限公司。洛丁新由北京諾華制藥有限公司提供(國藥準字1050423H0)；補腎健脾、解毒利咽法中藥由長春中醫藥大學附屬醫院制劑室統一煎制。

1．3實驗方法

1．3．1造模方法大鼠購買后先飼養1周，以適應環境，隨機分為空白組，模型組，洛丁新組，補腎健脾、解毒利咽法中藥高、中、低劑量組。參照陸慧渝等[3]報道的方法制備動物模型，于第9周每組各選取2只，取腎組織行光鏡檢查驗證模型是否成功。

1．3．2分組及給藥驗證模型成功后，對照組給予洛丁新10 mg/(kg·d)灌胃；治療組給予中藥高、中、低32、16、8 g/(kg·d)劑量灌胃；空白組及模型組每天僅給予生理鹽水灌胃，4 mL/只。共給藥8周。

1．3．3觀測指標觀察大鼠的一般狀態，包括：體質量、毛發、排尿的顏色及尿量、分別于第0、4、6、8、10、12、14、16周末，用代謝籠收集24 h尿液，觀察尿液顏色，記錄尿量、肉眼血尿次數及程度，取部分尿液行24 h UTP測定，檢測尿沉渣尿紅細胞計數,采用ELISA法檢測血清中TNF-α和IL-6含量(按試劑盒說明書操作)。

2結果

2．1一般情況造模過程中大鼠共死亡7只，另外每組選取2只用于驗證模型是否成功。空白組大鼠在實驗過程中一般狀態始終良好。自造模4周各組大鼠出現進食和活動減少，毛色晦暗，體質量下降、腹瀉及尿色變深；自第10周開始給藥后治療組大鼠一般狀況明顯好轉，體質量有所增加。

2．2各組大鼠尿紅細胞計數比較見表1。

±s)　p/HP

注：與空白組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，△P<0.05；與洛丁新組比較，▲P<0.05；中藥組間比較，◆P<0.052．3治療前后各組大鼠24 h尿蛋白定量變化的比較見表2。

mg/24 h

注：與空白組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，△P<0.05；與洛丁新組比較，▲P<0.05；中藥組間比較，◆P<0.052．4治療后各組大鼠血清中TNF-α、IL-6含量的比較見表3。

組 別nTNF-αIL-6空白組 81.99±0.12 1.24±0.12 模型組 133.79±0.47# 3.32±0.63# 洛丁新組102.63±0.78△ 1.96±0.74△ 高劑量組102.01±1.05△▲ 1.16±0.63△▲ 中劑量組101.90±0.52△▲◆0.98±0.52△▲◆低劑量組101.95±0.76△▲ 1.05±0.85△▲

注：與空白組比較,#P<0.05；與模型組比較，△P<0.05；與洛丁新組比較，▲P<0.05；中藥組間比較，◆P<0.05

3討論

國醫大師任繼學教授認為，本病的病機核心為腎虛脾虧，而邪毒蘊結咽喉是本病發病的使動因素。咽喉屬腎絡肺，為外邪出入之門戶，邪毒從口鼻而入，盤踞于咽喉，形成乳蛾，從氣血之道侵犯于腎，形成伏邪，久而為毒，居于腎宮，形成咽喉→肺→腎的惡性循環[4-7]。因此，腎炎的發生與復發，以及病情的加重和咽喉密切相關[8-10]。因此任老提出補腎健脾、解毒利咽之大法，臨床應用40余年，療效顯著[11-13]。

方中生地黃、黃芪、黨參共為君藥補腎健脾以固本；金蕎麥苦寒，擅長清熱解毒、消腫散結，為治療咽喉腫痛、喉癥開關之要藥[14]；木蝴蝶、馬勃能清肺利咽，可治療肺熱咳嗽、喉痹、音啞；紫荊皮、郁金消腫解毒，活血通經；上藥合用能解毒散結，消散咽部邪毒；金櫻子酸甘平，入腎經，助君藥補腎攝精，土茯苓解毒除濕、消除尿蛋白；白茅根清熱利尿、涼血止血；生蒲黃化瘀利尿而止血，使血止而不留瘀；以上4味共為佐使藥，助君藥補腎攝精，解毒化瘀。

本實驗結果表明，中藥組可明顯減少尿中紅細胞計數，明顯降低血清中TNF-α、IL-6的含量。筆者認為，補腎健脾、解毒利咽法中藥通過降低血清中TNF-α、IL-6的含量，抑制腎小球系膜細胞的增值及細胞外基質的生產，從而延緩腎功能惡化。

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Bushenjianpi and Jieduliyan method to TNF-α,IL-6 of IgA nephropathy rat model

WANG Yinping,ZHANG Dongmei,WANG Hongan,ZHANG Hongbao,ZHANG Shoulin*

(Department of Nephrology,The Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130021,China)

Abstract：ObjectiveTo study the effect and mechanism of Bushenjianpi and Jieduliyan method on IgA nephropathy.MethodsThe 72 Wistar rats were randomly divided into blank group,model group,Lotensin group,Bushenjianpi and Jieduliyan high,medium and low dose group (is called traditional Chinese medicine high,medium and low dose group for short).The IgA nephropathy rat model were established by the method of feeding with bovine serum albumin (BSA) and injecting tail vein with lipopolysaccharide (LPS).Eight weeks administration later,each phase’s urine red blood cell count,UTP,TNF-αand IL-6 content were observed.ResultsCompared with model group,every groups’ UTP decreased and traditional Chinese medicine dose group decreased extraordinary(P<0.05).Compared with model group,urine red blood cell count decreased significantly of every traditional Chinese medicine group(P<0.05),especially traditional Chinese medicine medium dose group improved significantly (P< 0.01),but Lotensin group urine red blood cell count no drop (P>0.05).Compared with blank group,TNF-αIL-6 on model group’s in diabetic rats serum were significantly elevated (P<0.05).Compared with model group,TNF-α,IL-6 of treatment groups in diabetic rats serum decreased significantly(P<0.05),compared with every group,traditional Chinese medicine medium dose group’s data is the most significant (P<0.01).ConclusionBushenjianpi and Jieduliyan method can reduce the model rats hematuria and proteinuria of IgA nephropathy,and reduce the content of IL-6 and TNF-αin serum which is better than Lotensin.

Keywords：Bushenjianpi;Jieduliyan;IgA nephropathy;model rats;TNF-α;IL-6

(收稿日期:2015-09-20)

文章編號：2095-6258(2016)01-0022-03

中圖分類號：R285.5

文獻標志碼：A

*通信作者：張守琳,女,博士,主任醫師,電話-15948000552，電子信箱-shoulin-z @163.com

作者簡介：王銀萍(1984-)，女，碩士，主治醫師，主要從事中醫腎病方向研究。

基金項目：吉林省科技廳自然科學基金項目(2015101214JC)；吉林省中醫藥管理局科技項目(2014-zd7)；吉林省教育廳“十二五”科學技術研究項目(2014第65號)。

DOI:10.13463/j.cnki.cczyy.2016.01.007