斑禿患者外周血白細胞介素-17與T淋巴細胞亞群的變化及意義

黃曉燕，范　晴，唐群力

(上海交通大學附屬第六人民醫院南院檢驗科,上海 201499)

?

·臨床研究·

斑禿患者外周血白細胞介素-17與T淋巴細胞亞群的變化及意義

黃曉燕，范晴，唐群力△

(上海交通大學附屬第六人民醫院南院檢驗科,上海 201499)

摘要:目的分析斑禿患者外周血白細胞介素-17(IL-17)和T淋巴細胞亞群的變化及其意義，以探討該病的發病機制，為臨床治療方案的制訂提供依據。方法選取2014年7月至2015年5月該院確診的斑禿患者86例，另選取40例健康者作為對照組，采用雙抗體夾心法和流式細胞學方法檢測外周血IL-17和T淋巴細胞亞群,并進行比較分析。結果局限性斑禿組CD3+T淋巴細胞與CD4+T淋巴細胞百分比均低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；普禿、全禿組CD3+T淋巴細胞、CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞百分比均低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；普禿、全禿組CD3+T淋巴細胞與CD8+T淋巴細胞百分比均低于局限性斑禿組，差異有統計學意義(P<0.05)；對照組40例(100.00%)IL-17百分含量均小于1%，斑禿組僅44例(51.16%)小于1%，IL-17百分含量為1%～<3%、3%～<5%、≥5%的患者分別占18.60%、12.79%、17.44%，明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。結論斑禿患者反映體內總淋巴水平的CD3+T淋巴細胞低于健康人群，局限性斑禿以CD4+T淋巴細胞為主，全禿、普禿由CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞共同作用所致。

關鍵詞:斑禿；白細胞介素-17；T淋巴細胞亞群

斑禿是一種突然發生的局限性脫發，患者局部皮膚正常，無疼痛等自覺癥狀，為皮膚科常見疾病[1-3]。斑禿既可見于成年人群，又可見于兒童，兩性發病率無明顯差異，少數患者可見散在的大面積脫發，當斑禿的面積達一半以上時為難治性斑禿。目前，對于斑禿的病因及發病機制尚未探究清楚，多認為是遺傳因素、機體免疫系統平衡失調為主，同時摻雜環境因素、精神壓力等因素共同作用所致[4]。斑禿患者具有明顯的遺傳易感性和家族聚集性，在外界環境、精神刺激等多種激發刺激因素作用下，發生針對自身生長期毛囊的細胞免疫反應。本文研究斑禿患者外周血白細胞介素-17(IL-17)和T淋巴細胞亞群的變化，并分析其所具有的意義。

1資料與方法

1.1一般資料2014年7月至2015年5月本院確診斑禿患者86例納入斑禿組，男47例，女39例；年齡18～52歲，平均(28.5±2.5)歲；發病時間1周至36個月；其中活動期斑禿(皮損區周圍毛發輕拉試驗陽性)38例，穩定期斑禿48例。根據發病類型將患者進一步分為：局限性斑禿組(54例)，普禿、全禿組(32例)。病例納入排除標準參照文獻[5-8]。納入標準：(1)符合《中國臨床皮膚病學》診斷標準；(2)年滿17周歲的患者，性別不限；(3)入選患者至少兩個月前未接受全身皮質醇類激素，以及其他免疫抑制劑、免疫調節劑治療，至少4周內未接受局部皮質醇類激素治療，也沒有接受其他生發類藥物治療；(4)患者積極參與和配合，有較好的依從性，便于隨訪和收集結果。排除標準：(1)癥狀相似的其他類型脫發，例如先天性脫發、假性脫發、瘢痕性脫發、頭蘚、盤狀紅斑狼瘡、扁平苔蘚及其他內分泌系統或免疫系統失調等導致的脫發；(2)孕婦及哺乳期婦女；(3)合并惡性進行性高血壓者，心功能、腎功能、肝功能不全等嚴重的重要臟器器質性疾病者、惡性腫瘤者及精神或智力障礙者；(4)合并其他不能脫離皮質醇類激素治療，以及其他免疫抑制劑、免疫調節劑治療疾病者；(5)局部有細菌、真菌感染或者有糜爛、滲出者。另于健康人群中選取40例作為對照組，男20例，女20例；年齡17～51歲，平均(29.2±3.4)歲；均無免疫相關性疾病，也無近期感染史。兩組年齡、性別等一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法[9-10]

1.2.1標本采集無菌采集斑禿患者及健康人外周靜脈血2 mL，添加肝素防止血液凝固，血標本應在4 h之內進行檢測。

1.2.2檢測方法(1)外周血T淋巴細胞亞群檢測：50 μL斑禿患者外周血加入5 μL 異硫氰酸熒光素標記的CD45(CD45-FITC)/藻紅蛋白標記CD4(CD4-RD1)/藻紅蛋白-德州紅-X標記CD8(CD8-ECD)/藻紅蛋白-花青苷5標記的CD3(CD3-PC5)抗體，室溫避光保存15 min后，加入溶血素300 μL，繼續室溫避光保存15 min，再加500 mL 0.9%生理鹽水，10 min后上流式細胞儀檢測。每次檢測前，儀器均經標準熒光微球校正，且其誤差率低于2%。(2)IL-17的測定：采用雙抗體夾心法。操作：以純化的人IL-17抗體包被微孔板，制成固相抗體，再向微孔中依次加入IL-17，再與生物素標記的IL-17抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體雙抗體復合物，經徹底洗滌加底物顯色。最終顏色的深淺和樣品中IL-17水平呈正相關。然后用酶標儀在450 nm波長下檢測吸光度值，進而通過標準曲線計算樣品中人IL-17的濃度[11]。

1.3觀察指標對比局限性斑禿組和對照組，普禿、全禿組和對照組，局限性斑禿組和普禿、全禿組的CD3+T淋巴細胞、CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞百分比，以及斑禿組和對照組外周血IL-17百分含量分布。

2結果

2.1各組外周血T淋巴細胞亞群比較與對照組比較，局限性斑禿組CD3+T淋巴細胞百分比與CD4+T淋巴細胞百分比均明顯降低，差異有統計學意義(t=2.208，P=0.030；t=3.171，P=0.002)，而CD8+T淋巴細胞百分比比較差異無統計學意義(t=0.598，P=0.551)；普禿、全禿組CD3+T淋巴細胞百分比、CD4+T淋巴細胞百分比及CD8+T淋巴細胞百分比均明顯降低，差異有統計學意義(t=6.376，P=0.000；t=3.713，P=0.000；t=6.823，P=0.000)。普禿、全禿組CD3+T淋巴細胞百分比、CD8+T淋巴細胞百分比均明顯低于局限性斑禿組，差異有統計學意義(t=3.835，P=0.000；t=4.863，P=0.000)，而兩組CD4+T淋巴細胞百分比比較差異無統計學意義(t=0.913，P=0.364)。見表1。

表1　　各組外周血T淋巴細胞亞群比較±s，%)

*：P<0.05，與對照組比較；#：P<0.05，與局限性斑禿組比較。

2.2斑禿組與對照組外周血IL-17百分含量分布比較對照組40例(100.00%)IL-17所占百分比均小于1%，而斑禿組只有44例(51.16%)小于1%，差異有統計學意義(P<0.05)；斑禿組IL-17百分含量為1%～<3%、3%～<5%、≥5%的患者分別占18.60%、12.79%、17.44%，明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2　　斑禿組與對照組外周血IL-17百分含量

3討論

T淋巴細胞受體(TCR)γδT淋巴細胞是近十幾年發現的免疫細胞亞群，研究發現其在斑禿患者外周血或其他相應組織的分布和數量異常。TCR由γ、δ兩條鏈組成，兩者的差異使得γδT淋巴細胞分為幾個亞群。IL-17是一類T淋巴細胞分泌的細胞因子，目前已知的包括IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E、IL-17F 6種，具有強大的致炎作用，此外，還可以誘導某些白細胞介素類、干擾素類、反應蛋白類及前炎性細胞因子的表達，進一步促進T淋巴細胞活化和局部頭皮毛囊組織的浸潤，加重自身免疫反應，擴大斑禿范圍及疾病發展速度，給患者身心帶來痛苦[12]。

本研究發現， 局限性斑禿組CD3+T淋巴細胞百分比、CD4+T淋巴細胞百分比明顯低于對照組，與范晴等[13]的研究結果一致，CD4+T淋巴細胞減少可能與局部自身免疫反應導致成熟淋巴細胞消耗、損傷、凋亡快于生成有關。首先，CD4+T淋巴細胞聚集于斑禿局部皮損處，通過分泌干擾素、腫瘤壞死因子等細胞因子抑制皮囊生長，打破免疫耐受而進行自身攻擊造成CD4+T淋巴細胞的過度消耗；另一方面，外周活化的CD4+T淋巴細胞啟動Fas/FasL等凋亡程序，加快自身凋亡。CD3分子與TCR以非共價鍵結合，形成TCR-CD3復合物，為所有T淋巴細胞表面的特征性標志，故CD3+T淋巴細胞水平代表了總淋巴細胞水平，CD4+T淋巴細胞減少必然會導致CD3+T淋巴細胞的減少；普禿、全禿組總淋巴細胞及各細胞亞群百分比均明顯低于對照組，與王琳等[14]的報道一致。正常情況下，主要組織相容性復合物(MHC)低表達，CD8+T淋巴細胞不被激活導致自身攻擊，使毛囊處于免疫豁免狀態，但當生長期低位毛囊上皮人類白細胞抗原(HLA)表達上調時，CD8+T淋巴細胞被活化，導致外周血CD8+T淋巴細胞減少。本研究還顯示，普禿、全禿組CD3+T淋巴細胞及CD8+T淋巴細胞百分比明顯低于局限性斑禿組，與相關研究報道一致[15-16]；此外，斑禿患者IL-17百分含量明顯高于健康人，荊月藜[17]也有過同樣的報道，表明斑禿的發生與IL-17水平升高有關，導致斑禿患者體內或局部組織內產生具有促進炎性反應的IL-17家族，IL-17介導的免疫調節作用啟動，患者的頭皮局部甚至大片毛囊區發生了針對自身成分的免疫攻擊，表現為局限性或彌漫性的脫發。

綜上所述，斑禿發病中IL-17的炎性作用極其重要，局限性斑禿以CD4+T淋巴細胞為主，全禿、普禿患者為CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞共同作用所致，應針對不同發病機制采取不同的治療方案。

參考文獻

[1]柳小婧，徐峰，韓毓梅，等．斑禿患者外周血Th17細胞的檢測[J]．中華皮膚科雜志，2014，47(11)：808-809．

[2]李園園，何慧英．5%米諾地爾酊治療斑禿臨床療效觀察[J]．臨床皮膚科雜志，2014，43(10)：631-632．

[3]陳偉．5%米諾地爾酊聯合卡介菌多糖核酸注射液治療斑禿療效觀察[J]．臨床皮膚科雜志，2014，43(5)：316-317．

[4]齊晉，匡玉琴．以梅花針為主的綜合療法配合專科護理治療斑禿的療效觀察[J]．中國美容醫學，2014，23(20)：1742-1743．

[5]張志紅，錢秋芳，周景．小兒藥疹173例臨床分析[J]．中國皮膚性病學雜志，2012，26(12)：1143．

[6]李正良，王新華．復方多黏菌素B軟膏預防尖銳濕疣激光治療后創面感染的療效觀察[J]．中國皮膚性病學雜志，2011，25(8)：647．

[7]葉超然，冉崇福，李碩，等．超激光照射療法治療斑禿的臨床療效觀察[J]．中華物理醫學與康復雜志，2014,36(9)：734-735.

[8]胡青梅，馮萍，黃望強，等．308 nm準分子激光聯合甘草酸苷治療斑禿療效觀察[J]．實用醫學雜志，2014，43(15)：2522-2523．

[9]陳萍萍，石松生，陳春美．膠質瘤患者圍手術期外周血T細胞亞群和自然殺傷細胞活性的變化及其臨床意義[J]．中華實驗外科雜志，2014，31(11)：2577-2579．

[10]楊闖，張永川，李華國，等．射頻消融對原發性肝癌患者外周血T細胞亞群及NK細胞變化的影響[J]．中國老年學雜志，2014，34(16)：4489-4490．

[11]朱小霞，程浩，胡勤樂，等．二期梅毒患者血清IL-17、IL-23和ROR-γt的檢測[J]．中國皮膚性病學雜志，2010，24(12)：1111-1112．

[12]孫波，宋玉國，王華，等．類風濕性關節炎IL-17檢測的臨床應用價值研究[J]．中國實驗診斷學，2014，18(11)：1797-1799.

[13]范晴，黃曉燕，沈鳳，等．黃芪顆粒聯合復方甘草酸苷治療斑禿療效評價[J]．中國麻風皮膚病雜志，2014，30(5)：303-305．

[14]王琳，高琳，王華．斑禿患者外周血T淋巴細胞亞群及CD4+CD25+調節T細胞的檢測[J]．中國皮膚性病學雜志，2008，22(11)：647-648．

[15]湯勇軍，鐘衛紅，羅文峰，等．肝腎不足型斑禿患者T細胞亞群的變化[J]．湖北中醫雜志，2015，37(2)：13-14．

[16]李玲，孫吉瑞，張國強，等．窄譜中波紫外線聯合復方甘草酸苷治療斑禿療效觀察[J]．山東醫藥，2014，54(46)：33-35．

[17]荊月藜．斑禿患者外周血IL-17+T細胞水平的變化與意義[D]．北京：北京中醫藥大學，2014．

(收稿日期：2015-10-11)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.036

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)05-0661-03

通訊作者△,E-mail：13611783597@163.com。