TGF- α在LASIK手術患者淚液中的表達及其臨床意義

趙瑞博，郭永紅，張凌子

(西安愛爾古城眼科醫院 屈光手術科，陜西 西安　710061)

?

TGF-α在LASIK手術患者淚液中的表達及其臨床意義

趙瑞博，郭永紅，張凌子

(西安愛爾古城眼科醫院 屈光手術科，陜西 西安710061)

[摘要]目的：探討轉化生長因子α(TGF- α)在準分子激光原位角膜磨鑲術(LASIK)患者淚液中的表達及其臨床意義。方法:將40例(80眼)在我院行LASIK手術治療患者作為研究對象，采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附分析法(ELSIA)檢測患者手術前后不同時間點淚液中TGF- α的表達情況，分析淚液中TGF- α濃度與角膜創傷愈合的關系。結果:LASIK術后1 d淚液TGF- α濃度最高，然后呈逐漸下降的趨勢，至術后3個月降至最低，且與術前水平相比較，差異無統計學意義(P>0.05)，而術后1、7 d及1個月的淚液TGF- α濃度與術前比較差異均有統計學意義(P<0.05)，且術后各個時間點比較差異有統計學意義(P<0.05)。LASIK術后，基質層角膜細胞減少值、基質層碎片計數以術后1 d最高，隨后不斷下降，術后不同時間點比較,差異有統計學意義(分別F=5.832、F=6.369，均P<0.05)；且基質層角膜細胞減少值、基質層碎片計數與淚液中TGF- α濃度呈正相關(分別r=0.68、0.61，P<0.05)。術后不同時間點的角膜內皮細胞計數比較，差異無統計學意義(P>0.05)，且與TGF- α濃度無相關性(P>0.05)。結論:LASIK術后淚液中TGF- α濃度呈先升高后降低至術前水平的趨勢，術后淚液中高度表達的TGF- α對角膜細胞的增殖、分裂、趨化、移行等過程具有很好的促進作用，有利于角膜創傷的愈合。

[關鍵詞]準分子激光； 原位角膜磨鑲術； 轉化生長因子α； 淚液； 角膜創傷愈合

準分子激光原位角膜磨鑲術(laserinsituker atomileusis，LASIK)是一種有效的角膜創傷修復手術，具有矯治范圍廣、可預測性好等優勢[1]。LASIK術后的角膜創傷修復是一種復雜的過程，受淚液中多種細胞因子的影響[2- 3]。淚液中存在多種含量較低的細胞因子，這些細胞因子參與眼表正常功能的維持及損傷修復的過程[4]，其中TGF-α是淚液中一種重要的多肽活性物質，能促進多種細胞的增殖與分化過程，促進組織修復、組織血管發生、傷口愈合等。此外，對角化細胞的生長和遷移也具有一定的刺激作用，還可參與機體的免疫反應過程[5]。作者對行LASIK手術患者手術前后淚液中TGF-α濃度的變化情況進行觀察，并分析其在角膜創傷愈合反應中的作用。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2013年1月至2014年1月在我院行LASIK手術治療的40例(80眼)患者作為研究對象。納入標準：所有患者均無眼疾、手術史、外傷史及角膜接觸鏡配戴史；圍手術期間所有患者均未使用過促上皮生長等影響角膜愈合的藥物；患者的眼屈光度穩定時間均較長(2年以上)；屈光度范圍：球鏡-2.0 D～-10.0 D范圍內，柱鏡<-3.0 D；術前患者的眼壓<21 mmHg；所有患者術前均經視力、眼底、眼壓、屈光度狀態、裂隙燈等檢查，未發現眼底、角膜厚度及地形圖存在異常；患者術前均知情同意并簽署知情同意書。排除標準：圓錐角膜、干眼、病毒性角膜炎活動期、慢性淚囊炎、視網膜病變及視神經病變、青光眼等影響術后角膜愈合疾病及其他眼科疾病；排除系統性紅斑狼瘡、類風濕關節炎等自身免疫性疾病患者，排除合并糖尿病患者；排除不配合研究患者。研究對象中18例(36眼)為男性，22例(44眼)為女性，年齡19～35(25.6±3.3)歲，術前等效球鏡度數為[(-4.46)±(-1.41)] DS。

1.2方法

1.2.1淚液標本收集同一例患者手術前，術后1 d、7 d、1個月、3個月的淚液標本收集均由一人操作完成。制作直徑為3 mm的圓形濾紙片，高壓消毒滅菌后將其放入術眼下穹窿外1/3處的結膜囊內，囑咐患者輕閉雙眼3 min，3 min后將濾紙取出并放入已經高壓消毒的EP管內，再放入冰箱(-20 ℃)保存待測。

1.2.2淚液標本中TGF-α濃度檢測淚液中TGF-α濃度采用ELSIA法檢測，試劑盒為美國R&D Systems公司生產，操作嚴格按照試劑盒的說明書進行。

1.3觀察指標

觀察LASIK術前，術后1、7d及1、3個月淚液中TGF-α的濃度。在共聚焦激光顯微鏡下選擇清晰的顯微圖像，由兩名實驗人員對基質角膜細胞、角膜基質層碎片、角膜內皮細胞進行手工計數，再根據NAVIS圖像分析軟件定量分析所有患者的基質層角膜細胞、角膜基質層碎片計數、角膜內皮細胞計數情況，取平均值，計算基質層角膜細胞減少值，并對術后不同時間點的統計數據進行比較。

1.4統計學處理

2結果

2.1LASIK術前、術后不同時間點淚液中TGF-α的表達見表1。

術后淚液中TGF-α濃度呈先升高后降低的趨勢，以術后1 d最高，術后1、7 d及1個月淚液TGF-α濃度與術前比較，差異均有統計學意義(P<0.05)；且術后不同時間點比較差異也有統計學意義(P<0.05)。

時 間TGF-α表達量/pg·ml-1術前177.62±58.53術后1d602.57±132.66術后7d445.48±85.93術后1個月252.36±69.71術后3個月185.32±44.23F值5.916P值0.015

2.2LASIK術后不同時間點基質層角膜細胞減少值、角膜基質層碎片計數、角膜內皮細胞計數比較見表2。

個/mm2

LASIK術后1 d角膜細胞減少值及基質層碎片計數最高，隨后不斷下降，術后不同時間點比較，差異有統計學意義(分別F=5.832、F=6.369，均P<0.05)。LASIK術后不同時間點的角膜內皮細胞計數比較，差異無統計學意義(F=0.872，P>0.05)。經Spearman相關性分析可知，基質層角膜細胞減少值、角膜基質層碎片計數與淚液中TGF-α濃度存在正相關性(分別r=0.68、0.61，P<0.05)，而角膜內皮細胞計數與TGF-α濃度無相關性(P>0.05)。

3討論

LASIK術后角膜創傷愈合機制較為復雜，許多學者對LASIK術后角膜創傷修復過程的機制進行了研究，發現修復過程與多種細胞及細胞因子各自的作用及相互間的作用密切相關[6- 7]。大量細胞因子、酶類、轉錄因子等構成一個整體網絡系統，參與角膜創傷修復過程的精確調控[8]。LASIK術后嚴格控制或減輕傷口愈合反應有利于獲得更滿意的治療效果[9]。

大量研究證實，在角膜的發育及角膜完整性的維持過程中，淚液中TGF-α表達具有十分關鍵性作用[10- 11]。TGF-α是一種由多種細胞產生的調控細胞生長的多肽類活性物質，同時也是一種強有力的促進細胞有絲分裂的正性生長因子，其生物學作用十分廣泛，分泌后結合表皮生長因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor，EGF- R)而發揮作用，能在多種細胞增殖與分化、組織修復、傷口愈合、角化細胞生長和遷移、免疫反應等過程中發揮很好的促進作用[12]。淚液中的TGF-α大多由角膜上皮細胞合成和分泌，少部分為外源性。TGF-α可促進角膜多種細胞的生物學過程，如細胞的增殖、分化和移行等，鄰近上皮細胞的增殖和移行可完成對角膜傷口的修復。此外，TGF-α還可通過正向調節TGF-β1的間接作用機制來促進角膜成纖維細胞的增殖、分化及細胞外基質分泌，從而進一步促進角膜創傷修復[13]。

本研究對LASIK術前、術后不同時間點淚液中TGF-α的表達量進行檢測，結果顯示，TGF-α濃度在術后1 d達到最高，術后各時間點淚液中TGF-α濃度比較差異有統計學意義(P<0.05)。提示淚液中TGF-α在術后早期高度表達，這與LASIK術對角膜的損傷有關。角膜上皮細胞對TGF-α最敏感，角膜出現損傷后，淚液中細胞因子TNF-α水平可產生很大的變化，在早期淚液中表達量可急劇增加，促進角膜細胞的增殖和移行，從而完成角膜傷口的修復過程。目前，國內外較多學者的研究中已發現了這一點，均認為LASIK術后淚液TGF-α表達量可發生較大的波動[14- 15]。但本研究還進一步發現，LASIK術后隨著時間的進展，淚液TGF-α表達量逐漸下降，尤其是3個月后，淚液中TGF-α的濃度接近于術前水平，術后1、7 d、1個月與術前比較差異有統計學意義(P<0.05)，表明隨著角膜創傷的修復，TGF-α表達水平逐漸恢復穩定狀態。這是由于手術應激導致機體角膜細胞釋放細胞因子參與創傷修復調控，創傷一旦修復，調控機制恢復正常狀態，故淚液TGF-α表達量恢復正常表達水平。本研究發現，LASIK術后基質層角膜細胞減少值、基質層碎片計數與淚液中TGF-α表達量的動態變化規律相似，且經Spearman分析存在正相關性，說明LASIK術后角膜創傷的愈合與TGF-α參與的角膜多種細胞生物學過程密切相關，通過促進細胞增殖、分化和移行等而實現對創傷修復的調控。對此，尚無較多的文獻報道，還有待于進一步研究。

[參考文獻]

[1] 盛小紅.準分子激光原位角膜磨鑲術前后淚液中轉化生長因子α(TGF-α)的表達[D].大連：大連醫科大學，2010．

[2] 丁月.LASIK手術前后淚液中肝細胞生長因子含量的變化[D].大連：大連醫科大學，2012．

[3] 陳靜，陳藝，韓蘇寧，等.Epi- LASIK術中上皮瓣去留對術后角膜上皮下霧狀混濁及淚液中TGF-β1的影響[J].南方醫科大學學報，2013，33(5):631- 634．

[4] 牛廣增.準分子激光原位角膜磨鑲術后淚液中神經生長因子表達與角膜知覺恢復的研究[D].石家莊：河北醫科大學，2011．

[5] 牛廣增，蘇蕊，范玉香，等.準分子激光原位角膜磨鑲術后淚液中神經生長因子表達與角膜知覺恢復的研究[J].眼科新進展，2012，32(11):1050- 1053．

[6] DU Z，ZHAO W，HUANG Z，et al.Inhibition effect of tetrandrine on haze formation after Epi- LASIK surgery in rabbits[J].Curr Eye Res，2011，36(8):699- 705．

[7] TORII H，NEGISHI K，WATANABE K，et al.Myopic regression after phakic intraocular lens implantation and LASIK[J].Optometry Vision Sci，2014，91(2):231- 239．

[8] QUEIROS A，VILLA- COLLAR C，JORGE J，et al.Peripheral refraction in myopic eyes after LASIK surgery[J].Optometry Vision Sci，2012，89(7):977- 983．

[9] KIM S J，CHUNG T W，CHOI H J，et al.Ganglioside GM3 participates in the TGF- beta 1- induced epithelial- mesenchymal transition of human lens epithelial cells[J].Biochem J，2013，449(Pt.1):241- 251．

[10] KIM Y W，PARK J，LEE H J，et al.TGF-βsensitivity is determined by N- linked glycosylation of the type Ⅱ TGF-βreceptor[J].Biochem J，2012，445(3):403- 411．

[11] 周遠沛.堿性成纖維細胞生長因子對LASIK術后角膜神經修復和角膜知覺恢復的影響[D].鄭州：鄭州大學，

2014．

[12] 廉井財，顧麗瓊，石海云，等.準分子激光原位角膜磨鑲術前后淚液中TNF-α、IL- 2和NGF的表達[J].上海交通大學學報：醫學版，2008，28(6):669- 671．

[13] 郭秀瑾.不同方式的準分子激光表面切削術后角膜創傷愈合反應的實驗研究[D].石家莊：河北醫科大學，2010．

doi：10.3969/j.issn.1671- 6264.2016.02.022

[中圖分類號]R779.65

[文獻標識碼]B

[文章編號]1671- 6264(2016)02- 0239- 03

[作者簡介]趙瑞博(1976-)，男，陜西西安人，主治醫師，在讀碩士研究生。E- mail: 2544249223@qq.com

[收稿日期]2015- 09- 22[修回日期] 2015- 12- 24

[引文格式] 趙瑞博，郭永紅，張凌子.TGF-α在LASIK手術患者淚液中表達及臨床意義[J].東南大學學報:醫學版，2016，35(2)：239- 241.

·論著·