試析反相高效液相色譜法分析注射用氨芐西林鈉有關物質

高 波

哈藥集團制藥總廠 黑龍江哈爾濱 150000

試析反相高效液相色譜法分析注射用氨芐西林鈉有關物質

高 波

哈藥集團制藥總廠 黑龍江哈爾濱 150000

目的：利用反相高效液相色譜法進行注射用氨芐西林鈉有關物質的進行測定，并且對相關的物質進行分析。方法：使用的是UltimateTMXBC18(5μm，4.6mm×250mm)色譜柱，流動相A是12%的醋酸溶液．2mol／L磷酸二氫鉀溶液一乙腈一水，比例分別是0.5：50：50：900，流動相相B是12%的醋酸溶液-0.2mol／L磷酸二氫鉀溶液一乙腈-水，比例分別是0.5：50：400：550，穩住必須要達到35℃，從流速上來看，需要達到1.0ml/min，色譜法檢測的波長是254nm。結果：注射用氨芐西林的相關物質能夠分離，氨芐西林閉環二聚物、氨芐西林開環二聚物和L-氨芐西林在主峰上的保留時間分別是3.5、2.8、0.7倍處出峰。結論：對注射用氨芐西林鈉的三種雜質峰位進行定位。

反相高效液相色譜法；注射用氨芐西林鈉；物質測定

氨芐西林在臨床上使用的是極為廣泛的，這是一種抗生素，這種抗生素屬于 B-內酰胺類，有著貯存不穩定的特點，尤其是水溶液，非常不穩定，在使用的過程匯總是極容易出現損壞和變質的。臨床使用氨芐西林的過程中，如果產生了免疫，主要是由于在生產和貯存的過程中產生了高分子聚合物等引起的，因此要對聚合物雜志進行科學的定位，除此之外，還要進行限量的檢測。在實驗的過程中，需要根據規定使用2.8倍主要成分在保留時間處的雜質峰是不明顯的。在本次實驗中，對梯度洗脫的方法進行了不斷的完善。使用三根不同品牌的色譜柱對雜質峰進行確定，利用科學的實驗方式對產品的質量提供依據。

一、儀器和試劑

使用的是島津的高效液相色譜儀，具體包括Lc-solution工作站、SPD-M20ADAD檢測器和SPD-M20A工作泵,乙腈使用的是色譜純，氨芐西林的對照品在含量是86.5%和注射用氨芐西林鈉，在實驗的過程中，按照規格進行具體的確定。

二、方法和結果

（一）色譜條件

從色譜條件上來看，使用的填充劑是十八烷基硅烷鍵合硅膠，檢測的波長是254nm，溶液的流速是1.0ml/min，使用的是進樣量是20μ，流動相A是為12%醋酸溶液-0.2mol／L磷酸二氫鉀溶液．乙腈．水，比例是0.5：50：50：900；流動相B是12 %醋酸溶液-0.2mol／L磷酸二氫鉀溶液一乙腈．水，比例是0.5：50：400：550，在整個過程中使用的是梯度洗脫法，具體的情況如表1所示，tR指的是氨芐西林的出峰時間。

表1 梯度洗脫表

（二）溶液的配制

從溶液的配制上來看，相關的物質的供試品溶液在配制的過程中如下：要取本品，使用的是流動相A進行溶解，還要將流動相A進行稀釋，這樣能夠制成3mg/ml的氨芐西林溶液。有關物質的對照品溶液配制的要求如下：要精密的量取相應的供試品溶液大約1ml,將這些溶液放置在量瓶中，量瓶的容積是100ml，需要使用流動相A對有關物質對照品溶液稀釋到相應的刻度?？瞻纵o料溶液在配制的過程中，必須要按照處方比例使用流動相A進行配制，主要是用來配制主藥的空白輔料溶液，在配制的過程中，一定要注意配制比例，否則就不會起到相應的效果。在二聚物樣品溶液配制的過程中，一定要取本品大約 0.2g，之后向里加水1.0ml，這樣就可以使樣品快速的溶解，在溶解之后，還要放入水浴中進行加熱處理，水溫必須要保持在60攝氏度左右，加熱的時間是1h，量取0.5ml的溶液，將這些溶液放置在50ml的量瓶中，最后加流動相A稀釋，稀釋到相應的刻度。在進行含量測定溶液配制的過程中，需要使用流動相A進行供試品溶液的配制，對含氨芐西林為1mg/ml的溶液進行配制，對照品溶液在配置的過程中也是如此。

（三）專屬性的實驗

在進行專屬性實驗的過程中，必須要分別量取溶液配置中的空白輔料溶液、含量測定溶液、有關物質供試品溶液，之后按照色譜條件充分的進行實驗，對色譜圖全面的記錄，結果表明，空白輔料對主藥與有關物質檢測沒有任何干擾。具體的情況如圖1所示：

圖1：空白輔料（A）、對照品（B）和有關物質供試品（C）的色譜圖

（四）雜質峰的定位

分別取有關物質供試品溶液、二聚物樣品溶液在2.1色譜條件下進樣，采用三根不同品牌色譜柱進行試驗，測定結果見表2。

表2：各雜質與主成分相對保留時間比值

（五）進樣精密度

取氨芐西林對照品溶液(約1mSm1)，／連續進樣6次，峰面積的RSD為0．92%。

（六）穩定性考察取氨芐西林對照品溶液(約1mg／m1)，分別在配制后0、2、4、6、8h進樣測定，5次測定峰面積的RSD為1．02%，表明氨芐西林溶液在8h內穩定。

（七）含量及有關物質測定

取有關物質供試品溶液、有關物質對照品溶液及含量測定溶液分別進樣，在色譜條件測定并計算含量及有關物質，測定結果見表3。

表3：樣品含量及有關物質測定結果表

三、討論

（一）雜質峰定位

對氨芐西林中可能存在的22種雜質分別定位，本實驗與文獻在相同色譜條件下操作，測定不同廠家多批樣品，采用與文獻比較相對保留時間的方法，確定三種雜質峰位：L．氨芐西林、氨芐西林開環二聚物、氨芐西林閉環二聚物分別在相對主峰保留時間0.7、2.8、3.5倍處出峰。

（二）聚合物結構分析氨芐西林鈉聚合物(二聚物及多聚物)有兩種結構，見圖2。一種為開環二聚物，另一種為閉環二聚物。中國藥典規定2．8倍氨芐西林保留時間處為二聚物峰]，而未注明是開環還是閉環二聚物。本實驗測定6批樣品加熱后均在3.5倍處峰面積明顯增加，而在2.8倍處二聚物峰不明顯，表明加熱后主要形成閉環二聚物。

（三）實驗方法

參考中國藥典及其他文獻基礎上，改進實驗方法，洗脫結束后設置在初始比例平衡20min，基線更平穩，主峰保留時間漂移少。本實驗方法能洗脫并良好分離生產及貯存所產生的有關物質，但測定費時較長。

（四）注射用氨芐西林鈉雜質比例分析

對本實驗6批樣品中各單個雜質占總雜質比例進行分析其中聚合物占總雜質約75%，L-氨芐西林占總雜質8%左右。生產中可針對性減少聚合物及 L-氨芐西林雜質產生，能較好提高產品質量。

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R927.2

A

1672-5018（2016）10-024-02