培土生金法對肺脾兩虛型慢阻肺大鼠肺功能的影響

[摘要] 目的 探討培土生金法對肺脾兩虛型COPD大鼠肺功能影響。方法 于2016年6—7月，在甘肅中醫學院動物實驗中心開展研究。采用每日被動煙熏、氣管內兩次注射脂多糖及灌服番瀉葉的方法，復制大鼠肺脾兩虛型COPD模型；實驗隨機分為正常組、模型組及治療組，在第28天做大鼠肺功能測定，光鏡觀察大鼠肺組織病理變化。結果 與正常組比較，模型組MV（98.99±0.74）mL、PIF（8.11±0.21）mL/s、PEF（8.55±0.32）mL/s均明顯降低；MV、PEF（P<0.05），PIF（P<0.01），差異有統計學意義。與模型組比，治療組MV（118.17±6.64）mL、PIF（9.05±0.56）mL/s、PEF（9.88±0.82）mL/s均升高；PIF、PEF（P<0.05），MV（P<0.01），差異有統計學意義。模型組大鼠支氣管壁及周圍組織大量炎性細胞浸潤，肺泡壁變薄或斷裂，部分肺泡融合形成肺大皰；治療組大鼠肺組織損傷明顯減輕。結論 培土生金法可以緩解肺脾兩虛型COPD大鼠呼吸系統及全身癥狀，改善肺功能。

[關鍵詞] 培土生金；慢性阻塞性肺疾??；肺脾兩虛型；肺功能

[中圖分類號] R332 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2016）11（a）-0040-03

[Abstract] Objective To investigate effect of the Method of reinforcing earth to strengthen metal on lung function in pulmonosplenic asthenia rats with COPD.Methods From June to July 2016， the research had been developed in Animal Experimental center. Pulmonosplenic asthenia rats models with COPD were established by forcing rats to smoke every day ，injecting LPS in the airway two times and feeding with decoction of Folium Sennae.Rats were randomized into the normal group， model group and treatment group. In the 28th day，the lung function was measured and the pathologic changes of lung tissue was examined by microscope.Results Compared with the normal group，MV（98.99±0.74）mL、PIF（8.11±0.21）mL/s、PEF（8.55±0.32）mL/s were significantly decreased in the model group，MV、PEF（P<0.05），PIF（P<0.01），the difference had significance of statistics.Compared with the model group，MV（118.17±6.64）mL、PIF（9.05±0.56）mL/s、PEF（9.88±0.82）mL/s were all increased in the treatment group，PIF、PEF（P<0.05），MV（P<0.01），the difference had significance of statistics.In the model group，plentiful inflammatory cells infiltration in the bronchial wall and surrounding tissue，alveolar walls became thin or rupture，some alveolar formed pulmonary bulla.The lung tissue damage In the treatment group decreased obviously.Conclusion The method of reinforcing earth to generate metal could relieve the respiratory system disease and general symptoms， improve lung function in pulmonosplenic asthenia rats with COPD.

[Key words] Reinforcing earth to generate metal；COPD；The Lung and Spleen Deficiency Syndrome；Lung function

慢性阻塞性肺疾?。–OPD）以不完全可逆的氣流受限為特征。氣流受限呈進行性發展，伴有氣道和肺對有害顆?；驓怏w所致慢性炎癥反應的增加[1]。中醫將其歸于“肺脹”范疇，認為病變首先在肺，繼而影響到脾，中焦脾土的病變是COPD傳變或惡化的關鍵。脾虛則邪易侵，易生痰，肌肉削，進而致疾病纏綿。實驗于2016年6—7月，選取甘肅中醫學院動物實驗中心清潔級Wistar大鼠30只作為研究對象。采用氣管內滴注LPS，被動吸煙及灌服番瀉葉法建立肺脾兩虛型COPD大鼠模型。選取參苓白術散干預治療，觀察其對模型大鼠肺功能和肺組織病理的影響，探討其可能的作用機制，以期為臨床培土生金法治療肺脾兩虛型COPD提供實驗依據。

1 臨床資料

1.1 動物

3月齡清潔級Wistar大鼠共30只，雌雄各半，體質量（200±20）g，由甘肅中醫學院動物實驗中心提供，隨機分為3組：即正常組，模型組，治療組，每組各10只。

1.2 受試藥物

番瀉葉浸液：番瀉葉浸泡12 h，絞汁過濾，裝入燒杯，濃縮至含生藥1 g/mL，4 ℃冰箱保存；參苓白術散：由人參、白術、茯苓、甘草、山藥、蓮子、白扁豆、薏苡仁、砂仁、桔梗等藥物組成，實驗選用免煎劑。均購于甘肅中醫藥大學附屬醫院門診中藥房。

1.3 主要試劑及儀器

脂多糖（批號 L-2880）；蘭州牌香煙（焦油量14 mg 煙氣煙堿量1.1 mg，煙氣一氧化碳量 14 mg）；生物信號采集系統。

2 方法

2.1 造模方法

采用宋一平等[2]研究方法加以改良建立大鼠COPD模型。第1、14天，經口氣管滴注LPS：大鼠麻醉后，頭部自由垂落于鼠板邊緣，四肢寬松固定于鼠板。暴露口腔，以卵圓鉗向前外側牽拉舌頭。將喉鏡插入大鼠口中壓緊舌根防止后墜，同時向上提拉下頜，燈光下可見大鼠喉部有一透亮區，于吸氣相將氣管插管插入氣道。同時將氣管套管拔出，將1 mL針管內先抽入相應量溶于生理鹽水的LPS（1 mg/mL），于大鼠吸氣瞬間迅速推注LPS（大鼠用量0.1 mg）。再向氣管內迅速推注0.5～1 mL氣體1～2次以使LPS充分分布于肺組織內。拔出針管，輕拍大鼠胸背部，并輕抖動，使藥物均勻分布于肺內。 第 2～28天（滴注LPS當天不煙熏，正常組呼吸空氣），每日上午將大鼠放于染毒箱內，持續煙熏30 min后，置于鼠籠常規飼養。自造模第7天起在熏煙前30 min給予濃度1 g/mL冰冷番瀉葉浸液，按1 mL/100 g體重的劑量，連續灌胃至28 d造模結束。

2.2 給藥方法

實驗藥物用量均按體表面積比率（D2=D1×0.018×5）配制藥液，臨床等效劑量為實驗中劑量。注 D2：大鼠（200 g）的臨床等效劑量，D1：成人（70 kg）日用量。模型復制成功后進行藥物干預，按1 mL/100 g體重的劑量灌胃：治療組給予參苓白術散灌胃治療，正常組給予等容量生理鹽水灌胃。每日下午 1 次 ，連續灌胃干預至28 d。

2.3 實驗觀察與指標檢查

2.3.1 肺功能測定 用10%水合氯醛（國藥準字H37022673）（3 mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠，待其完全麻醉，將大鼠固定于手術臺上，大鼠喉鏡經口氣管插管方法，插入Y型氣管插管并固定，將插管一端連接生物信號采集系統傳感器，自動描記呼吸曲線，測定大鼠每分鐘通氣量（MV）、呼氣峰流量（PEF）及吸氣峰流量（PIF）等指標。

2.3.2 標本采集與處理 肺功能測定完畢，取血后處死大鼠，開胸分離肺臟，取左肺上葉，肉眼觀察后，用生理鹽水拭去肺表面血漬置于4%多聚甲醛溶液中外固定。酒精梯度脫水，浸蠟，包埋，切片，HE染色，于光鏡下觀察肺組織形態學改變。

2.4 統計方法

實驗數據采用SPSS 20.0統計學軟件進行處理，計量資料符合正態性分布，采用（x±s）表示，行獨立樣本t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 肺功能檢測結果

與正常對照組比較，模型組MV、PEF、PIF均降低（P<0.05），差異均有統計學意義。與模型組比較，治療組流量指標PIF、PEF、MV均升高（P<0.05），差異均具有統計學意義。見表1。

3.2 大鼠肺組織形態學改變

正常組呼吸道及肺泡結構正常，支氣管纖毛排列整齊，支氣管腔及肺泡腔未見炎癥。模型組大鼠肺組織支氣管壁及周圍組織有大量炎性細胞浸潤，血管擴張充血，氣管粘膜上皮部分脫落，管壁增生，肺泡壁變薄或斷裂，部分融合成肺大皰，符合COPD的病理改變[3]，提示造模成功。治療組大鼠肺組織損傷明顯減輕。

4 討論

實驗采用持續熏煙，兩次氣管滴注LPS配合灌服番瀉葉的方法制作大鼠肺脾兩虛COPD模型。肺功能可動態反映COPD通氣功能，較好地評價氣流受限的程度。有研究顯示，培哚普利通過下調C0PD大鼠血清和肺組織勻漿中IL-8、TNF-a含量，改善肺功能。與模型組比，PEF（25.77±3.45）mL/s升高，（P<0.05），差異有統計學意義[4]。氨茶堿和辛伐他汀通過減輕氣道炎癥和氣道黏液高分泌作用來達到防治慢阻肺的目的[5]。與模型組比，氨茶堿組PEF（21.66±1.86）L/min，辛伐他汀組PEF（24.85±0.90）L/min均升高；（P<0.01），差異有統計學意義。

該實驗，與正常組比，模型組MV（98.99±0.74）mL、PIF（8.11±0.21）mL/s、PEF（8.55±0.32）mL/s均明顯降低；MV、PEF（P<0.05），PIF（P<0.01），差異均有統計學意義，反映呼吸能力下降，氣道通暢性欠佳，提示大鼠模型成功。與模型組比，治療組MV（118.17±6.64）mL/s、PIF（9.05±0.56）mL/s、PEF（9.88±0.82）mL/s均升高；PIF、PEF（P<0.05），MV（P<0.01），差異均有統計學意義，說明參苓白術散能改善模型組大鼠氣流受限狀態。病理顯示，治療組大鼠肺組織損傷明顯減輕。培土生金法改善營養狀態和免疫功能，緩解呼吸肌疲勞，有效阻止慢阻其病理改變的發展，延緩肺功能的進行性下降；相比于現代醫學研究多通過減輕局部肺組織炎癥，改善肺功能，有其獨特優勢。

COPD穩定期營養不良表現為胸悶、消瘦、腹瀉、動則氣短加重等癥狀，中醫辨證屬肺脾兩虛證，選用參苓白術散治療COPD，契合病機。參苓白術散出自宋代官方頒布的《太平惠民和劑局方》，全方有補肺氣，健脾氣，培土生金，兼以滲濕濁，行氣滯之功，被后世奉為“培土生金”法（即補脾益肺法）代表方。徐升等[6]研究表明黃芪建中湯組 FEV0.3/FVC、PEF、FEV0.3明顯升高（P<0.05），提出了培土生金法明顯改善COPD大鼠肺功能、延緩COPD的進程。許堅等[7]通過前期臨床研究初步證實，培土生金法能提高慢阻肺患者免疫功能，減少急性發作次數，延緩疾病進展，降低病情程度，提高生存質量。王小祥等[8]研究表明參苓白術散加減很好改善慢阻肺穩定期肺脾兩虛型中醫證候。該研究采用培土生金法治療肺脾兩虛型COPD，有其臨床及實驗基礎，療效確切。

綜上所述，參苓白術散雖不能防止大鼠COPD的形成，但通過健脾益肺，提高機體抵免疫力，減少感染機會；減少痰液分泌，通暢氣道；增進食欲，改善營養狀態；緩解呼吸肌疲勞，延緩肺功能下降。將培土生金法貫穿臨床診治全程，發揮中醫辨證論治特色，將為研發治療肺脾兩虛型COPD的有效中醫復方提供理論依據。

[參考文獻]

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[4] 孟麗霞，王均鵬，曾凡軍，等.培哚普利對COPD大鼠肺功能及IL-8、TNF-a含量的影響[J].疑難病雜志，2015，14（2）：168-170.

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[7] 許堅，林琳.培土生金對慢性阻塞性肺病大鼠免疫調節的研究思路[J].中國醫藥指南，2013，11（31）：354.

[8] 王小祥，林俊.參苓白術散加減對慢性阻塞性肺疾病穩定期肺脾氣虛型的影響[J].云南中醫中藥雜志，2013，34（5）：21-24.

（收稿日期：2016-08-05）