69例慢性淋巴細胞白血病的免疫表型及骨髓象分析

曲 偉

(濱州醫學院煙臺附屬醫院輸血科，山東煙臺 264100)

·論 著·

69例慢性淋巴細胞白血病的免疫表型及骨髓象分析

曲 偉

(濱州醫學院煙臺附屬醫院輸血科，山東煙臺 264100)

目的 研究慢性淋巴白血病的免疫表型與骨髓象的特點，以期為臨床診治提供一定的參考。方法 選取2013年1月至2015年1月間入院診治的慢性淋巴細胞白血病患者69例，應用單參數和多參數流式細胞術分析患者的免疫表型，對患者進行骨髓象及血象檢查，對患者的骨髓增生度進行分析。結果 69例CLL患者中，LL/SL-MC 33例(47.83%)、CLL/PLL-MC 16例(23.19%)、TSL 9例(13.04%)、ATLL 4例(5.80%)、PLL 4例(5.80%)、HCL 3例(4.34%)。CLL患者以年齡50歲以上者居多。骨髓增生度極度活躍12例(17.39%)、明顯活躍10例(14.49%)、活躍47例(68.12%)，粒紅比增高17例(24.64%)、正常29例(42.03%)、降低23例(33.33%)，巨核細胞計數增高3例(4.35%)、正常30例(43.48%)、降低36例(52.17%)。69例患者全部表達CD19、CD20，陽性率為100%；其次表達CD22，陽性率為98.55%；CD23陽性率為97.10%，CD5陽性率為86.96%；所有患者均不表達CD10。結論 69例CLL患者免疫分型以混合型為多，骨髓增生度較高；免疫表型則以CD19、CD20全部表達，其次分別表達為CD22、CD23與CD5，不表達CD10。

慢性淋巴細胞白血病； 免疫表型； 骨髓象

慢性淋巴細胞白血病(chronic lymphocytic leukemia，CLL)是一種原發于造血組織的低度惡性造血系統疾病，腫瘤細胞為單克隆的B淋巴細胞[1]。主要特點在于大量形態上成熟的小淋巴細胞聚集在外周血、骨髓、淋巴結和脾臟等淋巴組織中。該病早期并無特異性癥狀，患者多因無痛性淋巴結腫大或不明原因的淋巴細胞絕對值升高而就診。進展期患者除脾臟及全身淋巴結腫大外，還會出現反復感染、貧血、出血、體重減輕等癥狀，高齡患者因合并基礎病的影響，會進一步惡化病情。CLL患者預后差別較大，部分患者病情進展緩慢甚至無需治療，部分患者在發病初期即需積極治療[2]。早期診斷對CLL治療方案的選擇及預后的評估至關重要。現本文通過分析慢性淋巴細胞白血病的免疫表型及骨髓象，以便進一步高CLL的診斷率，指導臨床用藥及療效、預后的觀察。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月至2015年1月間入院初診為慢性淋巴細胞白血病患者69例，均行血常規、外周血涂片、骨髓細胞形態學檢查等。所有患者均知情同意。69例患者中男53例，女16例，年齡44～82歲，平均年齡65.7±6.8歲。69例患者中2例貧血，胸骨壓痛47例，肝腫大26例，脾腫大51例，淺表淋巴結腫大24例。CLL的診斷與分型參照《血液病診斷及療效標準》(第2版)。

1.2 檢測試劑與儀器 流式細胞儀(FACSCalibur，美國BD公司)。單克隆抗體包括CD5、CD10、CD23、CD22、CD20、FMC7、CD19、CD38、CD11C、λ輕鏈、κ輕鏈，均購自美國BD公司。應用BD FACSDiva軟件分析。

1.3 檢測方法 應用單參數和多參數流式細胞術分析患者的免疫表型，對患者進行骨髓象及血象檢查，對患者的骨髓增生度進行分析。

1.3.1 骨髓象及血象檢測 由專業的血液科醫生抽取骨髓樣本，骨髓細胞學檢查均由細胞學專業檢驗人員檢驗并記錄骨髓象。每份標本分類200個有核細胞進行常規檢查，對數據進行分析。常規作糖原染色、過氧化物酶染色、中性粒細胞堿性磷酸酶染色。根據《臨床血液學和血液檢驗》(第4版)標準對骨髓細胞進行分類分析。

1.3.2 免疫表型檢測 取肝素抗凝的新鮮骨髓(6 h內)，1 500 r/min離心5 min，棄去上清液，加入紅細胞裂解液，混勻，裂解5 min，加入1%牛血清清蛋白磷酸鹽緩沖液終止裂解。1 500 r/min離心5 min，棄去上清液，加入磷酸鹽緩沖液重懸細胞[3]。顯微鏡下計數，調整細胞數為(0.5～1)×106/mL。應用三色流式分析方案檢測細胞膜抗原。每管加入FC受體阻斷劑，并取100 μL樣本加不同組合抗體，同時做同型對照管，混勻，孵育20 min，溶血后上機檢測分析，每管取20 000個細胞，抗原表達在淋巴細胞中≥20%為陽性。

2 結 果

2.1 檢出結果 69例CLL患者中，LL/SL-MC 33例(47.83%)、CLL/PLL-MC 16例(23.19%)、TSL 9例(13.04%)、ATLL 4例(5.80%)、PLL 4例(5.80%)、HCL 3例(4.34%)。CLL的發病率隨著年齡增加呈升高趨勢，見表1。

表1 69例CLL患者各年齡段疾病分類構成比[n(%)]

LL/SL-MC：大小淋巴細胞混合型；CLL/PLL-MC：幼淋巴細胞混合型；TSL：典型小淋巴細胞混合型；ATLL：不典型大淋巴細胞型；PLL：幼淋巴細胞性白血病；HCL：毛細胞型白血病。

2.2 骨髓象 骨髓增生度極度活躍12例(17.39%)、明顯活躍10例(14.49%)、活躍47例(68.12%)，粒紅比增高17例(24.64%)、正常29例(42.03%)、降低23例(33.33%)，巨核細胞計數增高3例(4.35%)、正常30例(43.48%)、降低36例(52.17%)，詳見表2。

表2 69例各型CLL患者骨髓增生度、粒紅比和各系細胞比情況

2.3 免疫表型 69例患者全部表達CD19、CD20，陽性率為100%；其次表達CD22，陽性率為98.55%；CD23陽性率為97.10%，CD5陽性率為86.96%；所有患者均不表達CD10。詳見表3。

表3 69例CLL患者免疫表型特點

3 討 論

CLL是歐美發病率最高的白血病，而在亞洲國家相對少見。20世紀80年代的調查中，我國CLL僅占慢性白血病的6%[4]，但近年來該病的發病率呈上升趨勢。

據統計，95%以上CLL病例起源于B淋巴細胞惡性轉化和克隆增殖。并且2001年開始，世界衛生組織將CLL定義均為B細胞型，取消T細胞-CLL。CLL又細化為LL/SL-MC、CLL/PLL-MC、TSL、ATLL、PLL、HCL、混合型、毛細胞白血病變異型、漿細胞白血病等12型[5]。本次研究中以LL/SL-MC(47.83%)、CLL/PLL-MC(23.19%)居多。

3.1 骨髓象分析 細胞形態學和骨髓組織學已經成為CLL的預后標記，不典型的細胞學形態、存在核裂或幼稚的淋巴細胞與預后不良密切相關。研究發現，彌漫性骨髓浸潤患者的生存期顯著短于非彌漫性骨髓浸潤的患者[6]。白血病淋巴細胞與正常細胞差別較大，其胞體略大、血片上易見破碎細胞、易見肌上皮細胞，核有裂隙或切跡，無核仁或不明顯，核染色質不規則聚集，部分胞質豐富、無顆粒、嗜堿性，部分胞質少，可見空泡，此類淋巴細胞顯著增多，約占40%。在本次研究中，骨髓增生度極度活躍17.39%、明顯活躍14.49%；粒紅比為(0.62～10.4)∶1，平均2.81∶1；巨核細胞計數4.35%、降低52.17%。通過骨髓象分析了解造血組織的增生情況、骨髓細胞構成比例的改變及異常細胞的有無，對提高CLL相關疾病的診斷率有重要的積極作用。

3.2 免疫分型分析 細胞表面抗原是細胞分化過程中基因的表達產物，隨著細胞分化的不同階段有序的獲得或消失[7]。流式細胞術可多參數、快速客觀的分析細胞表面

抗原的表達，進而判斷白血病的分型，其已成為診斷血液病的重要檢測手段。有學者認為CD5、CD19、CD20是CLL的診斷依據。本次研究中，CD5陽性率為86.96%，CD19、CD20陽性率為100%，CD23陽性率為97.10%，不表達CD10，CD38弱表達。這與既往研究結果一致[8]。本次研究中9例CD5陰性的患者，結合骨髓細胞形態、臨床表現、遺傳學，診斷為不典型CLL。因此，對于CD5陰性但CD19、CD20陽性的患者，應謹慎診斷。CD5陽性表達與B細胞的激活狀態有關。CD19分布于除效應B細胞外的B細胞發育的各個階段，具促進B細胞激活的作用[9]；CD20表達于全體B細胞表面，是B細胞的鑒定標記，參與B細胞的活化與增殖分化[10]。此二者診斷CLL的靈敏度較高，但特異度差。因此，結合CD5、CD19、CD20的表達情況，綜合判斷。

綜上所述，69例CLL患者以50歲以上為多，且以免疫分型以混合型為主；骨髓增生度較高；免疫表型則以CD19、CD20全部表達，其次分別表達為CD22、CD23與CD5，不表達CD10。

[1]易莎,張小斌,陳燕，等.103例慢性淋巴細胞白血病患者免疫表型的研究[J].臨床血液學雜志,2010,23(2):86-88.

[2]張青艷,陳智超,趙阿蘭，等.慢性淋巴細胞白血病的臨床免疫表型分析[J].山東醫藥,2013,53(1):1-3.

[3]王愛清,耿美菊,朱明清，等.109例慢性B淋巴系白血病免疫表型特征分析[J].中國實驗血液學雜志,2011,19(6):1374-1377.

[4]劉越堅,郭莉,邱陽，等.慢性淋巴細胞白血病免疫表型及凋亡相關蛋白分析[J].國際檢驗醫學雜志,2013,34(1):25-26.

[5]胡旸,陳艷,王麗華，等.用流式細胞術從B淋巴增殖性疾病中鑒別脾邊緣帶淋巴瘤[J].中國實驗血液學雜志,2014,22(2):349-356.

[6]古麗娜·阿里甫,秦江萍,楊潔，等.慢性淋巴細胞白血病患者免疫表型特點及其與臨床分期的關系[J].新疆醫學,2014,44(1):23-26.

[7]趙成艷,何曉琳,王敏，等.慢性淋巴細胞白血病骨髓象及免疫表型的分析研究[C].中華醫學會第十二次全國血液學學術會議論文集，2012:6-8.

[8]呂小林,萬臘根,紀德香，等.慢性淋巴細胞白血病繼發自身免疫性貧血骨髓象1例報道[J].實驗與檢驗醫學,2011,29(5):580-581.

[9]馬曉露.全血細胞減少癥156例骨髓象及病因分析[J].國際檢驗醫學雜志,2011,32(4):519-520.

[10]陸倩,李慶山,潘婷，等.初治急性白血病患者CD133的表達與臨床特征關系的探討[J].中國熱帶醫學,2015,15(3):288-292.

Immunophenotype and bone marrow of chronic lymphocytic leukemia

QuWei

(DepartmentofBloodTransfusion,AffiliatedHospitalBinzhouMedicalCollege,Yantai,Shandong264100,China)

Objective To study the characteristics of immunophenotype and bone marrow in chronic lymphocytic leukemia (CLL) in order to provide certain reference for its clinical diagnosis and treatment.Methods A total of 69 cases of CLL in our hospital from January 2013 to January 2015 were selected.The immune 69 cases was analyzed by using the single parameter and multi-parameter flow cytometry.The bone marrow and blood examinations were performed and the myeloproliferative degree was analyzed.Results Among 69 cases of CLL,33 cases (47.83%) were LL/SL-MC,16 cases (23.19%) were CLL/PLL-MC,9 cases(13.04%) were TSL,4 cases (5.80%) were ATLL,4 cases (5.80%) were PLL and 3 cases (4.34%) were HCL.The majority of CLL cases were more than 50 years old.The myeloproliferative degree was hyperactive in 12 cases (17.39%),significantly active in 10 cases (14.49%) and active in 47 cases (68.12%); the myeloid-erythroid ratio was increased in 17 cases (24.64%),normal in 29 cases (42.03%) and reduced in 23 cases (33.33%); the megakaryocyte count was increased in 3 cases (4.35%),normal in 30 cases (43.48%) and reduced in 36 cases (52.17%).All 69 cases expressed CD19 and CD20 with the positive rate of 100%; secondly expressed CD22 with the positive rate of 98.55%; the CD23 positive rate was 97.10%,the CD5 positive rate was 86.96%; all cases did not express CD10.Conclusion The immunophenotype in 69 cases of CLL was mainly the mixed type with higher myeloproliferative degree; the immunophenotype expressed CD19 and CD20 in all cases,secondly expressed CD22 and CD23,and did not express CD10.

chronic lymphocytic leukemia; phenotype; bone marrow

曲偉，男，主管技師，主要從事醫學檢驗、輸血工作。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.07.012

A 文章編號：1673-4130(2016)07-0898-03

2015-11-15)