寨卡病毒感染及其實驗室檢查

林迪，孫長貴

(解放軍第117醫院檢驗科南京軍區醫學檢驗質量控制中心，浙江杭州310013)

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寨卡病毒感染及其實驗室檢查

林迪，孫長貴

(解放軍第117醫院檢驗科南京軍區醫學檢驗質量控制中心，浙江杭州310013)

摘要:非洲埃博拉疫情還沒完全結束，又一種蚊媒病毒－寨卡病毒在美洲出現暴發流行。2007年以前，寨卡病毒病在全球僅有14例散發病例。2015年5月以來，巴西發生大規模寨卡病毒感染疫情，美洲、非洲等其他30多個國家和地區也相繼報告出現寨卡病毒傳播；新年伊始，寨卡病毒陸續進入中國境內，截止2016年2月26日，我國已發生6例輸入性寨卡病毒感染病例。由于寨卡病毒疫情爆發式蔓延，2016年2月1日，世界衛生組織（WHO）把寨卡病毒感染列為國際緊急衛生事故，引起了國際社會的廣泛關注。本文就該病毒的結構、生物學特性、流行病學、臨床表現、診斷與鑒別診斷和實驗室檢查等作簡要綜述。

關鍵詞：寨卡病毒；蚊媒病毒；小頭畸形；感染

寨卡病毒病是由寨卡病毒（Zika virus，ZIKV）感染引起的，以發熱、皮疹、關節痛或結膜炎為主要臨床表現的自限性急性傳染病，主要通過埃及伊蚊叮咬傳播，極少引起死亡，但孕婦感染后可能會導致胎兒小頭畸形甚至死亡[1]。1947年，科學家首次在烏干達抓獲的用于黃熱病研究的獼猴中分離到ZIKV，而這些猴子聚居的雜草叢就被用來命名這種病毒；1952年，在烏干達和坦桑尼亞的人體中分離到ZIKV[2]。此后，多個國家有散發病例報道，但主要在全球熱帶及亞熱帶地區流行；2007年，首次在密克羅尼西亞的雅普島發生ZIKV疫情的暴發流行[3，4]，2013年10月，法屬波利尼西亞也發生大規模ZIKV暴發，約有29000人為疑似病例（約占總人口10%）[5]；2015年5月，巴西發現首例本地感染病例，其后疫情持續發酵，直到發生了大規模疫情，至今已有150萬人感染ZIKV，另外，巴西衛生部于2016年1月12日還通報了356例可能與ZIKV感染相關的小頭畸形病例；目前，非洲、美洲、亞洲和太平洋地區均有寨卡病毒病疫情暴發，ZIKV進一步呈現蔓延擴大和跨境傳播趨勢，因此引起了全球的廣泛關注。本文就ZIKV相關的結構和生物學特性、發病機制、流行病學、臨床表現、診斷與鑒別診斷和實驗室檢查等作簡要綜述。

1　寨卡病毒的結構和生物學特性

ZIKV是一種蚊媒病毒，屬黃病毒科黃病毒屬，為單股正鏈RNA病毒，全基因長度約為11Kb，直徑40～70nm，有包膜，包含10794個核苷酸，編碼3419個氨基酸，ZIKV基因編碼3個結構蛋白[衣殼蛋白(C)、膜前體蛋白(prM)和包膜蛋白(M)]和7個非結構蛋白（NS1，NS2a，NS2b，NS3，NS4a，NS4b和NS5）。根據基因型分為非洲型和亞洲型，本次美洲流行的為亞洲型[3，6－8]。與ZIKV最密切相關的病毒是Spondweni病毒[9]。ZIKV的抵抗力不詳，但黃病毒屬的病毒一般不耐酸、不耐熱。60℃30min可滅活，70%乙醇、1%次氯酸鈉、脂溶劑、過氧乙酸等消毒劑及紫外線照射均可滅活[10]。

2　發病機制

目前ZIKV的發病機制還尚不明確。由于樹突狀細胞（DCs）是大多數蚊媒黃病毒感染的主要目標，部分科學家認為ZIKV最初是在DCs內開始復制，隨后擴散到淋巴結和血液中[11]；還有一項研究在被ZIKV感染的細胞核中發現相應抗原，故ZIKV被認為是在細胞核中進行復制，這與其他黃病毒科病毒通常在細胞質中復制的特點不同[12]；另外Rodolphe Hamel等人通過中和抗體和RNA沉默實驗證明人皮膚成纖維細胞容許ZIKV的復制，隨后誘導Toll樣受體3(TLR3)、RIG－I、MDA5以及一些干擾素刺激基因（包括OAS2、ISG15以及MX1）的轉錄，最后經感染的皮膚成纖維細胞導致自噬小體的形成，自噬小體的存在與病毒復制作用的增強有很大關系[13]。

3　流行病學

ZIKV廣泛分布于非洲大陸北部以及許多東南亞國家，包括馬來西亞、印度、菲律賓、泰國、越南、印度尼西亞以及巴基斯坦[14－21]。ZIKV活動一直比較隱匿，僅在赤道周圍的非洲、美洲、亞洲和太平洋地區有寨卡病毒感染散發病例。近兩年，ZIKV先是在巴西興風作浪，而后又侵入南美洲，近期，它又沖出拉丁美洲。截至2016年1月，在非洲、亞洲、美洲以及太平洋島嶼上至少45個國家發現寨卡病毒傳播的證據，其中在南美洲有23個國家和地區正在流行。因為越來越多的證據表明ZIKV與小頭畸形之間的聯系，2016年1月15日，CDC發布旅行警告，建議孕婦考慮推遲前往以下國家和地區：巴西、哥倫比亞、薩爾瓦多、法屬圭亞那、危地馬拉、海地、洪都拉斯、馬提尼克島、墨西哥、巴拿馬、巴拉圭、蘇里南、委內瑞拉和波多黎各自由邦。新年伊始，寨卡病毒陸續進入中國境內，截止2016年2月26日，我國已發生6例輸入性寨卡病毒感染病例。根據監測，我國與傳播ZIKV有關的伊蚊種類主要為埃及伊蚊和白紋伊蚊，其中埃及伊蚊主要分布于海南省、廣東省雷州半島以及云南省的西雙版納州、德宏州、臨滄市等地區；白紋伊蚊則廣泛分布于我國河北、山西、陜西以南廣大區；我國南方部分地區存在可傳播寨卡病毒的媒介伊蚊。隨著寨卡病毒的輸入，特別是在我國夏秋季節伊蚊密度較高的南方地區，不排除在局部地區發生本地傳播擴散的可能。

3.1傳染源和宿主范圍患者、隱性感染者和感染ZIKV的非人靈長類動物是該病的可能傳染源。

3.2傳播途徑[22－24]⑴各種伊蚊被認為是ZIKV的傳播媒介，主要為埃及伊蚊。通過伊蚊叮咬進行傳播，這是最主要的途徑。⑵母嬰傳播，包括宮內感染和分娩時感染；乳汁中可檢測到寨卡病毒核酸，但尚無通過哺乳感染新生兒的報道。⑶血源傳播和性傳播罕見。

3.3易感人群人群普遍易感。曾感染過寨卡病毒

的人可能對再次感染具有免疫力。

4　臨床表現和病理特點[10]

寨卡病毒病臨床癥狀不明顯，但患者可能會出現類似于其他蟲媒病毒?。ǖ歉餆岷突卓涎艧幔┑呐R床癥狀，其潛伏期目前尚不清楚，現有資料顯示為3～12d，常見報道的癥狀包括皮疹（90%～95%）、發熱（65%～73%）、關節痛（65%～70%）以及非化膿性結膜炎（55%～63%）[4，7]。其他癥狀還包括肌肉痛、全身乏力以及頭痛，少數患者可出現腹痛、惡心、腹瀉、粘膜潰瘍、皮膚瘙癢等，癥狀持續2～7天緩解，預后良好，重癥與死亡病例罕見。小兒感染病例還可出現神經系統、眼部和聽力等改變。孕婦感染ZIKV可能導致新生兒小頭畸形甚至胎兒死亡。ZIKV感染可能還會增加格林－巴利綜合征（GBS）和新生兒小頭畸形的病例，但二者之間的因果關系尚未明確[25]。

5　診斷[10]

5.1診斷主要依據流行季節、地區、發病年齡等流行病學資料、臨床表現以及實驗室常規檢測結果進行診斷。

5.1.1診斷依據根據流行病學史、臨床表現和相關實驗室檢查綜合判斷。

5.1.1.1疑似病例⑴流行病學史：發病前14天內在ZIKV感染病例報告或流行地區旅行或居住。⑵臨床表現：難以用其他原因解釋的發熱、皮疹、關節痛或結膜炎等。

5.1.1.2臨床診斷病例疑似病例且ZIKV IgM抗體檢測陽性。

5.1.1.3確診病例疑似病例或臨床診斷病例經實驗室檢測符合下列情形之一者：⑴ZIKV核酸檢測陽性。⑵分離出ZIKV。⑶恢復期血清ZIKV中和抗體陽轉或者滴度較急性期呈4倍以上升高，同時排除登革、乙腦等其他常見黃病毒感染。

5.2鑒別診斷需要和以下疾病進行鑒別診斷：⑴主要與登革熱和基孔肯雅熱進行鑒別診斷。⑵其他：與微小病毒、風疹、麻疹、腸道病毒、立克次體病等相鑒別。

6　實驗室檢測[10]

6.1一般檢查血常規：部分病例可有白細胞和血小板減少。

6.2血清學檢查

6.2.1 ZIKV IgM檢測采用酶聯免疫吸附法（ELISA）、免疫熒光法等進行檢測。

6.2.2 ZIKV中和抗體檢測采用空斑減少中和試驗（PRNT）檢測血液中和抗體。應盡量采集急性期和恢復期雙份血清開展檢測。

6.3病毒抗原檢測采用免疫組化法檢測寨卡ZIKV。

6.4病毒分離培養可將標本接種于蚊源細胞（C6/ 36）或哺乳動物細胞（Vero）等方法進行分離培養，也可使用乳鼠腦內接種進行病毒分離。

6.5病毒核酸檢測[26]血清學方法只適用于急性和/或恢復期標本，因為在感染早期IgM和IgG抗體滴度較低，且ZIKV抗體與同為黃病毒屬的登革病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒抗體等有較強的交叉反應，易于產生假陽性；病毒分離培養對實驗室要求高、耗費時間長；相比之下，實時RT－PCR（rRTPCR）在感染早期能更快速、準確、靈敏地檢測出標本中的ZIKV，成為ZIKV診斷的金標準。ZIKV rRT－PCR檢測引物序列見表1。rRT－PCR反應總體積為25μl：kit enzyme mixture（包括逆轉錄酶和Taq酶）0.25μl；2×Quantitect RT－PCR buffer 10μl，上下游引物各1.25μl（10μmol/L），探針0.5μl （10μmol/L），RNA5μl，DEPC水補足體系到25μl；推薦循環參數：先逆轉錄50℃×10min，95℃×15min循環一次；再按95℃×15s，60℃×1min循環40次（退火/延伸）。

表1　rRT- PCR檢測寨卡病毒引物序列

7　結束語

目前世界范圍內尚無針對寨卡病毒的疫苗，也沒有特異的抗病毒藥物用于臨床，主要是對癥處理，防止蚊蟲叮咬是最佳的預防方式。由于寨卡病毒感染可能與小頭畸形、GBS有關，所以建議準備妊娠及妊娠期女性謹慎前往寨卡病毒流行地區。當前，寨卡病毒的傳播出現上升趨勢，為防止疫情傳入我國，我們應該做好預防控制工作，例如加強出入境檢疫、做好疫情監測、大力開展衛生防病工作、加強環境衛生綜合整治以及清除蚊媒滋生地，確保做到早發現、早報告、早診斷、早隔離、早治療。

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·論著·

·論著·

(收稿日期2016-03-01；修回日期2016-03-04)

通信作者：孫長貴，男，生于1962年9月，碩士研究生導師，主任技師，教授，suncgui@163.com。

作者簡介：林迪，女，生于1987年10月，本科，技師，從事臨床微生物學檢驗。

DOI：10.3969/j.issn.1674－1129.2016.02.001

中圖分類號：R373.9，R446

文獻標識碼：A

文章編號：1674－1129(2016)02－0131－03