三種方法批量全血制備的血漿產品質量分析

李瑩，楊劍，黃麗紅，彭世球，苗燕平，徐翠玲(、江西省血液中心質管科，江西南昌33005；、江西省腫瘤醫院，江西南昌33009)

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三種方法批量全血制備的血漿產品質量分析

李瑩1，楊劍2，黃麗紅1，彭世球1，苗燕平1，徐翠玲1
(1、江西省血液中心質管科，江西南昌330052；2、江西省腫瘤醫院，江西南昌330029)

摘要:目的改進儀器自動化批量分離制備全血流程及方法，制備出符合國家標準的血液。方法對比分析手工法、改進前儀器法及改進后儀器法分離全血制備出的血漿產品質量的血漿重量、血漿蛋白含量及Ⅷ因子含量。結果三種方法血漿外觀質量及全項質量抽檢均符合國家標準要求，三種方法制備血漿的血漿蛋白含量比較差異無統計學意義，改進后儀器法制備的血漿Ⅷ因子含量最高。三種方法制備200ml血漿的容量比較差異不具統計學意義，150ml和100ml血漿容量比較差異具統計學意義。結論使用改進后儀器法進行批量全血分離制備，其血漿產品質量符合國家標準，且能提高血漿產品的Ⅷ因子含量。

關鍵詞：自動化制備；批量全血制備；血漿產品質量

近幾年，隨著醫學科學技術的不斷發展，自動化技術的不斷更新，使用血液成分分離機對血液進行自動化制備較之手工制備的優勢越來越明顯，在成分血液制備中的應用越來越廣泛[1-7]。為推進我省成分制備的自動化信息化，我們對儀器自動化批量分離全血的流程和方法進行了改進，并對改進后制備的血漿產品質量進行了全面的分析，現報告如下。

1　材料與方法

1.1數據來源本中心2013年5月至2015年9月期間，血液成分分離機分離明細表和統計分析表、現代血站管理系統（Mordern 5.0）和唐山現代科技公司啟奧9.0信息管理系統中的全血分離信息，以及成分制備現場相關工作記錄。

1.2樣本來源本血液中心2013年5月至2015 年9月無償獻血者所獻全血，包括400ml（66499袋）、300ml（32311袋）及200ml（33079袋）三種規格，及全血制備的去白懸浮紅細胞（以下簡稱“紅細胞”）和新鮮冰凍血漿（以下簡稱“血漿”）。

1.3儀器與耗材全血成分分離儀LMB SEPAMATIC-SLⅢ（深圳普特公司），大容量低溫離心機Cryorfuge 6000i（美國熱電公司）。Q-400五聯袋、T-300四聯袋及200四聯袋（上海輸血技術有限公司）。血細胞計數儀KX-21（希森美康公司）、分光光度計7230G、水浴箱Julabo、PHS-25型實驗室PH計、托盤天平BPII、血凝儀CA-500（希森美康公司）、細菌培養儀BACTEC9050。

1.4制備方法流程

1.4.1手工法（以下簡稱為“方法1”）流程全血濾除白細胞后，大容量低溫離心機離心兩次后成漿。第一次離心參數：離心轉速4000r/min，離心時間8min，加速度9，減速度7，離心溫度4℃。離心后手工采用虹吸法盡可能分離出上層血漿，人工熱合后產生紅細胞成品和血漿，血漿進行第二次離心。第二次離心參數：離心轉速3260r/min，離心時間4min，加速度9，減速度4，離心溫度4℃。離心后手工使用分漿夾分離出血漿，人工熱合為成品。2013 年5月至11月本中心采集的全血大部分（其中400ml 9675袋，300ml 5021袋，200ml 6581袋）為該方法制備，2013年12月至2015年9月部分全血(其中400ml 10525袋，300ml 8431袋，200ml 5635袋）使用該方法制備。

1.4.2改進前儀器法（以下簡稱為“方法2”）流程全血濾除白細胞后，大容量低溫離心機離心兩次后成漿，兩次離心參數同方法1。離心后使用血液成分分離機分離出上層血漿，自動熱合后產生成品紅細胞和血漿，血漿進行第二次離心。離心后使用血液成分分離機分離出血漿，并自動排氣熱合為成品。2014年12月至2015年4月本中心采集的全血部分（其中400ml 9675袋，300ml 872袋，200ml 2369袋）為該方法制備。

1.4.3改進后儀器法（以下簡稱為“方法3”）流程全血濾除白細胞后，大容量低溫離心機離心一次后成漿。離心參數：離心轉速3880r/min，離心時間15min，加速度9，減速度4，離心溫度4℃。離心后使用血液成分分離機分離出紅細胞與血漿，對血漿進行外觀檢查，符合外觀質量標準者，操作儀器使其自動排氣熱合為成品，不符合外觀質量標準者，操作儀器熱合成品紅細胞，血漿與其聯接的兩個轉移袋熱合后進行二次離心，離心參數及血漿成漿方法同方法1第二次離心。2015年5月至9月采集的全血部分(其中400ml 4685袋，300ml 1067袋，200ml 1179袋）為該方法制備。

1.5質量控制指標[8]每袋血漿都經肉眼外觀質量檢查，隨機抽取血漿檢測血漿重量、血漿蛋白含量及Ⅷ因子含量。

1.6統計學分析使用STATA 7.0統計學軟件包，采用方差分析、秩和檢驗（數據方差不齊時使用）對各質量檢測項目的數據進行統計分析，秩和檢驗兩兩比較采用Bonferroni法調整檢驗水準。

2　結果

2.1外觀采用三種方法制備出來的血漿，肉眼外觀質量均符合國家標準。

2.2抽查結果通過全項質量檢測的抽查，三種方法制備的血漿各項目檢測結果包括血漿蛋白含量、Ⅷ因子含量均符合國家標準，具體見以下分析。

血漿蛋白含量的國家標準為≥50g/L，Ⅷ因子含量的國家標準為≥0.7IU/ml。經方差分析、秩和檢驗及Bonferroni法調整檢驗水準進行分析，三種方法的全項質量檢測項目統計見表1。

表1　新鮮冰凍血漿全項質量檢測項目的分析（±s）

表1　新鮮冰凍血漿全項質量檢測項目的分析（±s）

注：三種方法血漿蛋白含量兩兩比較，方法1與2：χ2=5.832，P=0.0157；方法1與3：χ2=0.452，P=0.5012；方法2與3：χ2=0.436，P=0.5093。三種方法Ⅷ因子含量兩兩比較，方法1與2：χ2=4.220，P=0.0400；方法1與3：χ2=35.889，P=0.0001；方法2與3：χ2=14.942，P=0.0001。

項目方法1方法2方法3總計n(袋)　　血漿蛋白含量（g/L）　Ⅷ因子含量(IU/ml) 40 20 24 84 χ2　P 56.41±4.13 59.60±5.41 58.91±7.52 57.88±5.70 4.536 0.1035 0.83±0.13 0.96±0.26 1.40±0.51 1.02±0.39 38.285 0.0001

由表1可知，血漿蛋白含量均值從大到小為方法2、3和1，Ⅷ因子含量均值從大到小為方法3、2和1，但兩者含量的標準差從大到小均為方法3、2和1。

血漿蛋白含量三種方法比較其差異不具統計學意義（P<0.05），其兩兩之間比較，方法1與2的差異具統計學意義（P<0.017），但方法1與3，方法2與3的差異均不具統計學意義（P>0.017）。

Ⅷ因子含量三種方法比較其差異具統計學意義（P<0.05），其兩兩之間比較，方法1與2的差異不具統計學意義（P>0.017），但方法1與3，方法2 與3的差異均具統計學意義（P<0.017）。

2.3容量分析結果三種方法制備的新鮮冰凍血漿產品分為三個規格，即200ml、150ml及100ml，國家標準的容量要求為標示量(ml)±10%，我中心對這三個規格的紅細胞設置的標示量分別為200ml、150ml及100ml。我中心日常對三種方法制備的新鮮冰凍血漿產品進行隨機抽取重量稱量，然后換算成容量。

經方差分析、秩和檢驗及bonferroni法調整檢驗水準進行分析，三種方法制備的新鮮冰凍血漿產品容量統計見表2。

表2　三種方法新鮮冰凍血漿產品容量的分析（±s）

表2　三種方法新鮮冰凍血漿產品容量的分析（±s）

注：三種方法制備的200ml新鮮冰凍血漿容量兩兩比較，方法1與2：χ2=0.025，P=0.8732；方法1與3：χ2=0.059，P=0.8085；方法2與3：χ2=1.087，P=0.2971。三種方法制備的150ml新鮮冰凍血漿容量兩兩比較，方法1與2：χ2=80.814，P=0.0001；方法1與3：χ2=98.027，P= 0.0001；方法2與3：χ2=4.469，P=0.0345。三種方法制備的100ml新鮮冰凍血漿容量兩兩比較，方法1與2：χ2=47.642，P=0.0001；方法1與3：χ2=10.286，P=0.0013；方法2與3：χ2=14.759，P=0.0001。

項目　n（袋）容量（ml）200ml 150ml 100ml方法1方法2方法3總計40 690 695 1425 n（袋）53 678 345 1076 21 169 22 212 χ2　P 209±7.48 213±18.22 210±6.39 211±13.57 1.054 0.5903容量（ml）n（袋）容量（ml）157±5.43 173±12.33 175±10.65 173±12.16 95.475 0.0001 105±4.02 126±10.72 115±13.18 123±12.63 58.032 0.0001

三種方法制備的200ml新鮮冰凍血漿容量比較其差異不具統計學意義（P>0.05），其兩兩之間比較，差異均不具統計學意義（P>0.017）。

三種方法制備的150ml新鮮冰凍血漿容量比較其差異具統計學意義（P<0.05），其兩兩之間比較，方法1與2、方法1與3的差異具統計學意義（P<0.017），但方法2與3的差異不具統計學意義（P>0.017）。

三種方法制備的100ml新鮮冰凍血漿容量比較其差異具統計學意義（P<0.05），其兩兩之間比較，差異均具統計學意義（P<0.017）。

3　討論

我中心使用的三種方法均依據國家相關標準規程[9]，濾白、人工熱合的過程均相同，不同的是離心、分漿過程。方法1第一次離心分漿時采用的是虹吸法，在盡可能多的血漿分出時無法有效控制紅細胞混入血漿的情況，所以絕大部分血漿是需要經過二次離心制備。方法2因離心參數設置的原因，雖然通過壓板擠壓分漿，但第一次離心后上層血漿仍混有少量紅細胞，故也需經二次離心制備血漿。方法3調整了離心參數，有效控制離心后上層血漿紅細胞量，且儀器分離通過壓板擠壓分漿，探測器有效控制紅細胞擠壓混入，因此可實現絕大部分血漿不需二次離心制備。

從表1可以看到，三種方法制備血漿其血漿蛋白含量差異不具統計學意義，但Ⅷ因子含量差異具統計學意義，說明三種方法的操作差異對血漿蛋白含量影響不明顯，但對Ⅷ因子含量影響明顯。分析原因，Ⅷ因子為不穩定的凝血因子，制備時間長短會對其含量造成影響[10]。由于方法3分離制備絕大部分都是一次成漿，制備時間比方法1 和2都要短，因此Ⅷ因子的存活時間比方法1和2要長，含量自然也高。而血漿蛋白是血漿中最主要的固體成分，其含量主要與獻血者相關，受制備影響較小，因此三種方法對其影響不明顯。

從表2可以看到，三種方法制備200ml血漿容量的差異不具統計學意義，而150ml和100ml血漿容量差異具統計學意義，特別是100ml血漿容量，其三種方法兩兩比較其差異均具統計學意義。這說明血漿規格量越小，方法的差異對其影響越大，這是因為規格量越小，增減的量越易對容量產生影響。

綜上所述，使用三種方法對全血進行分離制備，制備出的血漿產品質量均符合國家標準。三種方法制備血漿血漿蛋白含量的差異無統計學意義，Ⅷ因子的差異有統計學意義，方法3制備的血漿其Ⅷ因子含量最高。血漿規格越小，方法差異對血漿容量的影響越大。

參考文獻

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(收稿日期2015-12-29；修回日期2016-03-18)

基金項目：江西衛生和計劃生育委員會課題（編號20155618）

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.02.017

中圖分類號：R457.1+2

文獻標識碼：A

文章編號：1674-1129(2016)02-0180-03