結腸癌組織和轉移灶中KRAS基因突變的臨床意義

伍潔

[摘要] 目的 研究晚期結腸癌組織與轉移灶中KRAS基因突變對臨床治療和用藥的意義。方法 整群收集該院 2014年1-12月手術的68例原發晚期結腸癌組織和轉移灶。用直接測序法檢測KRAS基因突變情況。結果 ①癌組織中KRAS基因突變率60.29%（41/68），轉移灶為55.88%（38/68），癌組織的突變率高，二者差異無統計學意義（P>0.05）。②肝轉移KRAS基因突變率58.62%（34/58）較肺轉移26.67%（4/15）患者高，差異有統計學意義（P<0.05）；③癌組織與轉移灶的KRAS基因突變同時存在的有36例，一致率為89.71%（61/68），一致性較高（Kappa=0.89）。結論 結直腸癌患者中，癌組織KRAS基因突變率高于轉移灶，一致率為89.71%。KRAS基因突變提示侵襲轉移風險高，易耐藥復發預后不良。建議原發灶和轉移灶同時檢測。

[Abstract] Objective To research the significance of KRAS mutation in the colon cancer tissue and metastasis in late stage for the clinical treatment and mediation. Methods 68 cases of primary colon cancer tissues and metastases receiving operation in our hospital from January 2014 to December 2014 were collected and the KRAS mutation condition was detected by direct sequencing method. Results ①The KRAS mutation rate in the cancer tissues was higher than that in the metastases， 60.29%[41/68 vs 55.88%（38/68）]， the difference was not statistically significance （P>0.05）.②the KRAS mutation rate in the liver metastasis was higher than that in the pulmonary metastasis， the difference was statistically significant （P<0.05）.③The KRAS mutation in the cancer tissues and the KRAS mutation in the metastases coexisted in 36 cases， the consistency rate was 89.71%（61/68）， and the consistency was high （Kappa=0.89）. Conclusion The KRAS mutation rate in the cancer tissues is higher than that in the metastases for patients with colon cancer， the consistency rate is 89.71%， the KRAS mutation reminds that the risk of invasion and metastasis is high， and it is prone to drug resistant and recurrence and the prognosis is not good， it is suggested that the primary lesion and metastasis are detected at the same time.

[Key words] Colon cancer； KRAS mutation； Metastasis

隨著對CRC發病分子機制和信號傳導通路的深入研究，證明RAS信號通路激活與惡性腫瘤的發病、進展和惡性程度密切相關[1]。野生型KRAS基因可抑制癌細胞生長，一旦突變就會持續刺激細胞生長導致腫瘤發生。KRAS檢測是目前篩選抗EGFR靶向藥物治療最有效直接的方法[2]。靶向藥物耐藥是惡性腫瘤存在的普遍現象，其耐藥機制復雜為多種基因共同參與的結果。相關臨床試驗證實KRAS、BRAF突變型的患者出現耐藥不能從抗EGFR治療中獲益預后生存差[3]。目前有研究認為，mCRC原發灶或轉移灶均可作為基因突變檢測的靶標組織，但有研究證明轉移灶基因突變具有高度異質性，根據治療需要實時檢測[4]。該研究分析該院 2014年1—12月收治的68例結腸癌患者癌組織和轉移灶基因KRAS突變情況，探討癌組織與轉移灶KRAS突變的差異及其對臨床治療和用藥的意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

整群收集該院68例經病理科診斷外科手術原發結腸癌患者癌組織和轉移灶標本。男性36例，女性32例；年齡43～69歲，平均（54.6±9.1）歲。根據UJCC標準臨床分期為Ⅳ期，其中有58例伴有肝轉移、15例肺轉移（5例肝肺轉移）。入選患者術前均未行任何治療。

1.2 實驗方法

采用DNA分子直接測序法，用上海碧云天生物有限公司的DNA提取試劑盒提取DNA。利用軟件Premier5.0設計PCR引物序列，用純化試劑盒將PCR產物純化，取5 μL PCR產物2%瓊脂糖凝膠電泳經溴化乙啶染色，紫外燈下照相存盤，紫外凝膠分析成像系統觀察電泳結果并打印。將檢測有單一條帶的樣本送公司測序，經人工校對記錄后用DNAMAN6.0軟件與基因庫BRAF基因序列比較結果。

1.3 統計方法

應用SPSS 17.0軟件對數據進行分析，計數資料采用（n，%）表示，采用χ2檢驗，應用Kapparel統計方法統計一致性。

2 結果

2.1 KRAS基因突變情況

癌組織中KRAS基因突變率60.29%（41/68），轉移灶為55.88%（38/68），癌組織比轉移灶高，二者差異無統計學意義（χ2=4.79，P>0.05）。

2.2 肝肺轉移突變比較

有肝轉移患者癌組織KRAS基因突變58.62%（34/58）明顯高于肺轉移患者26.67%（4/15），二者差異有統計學意義（χ2=4.94，P<0.05）。

2.3 癌組織與轉移灶KRAS基因表達結果比較

癌組織與轉移灶的KRAS基因突變同時存在的有36例，以癌組織中檢測的KRAS突變為準一致率87.80%（36/41），整體的一致率為89.71%（61/68），一致性較高（Kappa=0.89）。

3 討論

腫瘤形成和發展的不同階段不但具有不同的基因突變表達譜，而且腫瘤組織的異質性存在異克隆生長的現象，因此轉移灶和原發灶之間可能具有不同的生物學特性和特異性基因型[5]。按照目前臨床常規診療的流程，因為檢測位點和治療位點的偏移，會導致患者在用藥選擇方面缺乏科學性和嚴謹性。該研究結腸癌患者中癌組織KRAS突變率比轉移灶高。雖然原發灶與轉移灶中基因表達并不完全一致，但是兩者差異無統計學意義（P>0.05）。譚聰等[6]研究76例結直腸癌原發灶與轉移灶基因突變狀態并不完全一致，存在19.7%的表達差異率。提示通過檢測原發灶基因表達狀態來確定針對轉移灶靶向治療藥物存在不嚴謹，需要進一步完善。冼海兵等[7]對75例原發灶和對應肝轉移灶KRAS基因突變的對比研究一致率93.1%（k=0.842）。提示對于無法取得原發灶組織，用轉移灶替代檢測對治療也具有重要意義[8]。建議對基因表達不一致患者進行實時檢測，提供用藥依據增加獲益人群。

綜上所述， 該研究對癌組織與轉移灶中KRAS突變情況進行了初步研究，癌組織與轉移灶的KRAS突變有差異。目前檢測中大部分轉移性結腸癌患者是提供原發灶的樣本，靶向治療的靶點是轉移病灶，有可能與原發灶不一致情況，二者同時檢測非常必要。KRAS與癌組織的耐藥和復發轉移具有相關性，對于治療方案選擇依據和逆轉措施的實施具有重要指導意義，為臨床治療提供準確理論依據。

[參考文獻]

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