全自動生化分析儀測定血清高、低密度脂蛋白膽固醇分析性能驗證

孫云芝，唐　歐，許安春

(成都市中醫藥大學附屬醫院檢驗科，四川成都 610072)

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全自動生化分析儀測定血清高、低密度脂蛋白膽固醇分析性能驗證

孫云芝，唐歐，許安春△

(成都市中醫藥大學附屬醫院檢驗科，四川成都 610072)

摘要:目的對在AU5400全自動生化分析儀上檢測高/低密度脂蛋白膽固醇(H/LDL-C)的分析性能進行驗證。方法參考《臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證》及國內外有關性能評價的文件和報道,結合臨床工作實際,對全自動生化分析儀測定血清H/LDL-C的精密度、正確度、分析測量范圍和生物參考區間4項分析性能進行驗證和評價。結果H/LDL-C測定在2個不同濃度水平的重復標準差和期間標準差都小于廠家規定的不精密度要求;采用室間質評樣本作為參考物質,HDL-C的參考物質偏移值小于參考物質賦值的不確定度，驗證廠家聲稱可靠；LDL-C的參考物質偏移值大于參考物質賦值的不確定度，則將此偏移的驗證區間與參考物質的賦值比較，得出參考物質賦值在此驗證區間內，表明此差異無統計學意義也認可廠家聲稱可靠；HDL-C分析測量范圍為0.245～2.605 mmol/L,LDL-C的分析測量范圍為1.04～12.85 mmol/L，略寬于廠家聲明的線性范圍；生物參考區間驗證結果均在設定的范圍之內。結論貝克曼庫爾特全自動生化分析儀測定H/LDL-C的分析性能與廠家聲明基本一致,符合臨床的要求,可以應用于臨床。

關鍵詞:全自動生化分析儀；高密度脂蛋白膽固醇；低密度脂蛋白膽固醇；性能驗證；精密度；正確度

高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)主要由肝臟合成，由載脂蛋白、磷脂、膽固醇及少量脂肪酸組成，是逆向轉運的膽固醇酯，可有效降低患動脈粥樣硬化及冠狀動脈心臟病的危險[1]。HDL-C降低可作為冠心病的危險指標；血清低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)檢測作為反映缺血性心血管病發病危險的指標已在臨床被廣泛應用[2]，許多前瞻性研究和臨床試驗也發現LDL是冠心病發病風險的最主要影響因素[2-3]。《中國成人血脂異常防治指南》明確規定不同危險因素存在情況下LDL-C的控制目標。目前，H/LDL-C檢測已經廣泛應用于臨床。為此，筆者參考《臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證》及國內外有關性能評價的文件和報道,結合臨床工作實際,對全自動生化分析儀測定血清H/LDL-C的精密度、正確度、分析測量范圍和生物參考區間4項分析性能進行驗證和評價。

1材料與方法

1.1樣本來源選取門診和住院部標本，要求空腹至少8 h后采血，3 500 r/min離心10 min，取血清檢測。

1.2儀器與試劑檢測儀器為貝克曼-庫爾特AU5400全自動生化分析儀。試劑包括，(1)北京中生北控HDL-C檢測試劑；(2)北京中生北控HDL-C檢測試劑；(3)北京中生北控配套校準品；(4)RANDOX質控血清水平2、水平3。

1.3方法

1.3.1精密度驗證精密度驗證進行5天，每天一個批次,每個批次選取高、低兩個濃度水平的混合血清進行測量。每個批次測量前按照廠家要求進行校準，測量前后均進行室內質控標本測量，如出現室內質控失控，則舍去此批數據，另加一個批次。每個批次對各濃度樣本分別重復測量3次。按照公式[4]分別計算重復標準差(Sr)，期間標準差(S1)，廠家聲稱值σr和σ1，并判斷是否小于廠家規定的性能標準。

1.3.3分析測量范圍驗證按照參考文獻[5-7]，在廠家聲稱的線性范圍內選取5～7個濃度樣本，盡量覆蓋整個線性范圍。準備高、低值濃度樣本，分別命名樣本6(H)和樣本1(L)，按照5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H關系配置，形成系列濃度梯度。測量前按照廠家要求進行校準，測量前后均進行室內質控標本測量，如出現室內質控失控，則舍去此次數據，重新測量。每個濃度水平至少測定2次。按照公式計算線性回歸方程和相關系數r2,若r2>0.995，則表明廠家聲稱的線性測量范圍是可接受的。

1.3.4生物參考區間驗證參考CLSI C28-A2文件[8]，選取健康體檢者20例，年齡19～80歲，平均42歲。男女各一半。按照標準操作程序進行檢測，對結果進行統計并與設定的參考區間進行比較，若20份標本的檢測結果均在設定的參考區間內或不超過2 份標本超出，則驗證通過。否則，進行參考區間確立實驗。

1.4統計學處理應用SPSS17.0統計軟件進行數據分析。分析測量范圍的驗證中截距a與0的比較用t檢驗,P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1精密度驗證HDL-C和LDL-C的Sr<σr，表明廠家聲稱的重復精密度可靠，HDL-C和LDL-C的Sl<σl，表明廠家聲稱的期間精密度可靠。見表1。

表1　　H/LDL-C精密度驗證結果

表2　　HDL-C和LDL-C的正確度驗證

2.3分析測量范圍驗證以實測值為Y軸，預期值為X軸，將結果點在Y-X圖上，計算線性性回歸方程Y=bX+a。可以得出線性回歸方程為Y=0.997 4X+0.008 2，r2=0.999。相關系數r2>0.975,直線回歸方程b在0.97～1.03之間，常數小于±(C1+C6)×0.05/2,數據組呈線性關系。HDL的分析測量范圍為0.245～2.605 mmol/L，與廠商提供的可報告范圍基本一致。以實測值為Y軸，預期值為X軸，將結果點在Y-X圖上，計算線性性回歸方程Y=bX+a。可以得到線性回歸方程為Y=1.004X-0.191 7，r2=0.999 4。r2>0.975，b在0.97～1.03之間，常數在±(C1+C6)×0.05/2范圍內,數據組呈線性關系。LDL的分析測量范圍為1.04～12.85 mmol/L，與廠商提供的可報告范圍基本一致。見表3、4。

表3　　HDL-C分析測量范圍驗證

表4　　LDL-C分析測量范圍驗證

2.4生物參考區間驗證20份表面健康人血清HDL-C檢測濃度范圍在1.14～2.16 mmol/L之間，LDL-C檢測濃度范圍在1.92～3.07 mmol/L之間，均在廠家聲明的生物參考區間之內。

3討論

根據《醫療機構臨床實驗室管理辦法》的要求，臨床實驗室所用的檢驗方法、儀器等應保證檢驗結果的準確可靠，臨床實驗室應對所選購的商品定量試劑盒進行檢查，以保證所選用的試劑盒達到臨床實驗室要求的臨床性能、分析性能、經濟性能等各方面的要求。LDL-C檢測的參考方法是超速離心法，需要特殊的儀器，操作時間長，臨床很難開展[9]。HDL-C檢測的參考方法是超速離心結合肝素-錳沉淀法[1]。本檢測系統試劑的檢測原理是直接法-表面活性劑清除法。本實驗對貝克曼庫爾特AU5400全自動生化分析儀測定H/LDL-C的主要分析性能進行評價，包括不精密度、不準確度、分析測量范圍、生物參考區間來了解該系統的性能。

在本檢測系統，5個批次的高、低值混合血清的重復標準差和期間標準差均小于廠家規定的分析性能；正確度的驗證，可以采用患者樣本與其他檢驗方法/試劑盒進行正確度驗證，也可以采用參考物質進行。本試驗使用的是衛生部臨檢中心2015年第一次脂類室間質評第201514號樣本作為參考物質進行驗證，計算得出HDL-C的參考物質偏移值小于參考物質賦值的不確定度，則驗證廠家聲稱可靠；LDL-C的參考物質偏移值大于參考物質賦值的不確定度，則將此偏移的驗證區間與參考物質的賦值比較，得出參考物質賦值在此驗證區間內，表明此差異無統計學意義也認可廠家聲稱可靠。對于線性測量范圍的驗證，HDL-C檢測系統的分析測量范圍為0.245～2.605 mmol/L，略寬于廠家提供的線性范圍0.20～2.59 mmol/L，LDL-C檢測系統的分析測量范圍為1.04～12.85 mmol/L，略寬于廠家提供的線性范圍0.30～10.34 mmol/L。20份健康人血清濃度均在設定的參考區間范圍內，可以認為現用參考區間適用于本實驗室。

綜上，本文參考試劑廠家、CLSI文件以及國內關于定量檢測分析系統性能評價的相關報道，評價了在AU5400全自動生化分析儀上檢測H/LDL-C的性能，基本與廠家申明的性能一致，該檢測系統能夠用于臨床。

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(收稿日期：2016-01-12)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.08.044

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)08-1117-03

△通訊作者，E-mail：31922465@qq.com。

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