混勻對不同保存條件下血清生化結果影響的研究

林　晶，鐘培英，王　宇，李廣權

(成都三六三醫院檢驗科，四川成都 610041)

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混勻對不同保存條件下血清生化結果影響的研究

林晶，鐘培英，王宇，李廣權△

(成都三六三醫院檢驗科，四川成都 610041)

摘要:目的研究混勻對不同保存條件下的血清生化結果的影響。方法對收集的20例患者新鮮血清分別檢測常規生化項目后，各自分裝于4組編號相同的樣本管中，兩組置-20 ℃保存，一組4℃冰箱保存，一組室溫保存，24 h后檢測常規生化項目，對-20 ℃保存的兩組血清，一組不混勻檢測，一組充分混勻后檢測。結果室溫放置24 h后血清生化結果與初始結果比較，除ALT，AST，TBIL，DBIL項目差異有統計學意義(P<0.05)外，其余項目差異均無統計學意義(P>0.05)；4 ℃冰箱放置24 h后血清生化結果與初始結果比較，除TBIL，DBIL項目差異有統計學意義(P<0.05)外，其余項目差異均無統計學意義(P>0.05)；-20 ℃保存血清，未混勻血清生化結果與初始結果比較，所有項目差異均有統計學意義(P<0.05)，充分混勻后血清生化結果與初始結果比較，所有項目差異無統計學意義(P>0.05)。結論室溫和4 ℃冰箱保存的血清，各種化學成分的均一性不受影響；-20 ℃保存后的血清，復融后上層血清化學成分濃度明顯低于下層血清，為保證檢測結果的可靠性，檢測前務必充分混勻。

關鍵詞:混勻；保存條件；冰凍保存；生化結果

臨床檢驗工作中常有不能及時檢測的標本,需在室溫、4 ℃冰箱或冰凍保存。而血液離開人體后在不同的條件下會發生不同的反應和作用，從而導致檢驗結果出現偏差[1]。如血液中的有形成分如紅細胞、白細胞等在室溫條件下放置一定時間,在試管中有自然沉降的現象。那么血清中的化學成分如糖、脂、蛋白、無機鹽等在常溫、4 ℃、冰凍不同保存條件下是否也存在自然沉降現象？目前未見相關報道。因此，本文主要研究血清樣本在不同儲存條件下保存一定時間后生化結果的準確性和可靠性，現報道如下。

1材料與方法

1.1樣本來源收集當天20例患者新鮮血清于20個樣本管中，20例血清標本中至少10例標本谷丙轉氨酶(ALT),谷草轉氨酶(AST)、谷氨酰轉肽酶(GGT)、堿性磷酸酶(AKP)、總蛋白(TP)、清蛋白(ALB)、總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)、尿素(BUN)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、葡萄糖(GLU)、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)項目中至少有一項或多項同時存在異常結果，溶血脂血標本除外，每例研究對象血清確保4 mL以上。

1.2儀器與試劑儀器采用日本HITACHI7600-010生化儀。試劑：ALT、AST、GGT、AKP、TBIL、DBIL、BUN、Cr、HDL-C試劑由日本和光株式會社提供，UA、GLU、TG、TC、TP、ALB由四川邁克公司提供。多項目校準液由德國羅氏公司提供(批號：177955)，質控液(包括中值和高值)由英國朗道公司提供。

1.3方法(1)按實驗項目標準化操作程序(SOP)，確保當天的質控結果通過后，將收集的20份樣本分別編上號，并進行ALT、AST、GGT、AKP、TBIL、DBIL、BUN、Cr、HDL-C、UA、GLU、TG、TC,TP、ALB檢測，檢測結果以初始結果表示。檢測后立即分裝在4組編號相同容量為1 mL有蓋樣本管中，每個樣本管分裝1 mL血清，分裝后密閉保存。將兩組樣本直立放置于-20 ℃冰箱保存，一組直立放置于4 ℃冰箱保存，一組置室溫(25 ℃)保存。(2)當4組分裝血清保存24 h后，將室溫保存的血清和4 ℃冰箱保存的血清及時進行上述生化指標檢測，檢測結果分別以室溫保存后結果和4 ℃保存后結果表示；將兩組-20 ℃保存血清取出室溫復融30 min后，將其中一組血清(確保不進行任何形式的傾斜混勻)進行上述生化指標檢測，檢測結果以未混勻結果表示；將另外一組-20 ℃保存血清充分顛倒混勻后再進行上述生化指標檢測，檢測結果以混勻后結果表示。

1.4統計學處理采用SPSS19.0統計軟件處理，計量資料采用M(P25～P75)表示，組間比較采用配對秩和檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1室溫保存后生化結果與初始結果比較20例樣本經25 ℃室溫保存24 h后檢測ALT、AST、GGT、AKP、TP、ALB、TBIL、DBIL、BUN、Cr、UA、GLU、TG、TC、HDL-C項目結果平均水平與初始結果平均水平比較、采用配對秩和檢驗，對應Z值分別為-2.362、-2.230、-1.023、-0.983、-0.994、-0.950、-2.846、-2.545、-1.025、-1.572、-1.020、-1.020、-1.683、-1.688、-0.982,除ALT、AST、TBIL、DBIL 4項目P<0.05外，其余項目均P>0.05，表明血清樣本室溫放置24 h后，除ALT、AST、TBIL、DBIL 4項目結果與初始結果的差異有統計學意義(P<0.05)外，其余生化項目結果與初始結果的差異均無統計學意義(P>0.05)，見表1。

2.24 ℃冰箱保存后生化結果與初始結果比較20例樣本經4 ℃冰箱保存24 h后檢測ALT、AST、GGT、AKP、TP、ALB、TBIL、DBIL、BUN、Cr、UA、GLU、TG、TC、HDL-C項目結果平均水平與初始結果平均水平比較，對應Z值分別為-1.764、-1.685、-1.515、-1.410、-1.012、-0.982、-2.366、-2.241、-1.520、-1.322、-1.423、-1.623、-1.645、-1.781、-1.322,除TBIL、DBIL兩項目對應的P<0.05外，其余項目的P>0.05，表明血清樣本經4 ℃冰箱放置24 h后，除TBIL、DBIL兩項目結果與初始結果的差異有統計學意義外，其余生化項目結果與初始結果的差異均無統計學意義，見表2。

2.3-20 ℃冷凍保存24 h復融后未混勻檢測結果與初始結果比較20例樣本經-20 ℃保存24 h復融后未混勻就檢測ALT、AST、GGT、AKP、TP、ALB、 TBIL、DBIL、BUN、Cr、UA、GLU、TG、TC、 HDL-C結果平均水平與初始結果平均水平比較，采用配對秩和檢驗，對應Z值分別為-3.922、-3.890、-3.473、-3.883、-3.174、-3.920、-3.846、-3.141、-3.920、-3.922、-3.920、-3.920、-3.847、-3.883、-3.922,所有項目P<0.05，表明血清樣本在-20 ℃冷凍保存24 h復融后未混勻就檢測，其常規生化項目結果與初始結果的差異均有統計學意義，見表3。

表1　　室溫保存24 h后測定生化結果與初始結果比較

表2　　4℃保存24 h后測定生化結果與初始結果比較

2.4-20 ℃冷凍保存24 h復融并混勻后檢測結果與初始結果比較20例樣本經-20 ℃保存24 h復融并混勻后檢測ALT、AST、GGT、AKP、TP、ALB、TBIL、DBIL、BUN、Cr、UA、GLU、TG、TC、HDL-C項目結果平均水平與初始結果平均水平比較，采用配對秩和檢驗，對應Z值分別為-1.564、-1.615、-1.415、-1.310、-1.112、-0.982、-1.366、-1.441、-1.320、-1.122、-1.220、-1.525、-1.547、-1.683、-1.122,所有項目P>0.05，表明血清樣本經-20 ℃保存24 h復融并混勻后，其常規生化項目結果與初始結果的差異無統計學意義，見表4。

表3　　-20 ℃冷凍保存24 h復融后未混勻測定生化

表4　　-20 ℃保存24 h復融并混勻后測定生化

3討論

在臨床檢驗工作中,受方法學及樣本數量的制約,許多標本常需在4 ℃或低溫冷凍保存；以及臨床科研中,一些標本的采集因為嚴格的時間限制如術前、術中、臥位、立位等特殊情況，這些標本很難具有成批性[2]；另外,隨著醫療服務質量的不斷改善,病人要求隨到隨抽血,如果加上待檢項目需要用放射免疫法或酶免疫法,這些標本更需在4 ℃或甚至-20 ℃條件下保存一定時間[3]。市場上大多數校準品、質控品都是干粉制劑，一般用去離子水復溶后需要分裝保存[4]。所以選擇恰當的保存方式，使血清的化學成分的穩定性不受影響顯得非常重要。目前實驗室保存血清的主要方式有：室溫，4 ℃冰箱以及-20 ℃冰凍保存。根據本次實驗研究發現，25 ℃左右室溫條件和4℃冰箱密閉保存24 h的血清樣本，其化學成分的均一性基本不受到影響，只是一些酶或膽紅素會不同程度降低，室溫保存條件下降低更明顯。而-20 ℃冰凍保存24 h后的血清樣本，充分顛倒混勻后其化學成分水平與初始結果并無明顯差異，顯然，在保存時間要求不是很長的情況下，-20 ℃冰凍保存是血清樣本的最佳保存方式，優于室溫保存和4 ℃冰箱保存方式[5]，由于不需要特殊的設備，也是目前大多數實驗室容易實現的方式。

-20 ℃冰凍保存作為實驗室血清樣本的常用保存方式，從本次實驗研究發現，-20 ℃冷凍保存24 h后血清上下層各種化學成分的均一性很差。主要表現為血清上層的化學成分的濃度明顯低于血清下層的濃度，導致這一現象的原因目前有不同的解釋。有研究認為這是由于低溫條件下各種化學成分的飽和度下降導致結晶的析出，而結晶沉積在樣本管底部，血清上層化學成分濃度就降低[6-7]。而據筆者觀察室溫復融30 min后未發現樣本管底部結晶存在。也有研究認為這一現象主要是由于低溫條件下化學成分的自然沉降有關[8]。有研究發現，若將冷凍保存后的血清由上至下分成多層，血清中各種化學成分的濃度由上至下是逐漸增加的[9]。但是化學成分為什么在低溫條件下會沉降？至今還無很合理的解釋。所以上下層血清化學成分濃度差異大確切的原因還有待進一步探討。

在實驗操作中非常強調加樣本或試劑后通過攪拌、震蕩方式混勻使反應更充分，而保存樣本檢測前需混勻常被大家忽視，特別是低溫冷凍保存后的血清樣本。這是因為目前大家對低溫冷凍保存后血清樣本化學成分上下層巨大的濃度差異認識不足有關。對低溫冷凍保存后的血清樣本，復融后充分混勻再檢測尤為重要，建議寫入相關實驗標準操作規程。當然，可以利用低溫冷凍保存后的血清上下層濃度差異大的特點，通過檢測冷凍保存后的下層血清的腫瘤、病毒及核酸標志物濃度，以提高檢測靈敏度。

本研究表明，經室溫或4 ℃冰箱保存24 h的血清，各種化學成分的均一性基本不受影響，但是一些酶和膽紅素會不同程度降低，室溫保存的血清降低更明顯；-20 ℃保存的血清，復融后上下層血清化學組分的均一性很差，上層血清化學成分濃度明顯低于下層血清，為保證檢測結果的可靠性，檢測前務必充分混勻。

參考文獻

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(收稿日期：2016-01-11)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.08.050

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)08-1130-03

△通訊作者，E-mail:499191009@qq.com。

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