苦參堿對(duì)慢性酒精性肝損傷大鼠血脂及抗氧化能力的影響

李小花　程贛中　周鳳華

(贛南醫(yī)學(xué)院顯微實(shí)驗(yàn)室，江西　贛州　341000)

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苦參堿對(duì)慢性酒精性肝損傷大鼠血脂及抗氧化能力的影響

李小花程贛中1周鳳華2

(贛南醫(yī)學(xué)院顯微實(shí)驗(yàn)室，江西贛州341000)

〔摘要〕目的探討苦參堿對(duì)慢性酒精性肝損傷大鼠血脂調(diào)節(jié)和抗氧化能力的影響。方法建立大鼠慢性酒精性肝損傷模型，觀察各組大鼠的肝臟結(jié)構(gòu)，檢測血清中肝損傷標(biāo)志酶和血脂含量以及肝組織抗氧化酶和脂質(zhì)過氧化物水平。結(jié)果低劑量組大鼠給藥后的精神狀態(tài)、皮毛光澤度以及食欲等一般狀態(tài)均較其他組好，可有效改善肝損傷以及肝細(xì)胞脂肪變、腫脹以及壞死等狀況，且能抑制慢性酒精性肝損傷大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)升高；而不同劑量的苦參堿均能明顯降低慢性酒精性肝損傷大鼠血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)含量，同時(shí)還可降低血清總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)的含量，升高大鼠肝臟組織中過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)的活力，并減少丙二醛(MDA)的含量。結(jié)論低劑量苦參堿可通過調(diào)節(jié)血脂和提高機(jī)體抗氧化能力對(duì)大鼠慢性酒精性肝損傷進(jìn)行保護(hù)。

〔關(guān)鍵詞〕苦參堿；肝損傷；抗氧化；血脂調(diào)節(jié)

酒精性肝病(ALD)是引起肝硬化的重要原因，戒酒為ALD的主要治療方式，目前尚未發(fā)現(xiàn)特效藥，支持療法的效果也不佳〔1〕。苦參堿是一種生物堿，在抗感染、抗病毒、抗肝癌等方面具有非常重要的藥理作用〔2，3〕,但苦參堿是否對(duì)慢性酒精性肝損傷有保護(hù)作用的相關(guān)報(bào)道非常少。本研究旨在分析苦參堿對(duì)慢性酒精性肝損傷大鼠血脂調(diào)節(jié)和抗氧化能力的影響。

1資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)健康大鼠Sprague-Dawley(SD)72 只，雌、雄各半，體重(120±20)g，來自寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào):SYXK(寧) 2011-0002。

1.2試劑苦參堿(純度為99.8%，寧夏紫荊花藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)90110406)；老銀川白酒(43% vol，寧夏昊王酒業(yè)有限公司)；過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)試劑盒(南京建成生物工程有限公司，批號(hào)分別為20110506，20110802，20110311，20110904)。

1.3儀器Olympus CHC-212光學(xué)顯微鏡(日本);細(xì)胞超聲波破碎機(jī)(南京貝帝實(shí)驗(yàn)儀器有限公司);Olympus AU2700全自動(dòng)生化分析儀(日本);752紫外分光光度儀(北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司)。

1.4方法所有準(zhǔn)備的實(shí)驗(yàn)大鼠均預(yù)飼養(yǎng)1 w，喂以普通飼料，均自由進(jìn)食與飲水，隨后將其隨機(jī)分為空白對(duì)照組、酒精模型組、苦參堿低、中、高劑量組(25、50、100 mg·kg-1·d-1)、苦參堿高劑量對(duì)照組(100 mg·kg-1·d-1)，每組12 只，雌雄各半。大鼠灌胃2次/d，間隔2 h，空白對(duì)照組和酒精模型組均給予0.5 ml/100 g生理鹽水，而其他組分別給予相應(yīng)濃度的苦參堿；2 h后，空白對(duì)照組和苦參堿高劑量對(duì)照組給予1 ml/100 g的43%葡萄糖，其他組給予43%的老銀川白酒，周期為30 d。

1.5采集樣本與檢測指標(biāo)各組大鼠在第30 天開始禁食但不禁飲，12 h后處死，于股動(dòng)脈取血在室溫下靜置1 h，4℃，4 000 r/min離心10 min，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的含量。同時(shí)剖腹取肝臟全葉，稱重，并取其中一葉放入10%甲醛中固定,48 h 后常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、蘇木素-伊紅(HE)染色、脫水、透明、封片,光學(xué)顯微鏡下觀察各組肝臟形態(tài)學(xué)的變化。另外，再取適量凍存的肝臟，加入液氮研磨后用生理鹽水作為介質(zhì)制成10%的肝組織勻漿，超聲破碎細(xì)胞后，4℃，2 500 r/min離心10 min 后取上清液，操作按試劑盒說明書進(jìn)行，對(duì)肝臟組織勻漿上清液中CAT、SOD、GSH-PX的活力及MDA的含量進(jìn)行檢測。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1實(shí)驗(yàn)大鼠一般情況空白對(duì)照組大鼠皮毛光澤度好，行動(dòng)靈活，進(jìn)食量及大便正常，體重增長較快；酒精模型組大鼠用酒精灌胃后反應(yīng)較慢，出現(xiàn)步態(tài)不穩(wěn)、困倦且部分呈現(xiàn)嗜睡的狀態(tài)，大概2～3 h后才能恢復(fù)正常，而2 w后該組大鼠皮毛逐漸變粗糙，進(jìn)食量也變少，體重增長較慢；苦參堿各劑量組大鼠用酒精灌胃后也出現(xiàn)上述酒醉癥狀，2 w后中，高劑量組以及高劑量對(duì)照組大鼠的精神狀態(tài)差，皮毛也逐漸變粗糙且光澤度差，進(jìn)食量少，體重增長慢，但低劑量組的大鼠精神狀態(tài)則較好，皮毛光澤度好、食欲也較好。

2.2苦參堿對(duì)大鼠肝臟病理組織學(xué)變化的影響空白對(duì)照組的肝小葉結(jié)構(gòu)清楚，肝索呈放射狀排列，肝細(xì)胞排列整齊分界清，核圓居中，胞質(zhì)豐富呈嗜堿性;而酒精模型組、苦參堿中、高劑量組以及苦參堿高劑量對(duì)照組的肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，肝索排列紊亂壞死，并有炎細(xì)胞浸潤，肝細(xì)胞腫脹可見脂肪空泡，部分肝細(xì)胞嗜酸性變，而苦參堿低劑量組大鼠肝索排列整齊，肝細(xì)胞腫脹明顯減輕，有少量炎細(xì)胞浸潤，只有部分肝細(xì)胞有小脂滴。

2.3苦參堿對(duì)慢性酒精性肝損傷大鼠血清肝損傷標(biāo)志酶的影響酒精模型組大鼠的AST與ALT水平均明顯高于空白對(duì)照組(均P<0.05)，而苦參堿低、中、高劑量組以及高劑量對(duì)照組大鼠血清中AST的含量均明顯低于酒精模型組(均P<0.05)；苦參堿低劑量組大鼠血清中ALT含量明顯低于酒精模型組(P<0.05)，另外苦參堿高劑量對(duì)照組大鼠血清中ALT含量明顯高于空白對(duì)照組(P<0.05)。見表1。

2.4苦參堿對(duì)慢性酒精性損傷大鼠血脂水平的影響酒精模型組大鼠血清中TC與TG水平均明顯高于空白對(duì)照組(均P<0.05)。苦參堿低、中、高劑量組以及高劑量對(duì)照組大鼠血清TC和TG的含量均明顯低于酒精模型組(均P<0.05)。另外，苦參堿中、高劑量組以及高劑量對(duì)照組大鼠血清中HDL含量均明顯高于空白對(duì)照組與酒精模型組(P<0.05)。見表1。

2.5苦參堿對(duì)慢性酒精性肝損傷大鼠抗氧化能力的影響酒精模型組大鼠肝臟組織中SOD、CAT和GSH-PX含量均明顯低于空白對(duì)照組，而MOD含量明顯高于空白對(duì)照組(均P<0.05)；苦參堿低、中、高劑量組以及高劑量對(duì)照組大鼠肝臟組織中SOD、CAT和GSH-PX含量均明顯高于酒精模型組，而MOD含量低于酒精模型組(均P<0.05)；而苦參堿高劑量對(duì)照組大鼠肝臟組織中SOD和GSH-PX含量均明顯低于空白對(duì)照組，且MOD含量高于空白對(duì)照組(均P<0.05)。見表2。

表1各組血清AST、ALT以及血脂含量比較(x±s,n=12)

組別AST(U/L)ALT(U/L)TC(mmol/L)TG(mmol/L)LDL(mmol/L)HDL(mmol/L)空白對(duì)照組148.02±25.3367.04±16.211.85±0.320.48±0.110.48±0.050.73±0.09酒精模型組217.21±49.322)106.34±23.882)2.94±0.302)0.64±0.152)0.55±0.040.68±0.10苦參堿低劑量組179.41±43.121)2)85.42±15.431)2)2.49±0.281)2)0.51±0.121)0.46±0.080.70±0.13苦參堿中劑量組168.34±33.821)89.11±20.012)2.43±0.351)2)0.49±0.091)0.49±0.090.84±0.141)2)苦參堿高劑量組152.04±39.561)90.87±20.22)2.22±0.431)2)0.49±0.101)0.48±0.070.92±0.151)2)苦參堿高劑量對(duì)照組150.43±30.341)89.06±17.222)1.82±0.371)0.44±0.131)0.47±0.061.08±0.171)2)

與酒精模型組比較:1)P<0.05；與空白對(duì)照組比較:2)P<0.05；下表同

表2各組大鼠肝臟組織SOD、CAT、GSH-PX和MOD含量比較(x±s,n=12)

組別SOD(kU/L)CAT(kU/L)GSH-PX(kU/L)MOD(μmol/L)空白對(duì)照組526.90±45.4356.02±5.34557.13±56.322.05±0.65酒精模型組258.97±29.862)34.17±5.382)365.43±51.242)5.53±0.742)苦參堿低劑量組382.43±51.901)2)43.86±4.371)2)491.58±62.321)2)4.32±0.541)2)苦參堿中劑量組490.42±42.211)2)45.43±5.321)2)468.65±40.881)2)4.23±0.631)2)苦參堿高劑量組493.45±43.091)2)49.78±4.371)2)456.08±69.541)2)4.01±0.751)2)苦參堿高劑量對(duì)照組494.08±30.081)51.98±4.511)488.08±23.341)2)3.79±0.0541)2)

3討論

苦參堿是一種提取于寧夏特色回藥材苦豆子的生物堿，具有較多的藥理學(xué)作用。有研究顯示苦參堿對(duì)缺血/再灌注以及內(nèi)毒素造成的肝損傷具有保護(hù)作用〔4〕。本研究結(jié)果也說明低劑量苦參堿對(duì)慢性酒精性肝損傷大鼠的肝臟具有保護(hù)作用。

過多氧自由基與抗氧化酶系統(tǒng)(SOD和GSH-PX等)的失衡是造成氧化應(yīng)激主要原因〔5〕。酒精代謝、降解的場所主要在肝臟，其可參加肝細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)，酒精進(jìn)入肝臟后，一般先轉(zhuǎn)化成乙醛，再轉(zhuǎn)化為乙酸，最后以二氧化碳以及水的形式排出體外〔6〕。有研究顯示乙醛能使肝細(xì)胞發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)破壞肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)，還能誘導(dǎo)自身免疫反應(yīng)，造成肝細(xì)胞變性壞死以及炎癥細(xì)胞的浸潤〔7〕，大量飲酒使大量的酒精進(jìn)入肝臟后形成大量的中間產(chǎn)物乙醛導(dǎo)致肝組織發(fā)生損傷。本研究結(jié)果說明苦參堿能提高慢性酒精性肝損傷大鼠抗氧化能力，同時(shí)具有抑制脂質(zhì)過氧化的作用。另外，長期大量飲酒可導(dǎo)致機(jī)體血脂代謝異常，從而形成酒精性脂肪肝〔8〕。苦參堿可以降低動(dòng)物體內(nèi)的血脂水平〔9〕。本研究結(jié)果說明苦參堿能夠?qū)β跃凭愿螕p傷大鼠血脂代謝進(jìn)行調(diào)節(jié)。

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〔2015-06-11修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

〔中圖分類號(hào)〕R57

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)08-1838-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.08.021

通訊作者：周鳳華 (1986-)，女，博士，講師，主要從事代謝性疾病的中醫(yī)藥防治方面的研究。

1贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院設(shè)備科

2南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)教研室

第一作者：李小花(1976-)，女，碩士，主要從事基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、藥理學(xué)方面的研究。