血清CD40、CD40L和基質(zhì)金屬蛋白酶-9水平與頸動脈內(nèi)膜中層厚度的相關(guān)性

馬清峰　李建軍　熊　亮　張　靜

(華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬梨園醫(yī)院檢驗科，湖北　武漢　430076)

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血清CD40、CD40L和基質(zhì)金屬蛋白酶-9水平與頸動脈內(nèi)膜中層厚度的相關(guān)性

馬清峰李建軍熊亮張靜

(華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬梨園醫(yī)院檢驗科，湖北武漢430076)

〔摘要〕目的觀察頸動脈粥樣硬化(CAS)患者頸動脈內(nèi)膜中層厚度(IMT)、白細胞分化抗原40及其配體(CD40/CD40L)和基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)變化，探討上述指標之間的關(guān)系。方法選擇CAS患者94例，其中IMT增厚的有34例，頸動脈斑塊形成的有60例；健康體檢者20例(IMT正常組)。采用頸動脈超聲檢測實驗組和對照組IMT，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測兩組血清CD40、CD40L和MMP-9水平。結(jié)果隨著IMT的增厚，血清CD40、CD40L、MMP-9水平明顯升高(P<0.05)；有不穩(wěn)定斑塊的CAS患者IMT及血清CD40、CD40L、MMP-9水平較穩(wěn)定斑塊患者明顯升高，不穩(wěn)定斑塊CAS患者腦梗死(CI)發(fā)病率高于斑塊穩(wěn)定組(P均<0.05)。結(jié)論血清CD40、CD40L、MMP-9能促進CAS的形成和增厚，MMP-9能增加斑塊的不穩(wěn)定性，導(dǎo)致CI的發(fā)生，監(jiān)測血清CD40、CD40L、MMP-9水平，能用來預(yù)測CAS患者的IMT、斑塊的穩(wěn)定性和疾病的預(yù)后。

〔關(guān)鍵詞〕頸動脈粥樣硬化；頸動脈內(nèi)膜中層厚度；白細胞分化抗原40及其配體；基質(zhì)金屬蛋白酶9

頸動脈內(nèi)膜中層厚度(IMT)是目前公認的判定頸動脈粥樣硬化(CAS)的指標〔1〕，在臨床中，CAS是發(fā)生腦梗死(CI)的重要病因之一。在CAS發(fā)生、發(fā)展的過程中，有許多生物學指標參與其中，本試驗通過檢測血清白細胞分化抗原40及其配體(CD40/CD40L)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)水平的變化，探討CD40/CD40L、MMP-9與頸動脈斑塊的關(guān)系。

1資料與方法

1.1研究對象隨機抽取2012年4～12月在我院神經(jīng)內(nèi)科住院的老年CAS患者94例，年齡55～70歲；患者CI的診斷均符合2010年中國急性缺血性腦卒中診治指南的診斷標準〔2〕。同時隨機選取20例健康體檢者作為對照組。

1.2儀器與方法IMT的測量：采用日本東芝Aplio XG(SSA-790A)全數(shù)字化彩色多普勒超聲診斷儀進行檢測，入選病例和健康體檢者均由經(jīng)驗豐富的超聲醫(yī)師進行頸動脈超聲測量。測量部位：取頸總動脈遠端2.0 cm處、頸總動脈分叉處、頸內(nèi)動脈及頸外動脈近端1.0 cm處等部位，多次測量IMT厚度，取均值。CAS的診斷標準：以2003年歐洲高血壓治療指南中IMT>0.9 mm確定為頸動脈粥樣硬化的診斷指標。兩組均采集空腹無抗凝血標本，離心分離血清后-20℃冰凍保存，以待同一批次待測。血清CD40、CD40L、MMP-9濃度的檢測采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法，試劑購自武漢博士德公司。

1.3分組方案根據(jù)IMT將94例CAS患者分成兩組，其中IMT增厚組(0.9 mm

1.4 統(tǒng)計學方法應(yīng)用SPSS16.0行方差分析及χ2檢驗。

2結(jié)果

2.1不同IMT的患者血清CD40、CD40L、MMP-9水平比較隨著患者IMT的增厚，血清CD40、CD40L、MMP-9水平逐漸升高，IMT增厚組明顯高于對照組，斑塊形成組顯著高于IMT增厚組，各組間均有顯著性差異(P<0.05)，見表1。

2.2頸動脈斑塊的穩(wěn)定性與血清CD40、CD40L、MMP-9水平的關(guān)系 頸動脈斑塊穩(wěn)定組與無斑塊組相比，血清CD40、CD40L、MMP-9水平明顯增高(P<0.01)；頸動脈斑塊不穩(wěn)定組與穩(wěn)定組相比，血清CD40、CD40L、MMP-9的水平顯著增高(P<0.01)，見表2。

2.3頸動脈斑塊與CI相關(guān)性頸動脈無斑塊組CI發(fā)生率(3/34)遠低于頸動脈斑塊組(21/60，P<0.01)；頸動脈斑塊不穩(wěn)定組CI發(fā)生率(11/21)高于頸動脈斑塊穩(wěn)定組的發(fā)生率(10/39，P<0.05)。

表1不同IMT患者血清CD40、CD40L、MMP-9水平比較(x±s)

組別nCD40(pg/ml)CD40L(pg/ml)MMP-9(ng/ml)對照組2065.9±13.757.1±9.24.83±0.65IMT增厚組3497.0±15.91)83.0±14.71)5.55±0.821)斑塊形成組60208.4±21.82)172.3±16.32)10.15±1.742)

與對照組比較：1)P<0.05；與IMT增厚組比較：2)P<0.05

表2不同頸動脈斑塊組血清CD40、CD40L、MMP-9水平比較(x±s)

組別nIMT(mm)CD40(pg/ml)CD40L(pg/ml)MMP-9(ng/ml)頸動脈無斑塊組540.7±0.2179.2±19.168.2±17.15.09±0.73頸動脈斑塊穩(wěn)定組391.54±0.291)163.8±20.11)131.5±16.51)7.48±0.591)頸動脈斑塊不穩(wěn)定組212.59±0.472)279.9±34.92)227.9±19.12)12.83±0.792)

與頸動脈無斑塊組比較：1)P<0.05；與頸動脈斑塊穩(wěn)定組比較：2)P<0.05

3討論

IMT是CAS進程中形態(tài)學上的最早證據(jù)，而且IMT與CAS嚴重程度密切相關(guān)，已成為公認的衡量頸動脈粥樣硬化的指標，可以用來預(yù)測發(fā)生心腦血管疾病的危險性和嚴重程度〔3〕，但IMT的測量受人為因素的影響較大。CD40屬于腫瘤壞死因了受體超家族成員〔4〕，正常動脈內(nèi)皮細胞僅表達少量CD40，但當動脈內(nèi)膜增厚時，內(nèi)膜中的內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞和單核巨噬細胞表面表達CD40和CD40L的量明顯增高，CD40L能與這些細胞表面的CD40結(jié)合，結(jié)合后的CD40-CD40L系統(tǒng)能激活內(nèi)皮細胞、血管平滑肌細胞及單核巨噬細胞，誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞和巨噬細胞表達黏附分子、釋放趨化因子及促進MMP-9的表達〔3,5〕等，產(chǎn)生有利于凝血及血栓形成的局部微環(huán)境。本文結(jié)果顯示，隨著IMT的增厚，血清CD40、CD40L、MMP-9水平不斷增高，增高的水平與IMT的厚度成正相關(guān)；由此可見，檢測血清CD40、CD40L、MMP-9水平可以用來衡量病患頸動脈內(nèi)膜增厚的程度，再結(jié)合超聲檢查的結(jié)果，為IMT的判斷增加可信度，為醫(yī)生預(yù)測CAS患者疾病的嚴重程度提供可靠依據(jù)。

CAS的發(fā)生和發(fā)展，是多因素參與的、血管受損后的慢性炎性反應(yīng)過程，許多炎性細胞及其分泌的細胞因子均參與了CAS的產(chǎn)生和進展〔6〕。CD40-CD40L系統(tǒng)是免疫和炎癥反應(yīng)中重要的信號傳導(dǎo)系統(tǒng)，能夠刺激斑塊中內(nèi)皮細胞MMP-9的表達，在CAS發(fā)病中起重要作用〔5,7〕；同時，伴隨斑塊形成的是細胞外基質(zhì)的重構(gòu)，在細胞外基質(zhì)重構(gòu)的過程中發(fā)生一系列炎癥反應(yīng)，炎癥反應(yīng)又進一步增加MMP-9的表達〔8〕。MMP-9屬于鋅離子依賴性蛋白酶超家族的一員，是一種能夠降解細胞外基質(zhì)的蛋白水解酶，它通過消化粥樣斑塊纖維帽成分破壞斑塊結(jié)構(gòu)，造成斑塊不穩(wěn)定性增加，加速斑塊破裂，達到降解細胞外基質(zhì)的作用；動脈斑塊MMP-9蛋白的表達上調(diào)，導(dǎo)致維持斑塊內(nèi)MMP-9活性降低的金屬蛋白酶組織抑制劑的平衡被打破，動脈粥樣硬化斑塊趨向不穩(wěn)定〔9〕。由本文結(jié)果可知，有斑塊病變者血清CD40、CD40L、MMP-9水平明顯高于無斑塊的健康對照者，隨著斑塊的不穩(wěn)定性的增加，血清CD40、CD40L、MMP-9的水平進一步升高，說明血清CD40、CD40L、MMP-9水平在作為判斷斑塊厚度指標的同時，MMP-9還可作為反映斑塊穩(wěn)定性的分子生物學指標。

不穩(wěn)定斑塊指易于形成血栓的斑塊，不穩(wěn)定斑塊由表面覆蓋薄薄的纖維帽的脂質(zhì)構(gòu)成，有大量包含單核巨噬細胞在內(nèi)的炎癥細胞浸潤，平滑肌細胞少〔10〕；頸動脈粥樣斑塊的破裂、脫落是導(dǎo)致CI的主要病因，不穩(wěn)定斑塊的存在大大增加了不測事件發(fā)生的概率〔11〕。由本文結(jié)果可知，在有不穩(wěn)定斑塊的CAS患者中，CI的發(fā)病率遠高于CAS斑塊穩(wěn)定的患者，MMP-9在預(yù)測斑塊穩(wěn)定性的同時，同樣可以用來預(yù)測CI的發(fā)生概率。

綜上，血清CD40、CD40L、MMP-9水平可以作為判斷IMT的敏感生物學指標，CD40-CD40L系統(tǒng)和頸動脈斑塊發(fā)生發(fā)展過程中的炎癥反應(yīng)可以上調(diào)MMP-9水平，導(dǎo)致CAS患者斑塊不穩(wěn)定性的增加，斑塊不穩(wěn)定性的增加導(dǎo)致更易發(fā)生CI；由此可見，血清CD40、CD40L、MMP-9水平還可作為判斷斑塊穩(wěn)定性、預(yù)測CAS患者繼發(fā)CI概率的指標之一。

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〔2013-12-09修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

〔中圖分類號〕R446.62

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)08-1947-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.08.074

通訊作者：李建軍(1962-)，女，副主任護師，主要從事心腦血管疾病相關(guān)研究。

基金項目：湖北省自然科學基金資助項目(2011CDB369)

第一作者：馬清峰(1978-)，男，碩士，主管技師，主要從事心腦血管疾病相關(guān)研究。