清絡飲治療類風濕性關(guān)節(jié)炎的實驗研究

魏托　李艷

(1.浦口區(qū)中醫(yī)院　江蘇 南京　211800； 2.皖南醫(yī)學院弋磯山醫(yī)院 中醫(yī)科　安徽 蕪湖　241000)

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清絡飲治療類風濕性關(guān)節(jié)炎的實驗研究

魏托1李艷2

(1.浦口區(qū)中醫(yī)院江蘇 南京211800； 2.皖南醫(yī)學院弋磯山醫(yī)院 中醫(yī)科安徽 蕪湖241000)

【摘要】目的觀察清絡飲對完全弗氏佐劑(CFA)類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)大鼠模型的一般狀態(tài)及炎癥指標的影響。方法選擇普通雌性大鼠30只，隨機分為空白對照組、模型對照組、治療組，各10只。采用RA造模成功1周后，灌注清絡飲湯藥，1次/d，共21 d。①記錄每組大鼠腳掌的疼痛、腫脹指數(shù)；②21天后斷尾采血，用ELISA法做IL-1定量測定。最后用方差分析和SNK-q檢驗分析組間差異。結(jié)果和模型對照組比較，治療組關(guān)節(jié)腫脹度下降速度明顯，痛閾值明顯提高(P<0.05)；治療組CFA大鼠血清IL-1水平低于模型對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論清絡飲可以改善RA的部分臨床癥狀。

【關(guān)鍵詞】類風濕關(guān)節(jié)炎；完全弗氏佐劑；清絡飲

類風濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種慢性、炎性、系統(tǒng)性、多發(fā)性的自身免疫性疾病，關(guān)節(jié)逐漸受到破壞，嚴重影響患者的工作和生活[1]。臨床上尚無特效藥物，所用藥物多為非甾體類抗炎藥、激素、慢作用藥物等。由于西藥在風濕病的治療方面存在副作用較大、副作用發(fā)生率較高的缺點，因此廣大醫(yī)務工作者把目光投向了中醫(yī)藥。清絡飲是在長期臨床實踐基礎上總結(jié)出來的，由苦參、黃柏、青風藤等組成，組方中主要是寒性藥物，起到清熱除濕、通絡開痹的作用，是治療RA濕熱阻絡的代表方劑[2]。本實驗通過觀察清絡飲對CFA大鼠腳掌疼痛、腫脹指數(shù)及血清IL-1水平的影響，研究清絡飲對RA的治療效果，為臨床提供新的思路與方藥。

1資料與方法

1.1主要試劑和儀器完全弗氏佐劑(complete Freund’s adjuvant，CFA)試劑盒購自上海晶天生物有限公司，規(guī)格：25 mg；LI-1試劑盒(批號：20091010)購自合肥志宏生物有限公司，規(guī)格：98T；YLS-6A智能熱板儀購自山東省醫(yī)學科學院設備站。

1.2實驗動物及分組選取30只普通雌性大鼠，隨機分為空白對照組、模型對照組、治療組，各10只，對每組大鼠進行編號。

1.3造模方法除空白對照組外，各組每只大鼠均于右后足趾皮內(nèi)注射CFA 0.1 ml進行致炎，并于致炎前1 h，致炎后3、12、18 h各測大鼠左右后足趾容積1次，以后每天測1次，以觀察其足趾關(guān)節(jié)腫脹程度。在第7天左右產(chǎn)生變態(tài)反應炎癥，即模型形成。

1.4給藥空白對照組與模型對照組造模后不給任何受試因素，治療組第7天開始灌胃，成分為清絡飲溶液，1次/d，每次1 ml/100 g，連續(xù)21 d。

1.5指標的觀察足趾容積的測量：用玻璃容器法測量大鼠足趾容積，取一20 ml量筒，內(nèi)徑2 cm，用記號筆在每個大鼠后足踝關(guān)節(jié)周圍做一標記，將其待測足趾慢慢浸入量筒液體內(nèi)，提出足趾可見量筒內(nèi)液面下降，其下降容積即為足趾容積，用1 ml移液管慢慢將液體注入量筒內(nèi)，移液管的讀數(shù)即大鼠的足趾容積。計算公式：足趾腫脹度(ml)=實際測量值(用藥后測定值)-初次測量值(第1次用藥前測定值)。

痛閾值的檢查：將30只大鼠(動物經(jīng)過預熱，熱板耐受時間為5～30 s)置于熱板上，溫度(55±5)℃，分別記錄8、15、21 d用藥前、后的大鼠舔足時間，連續(xù)測2次，取平均值為大鼠耐受時間，即痛閾值。

血清學檢測：灌胃第21天對30只大鼠斷尾取血各4 ml，ELISA法檢測血清IL-1水平，操作按試劑盒說明書進行。

2結(jié)果

2.1關(guān)節(jié)腫脹度與空白對照組比較，模型組、治療組大鼠經(jīng)CFA致敏后第8天右后足已明顯腫脹(P<0.05)。灌胃治療第8天起，模型組和治療組足趾腫脹度減輕，且治療組下降速度明顯快于模型組(P<0.05)。見表1。

表1　3組大鼠右足趾腫脹程度變化情況比較±s，ml)

注：與空白對照組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05。

2.2關(guān)節(jié)痛閾值與空白對照組比較，模型組、治療組大鼠經(jīng)CFA致敏后痛閾值明顯降低(P<0.05)。治療組給藥第8天起痛閾值逐漸升高，第15天后較模型組的痛閾值已有明顯提高(P<0.05)。見表2。

表2　3組大鼠熱板實驗痛閾值變化情況比較±s，s)

注：與空白對照組比較，cP<0.05；與模型組比較，dP<0.05。

2.3ELISA檢測結(jié)果灌胃第21天后空白對照組、模型組和治療組血清IL-1水平分別為(24.21±2.15)、(54.37±3.24)、(31.24±2.82)pg/ml。治療組及模型組大鼠血清IL-1水平均高于空白對照組(P<0.05)。治療組血清IL-1水平低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

3討論

RA是一種全身性自身免疫病，其特征為慢性侵蝕性關(guān)節(jié)炎。一般情況下，RA患者是由于滑膜組織炎癥造成關(guān)節(jié)軟骨和骨質(zhì)破壞，最終導致關(guān)節(jié)畸形。如果不能得到正規(guī)治療，約75%的患者會在3 a內(nèi)出現(xiàn)殘廢[2]。中醫(yī)藥在治療RA方面有其獨特的優(yōu)勢，但長期以來缺乏相應的藥效學研究，限制了其在臨床中的廣泛應用。開展藥效學研究選擇合適的動物模型很關(guān)鍵。大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎是一種以細胞免疫功能紊亂為主的免疫炎癥模型，其與人RA非常相似，因此CFA制備的佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠是研究RA的理想動物模型[3]。另外，活動期RA患者的關(guān)節(jié)滑液中促炎癥性細胞因子，如白細胞介素IL-1的水平顯著升高[4]。因此，本實驗通過觀察CFA大鼠足趾損害后IL-1等指標的變化，探討以清熱祛濕為主的清絡飲治療RA的作用，為該藥的臨床應用提供實驗依據(jù)。

清絡飲是中醫(yī)清法的代表，該方中含有苦參、黃柏、青風藤等藥物?！侗静菥V目》指出，苦參、黃柏之苦寒皆能補腎，蓋取其苦燥濕，寒除熱也；熱生風，濕生蟲，故又能治風殺蟲。該書還認為清風藤為散風寒濕痹之藥也，能舒筋活血，正骨利髓，久服常服，大建奇功?，F(xiàn)代藥理學研究表明，氧化苦參堿肌注能明顯對抗巴豆油、角叉菜膠(大鼠)和冰醋酸(小鼠)誘發(fā)的急性炎癥；黃柏及其主要成分小檗堿等則已被發(fā)現(xiàn)具有免疫抑制等作用；青風藤的提純物青藤堿、青風藤堿等均具有抗炎、鎮(zhèn)痛、解痙等作用[5]。該方以清熱除濕、通絡開痹為目的，發(fā)揮抑制免疫反應、抗炎、鎮(zhèn)痛等作用。本課題通過對CFA型大鼠的實驗學研究也表明，清絡飲對大鼠的足趾腫脹度、疼痛耐受指數(shù)都有明顯改善。通過ELISA法檢測大鼠血IL-1水平可以發(fā)現(xiàn)，清絡飲對CFA型大鼠血IL-1水平有明顯的抑制作用，從而阻斷炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，發(fā)揮治療RA的作用。

然而，治療RA的中藥藥理研究均從現(xiàn)代病理藥理機制研究中所涉及的病理因素、病理效應著手，觀察藥物的干預作用。至于如何從中醫(yī)學角度出發(fā)，將宏觀與微觀相結(jié)合，探求適合RA的中藥藥理研究方法，手法尚單一。中藥成分復雜，迄今多數(shù)中藥的活性成分及有效成分尚難以確認，使其科學性難以得到認可；體外實驗手段不足，雖已有中藥血清藥理方法，但尚未得到廣泛認可；對中醫(yī)的“證”的病理模型難以定性和建立；中藥方劑的藥效往往是多種成分共同作用的結(jié)果，一種有效成分的藥動學并不能完全代表整個方劑的藥動學。因此，由多種中藥組成的清絡飲有效成分及作用還有待進一步研究。

參考文獻

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[2]van der Heijde D,Tanaka Y,Fleischmann R,et al.Tofacitinib (CP-690,550) in patients with rheumatoid arthritis receiving methotrexate: twelve-month data from a twenty-four-month phase III randomized radiographic study[J].Arthr Rheumat,2013,65(3):559-570.

[3]繆成貴,周國梁,秦梅頌,等.禹州漏蘆總黃酮對類風濕關(guān)節(jié)炎大鼠治療機制研究[J].浙江大學學報(醫(yī)學版),2015,44(1):43-48.

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Experimental study on Qingluoyin in the treatment of rheumatoid arthritis

Wei Tuo1, Li Yan2

(1.PukouDistrictChineseMedicineHospital,Nanjing210000,China;2.YijishanHospital,WannanMedicalCollege,Wuhu241000,China)

【Abstract】ObjectiveTo investigate the effects of Qingluoyin on the general status and inflammation index on complete Freund’s adjuvant (CFA) rat model of rheumatoid arthritis (RA). Methods30 female rats were selected and randomly separated into normal control group, model group, treatment group. After a week, the rats in treatment group were fed with the Qingluoyin principle. The pain and swell indexs of the rat feet were recorded and the levels of LI-1 were measured. At last, the data were analyzed by analysis of variance and SNK-q test. ResultsCompared with model group, swelling degree was lower and the pain threshold was higher (P<0.05). The level of LI-1 of the rats in treatment group was lower than the model group, and the different was statistically significant (P<0.05). ConclusionQingluoyin is an effective prescription in relieving symptoms caused by rheumatism.

【Key words】rheumatoid arthritis;complete Freund’s adjuvant;Qinglongyin

(收稿日期：2015-10-06)

【中圖分類號】R 965.2

doi:10.3969/j.issn.1004-437X.2016.04.007