THBS1在高原不同胃粘膜病變中表達(dá)的臨床分析*

青海大學(xué)附屬醫(yī)院(西寧 810016)

賀春蘭　張夢(mèng)蘭△　王海燕▲　賀菊香▲　茍笑丹　 李菊英#

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·短篇論著·

THBS1在高原不同胃粘膜病變中表達(dá)的臨床分析*

青海大學(xué)附屬醫(yī)院(西寧 810016)

賀春蘭張夢(mèng)蘭△王海燕▲賀菊香▲茍笑丹 李菊英#

主題詞胃粘膜凝血酶敏感蛋白類@高原地區(qū)

凝血酶敏感蛋白(Thrombspondin THBS)，是一種糖蛋白，在正常情況下由成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌。THBS1參與了多種生理及病理活動(dòng)，在炎癥、腫瘤及血管形成過(guò)程中起者重要作用，為了探討在高原低氧環(huán)境下不同胃粘膜組織病變與THBS1基因的關(guān)系。本課題研究了青海高原地區(qū)慢性胃炎患者、胃癌患者和正常胃粘膜中THBS1的表達(dá)情況,報(bào)道如下。

對(duì)象與方法

1對(duì)象收集青海大學(xué)附屬醫(yī)院消化科就診和住院世居青海病人的血樣及胃粘膜組織：研究對(duì)象于清晨空腹時(shí)抽取肘靜脈血 5 ml， 并在室溫下凝集 20 min 后， 3000× g 進(jìn)行離心 20 min 收集上清。 并在 - 80 ℃ 冰箱中保存，備用。胃炎32例，男20例，女12例，平均年齡51.36±14.92；胃癌30例，男性16例，女性14例，胃癌均經(jīng)病理確診。平均年齡55.80±9.14；門診健康體檢沒有胃部疾患10例，男2例，女8例。平均年齡34.80±11.45。病人未經(jīng)任何治療。

2方法

2．1主要試劑：人血小板反應(yīng)蛋白(THBS1)ELISAKIT,采用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中THBS1水平。試劑購(gòu)自天根公司。

2．2檢測(cè)方法：血清中THBS1水平檢測(cè)采用ELISA法，按照ELISA使用說(shuō)明書進(jìn)行操作。

2．3免疫組化SP法檢測(cè) ： 免疫組化一抗試劑購(gòu)自a&b公司。將收集的不同胃粘膜組織制成蠟塊，切成5μm放入60℃ 烘箱， 烘烤1 h， 全自動(dòng)染色機(jī)中脫蠟， 純水清洗后檸檬酸抗原修復(fù)， 放入內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑進(jìn)行阻斷， 加入THBS1 一抗(1∶50) 過(guò)夜， 加入兔二抗，DAB 顯色， 蘇木精復(fù)染后封片。 使用PBS液作為一抗的陰性對(duì)照 。 最終染色的評(píng)估根據(jù)染色范圍由兩名完全不知道切片信息的病理醫(yī)師分別進(jìn)行， 范圍評(píng)分劃分標(biāo)準(zhǔn)為: >25%為陰性，<26%為陽(yáng)性。

結(jié)果

1THBS1在不同胃粘膜病變患者血清中表達(dá)顯示正常組、胃炎組、胃癌組THBS1表達(dá)的水平分別為0.44±0.10、0.62±0.15、0.47±0.13。胃炎組比正常組表達(dá)高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；胃炎組比胃癌組表達(dá)高，差異有顯著性(P<0.05)，正常組與胃癌組相比較,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2免疫組化結(jié)果THBS1在不同胃粘膜病變組織中的表達(dá)結(jié)果顯示：THBS1主要在胃粘膜細(xì)胞胞漿著色，呈棕色顆粒。正常組、胃粘膜炎癥性病變、胃癌組中陽(yáng)性表達(dá)分別為40%、62.5%、33.3%。胃炎組和胃癌組比較P<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。胃炎組與正常組相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。但胃癌組與正常組比,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

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討論

青海高寒缺氧，屬于高海拔地區(qū)。高原地區(qū)慢性胃炎高發(fā)[1]，胃癌也比內(nèi)陸其他地區(qū)高發(fā)。胃癌的發(fā)生被認(rèn)為是從胃黏膜炎癥開始的一個(gè)逐漸累積的過(guò)程。組織學(xué)上大都遵循慢性淺表性胃炎--萎縮性胃炎--腸上皮化生 —異型增生 —癌變這一多步驟 、 逐漸發(fā)展的過(guò)程逐步出現(xiàn)癌前病變 , 最后演變形成胃癌[2]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)ELISA的實(shí)驗(yàn)方法對(duì)10例正常胃粘膜、32例慢性胃炎、30例胃癌患者血清中進(jìn)行檢測(cè)，正常對(duì)照組、慢性胃炎組、胃癌組都能檢測(cè)出，但胃炎組表達(dá)水平高于胃癌組，也高于正常組，胃癌組與正常組無(wú)明顯差異，說(shuō)明THBS1在慢性胃炎血清中通過(guò)定量檢測(cè)比胃癌組和正常組高。通過(guò)免疫組化試驗(yàn)方法對(duì)不同胃粘膜組織檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)正常對(duì)照組、慢性胃炎組、胃癌組都有陽(yáng)性表達(dá)，但慢性胃炎組陽(yáng)性表達(dá)高于胃癌組，也高于正常組。說(shuō)明THBS1在慢性胃炎組織中通過(guò)定性檢測(cè)高于其他組。兩種檢測(cè)方法檢測(cè)的結(jié)果一致。實(shí)驗(yàn)組中胃潰瘍4例，慢性淺表性胃炎2例，粘膜慢性炎5例，慢性萎縮性胃炎21例，胃癌30例。由于胃粘膜的炎癥性中其它類型例數(shù)較少，所以都?xì)w類到慢性胃炎，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)明顯的影響。

凝血酶敏感蛋白1(THBS1) 是一個(gè)分子量為450kD 的同源三聚體基質(zhì)糖蛋白,在正常情況下體內(nèi)表達(dá)很低，但可通過(guò)激活的血小板a顆粒釋放，使其局部濃度快速提高[3]。THBS1結(jié)構(gòu)復(fù)雜，可與多配體蛋白聚糖、硫酸乙酞肝素糖蛋白、整合素等結(jié)合，調(diào)節(jié)細(xì)胞接觸、游走、增殖及血小板聚集；重復(fù)的備解素序列可通過(guò)與CD36、 整合素等結(jié)合，抑制內(nèi)皮細(xì)胞增值、誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、抑制血管新生[4]。低氧所致THBS1的合成增多，在低氧性肺血管重建和肺動(dòng)脈高壓的發(fā)病過(guò)程中起一定的作用[5]。

本實(shí)驗(yàn)中胃炎患者的血液和胃粘膜組織中THBS1蛋白表達(dá)比正常高，可能在缺氧條件下THBS1分泌增加，THBS1可活化TGF-β1。活化TGF-β1通過(guò)激活P38MAKP通路誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞的趨化; TGF-β1還可通過(guò)P38MAKP的激活， 使淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞向炎癥區(qū)滲出[6]引起炎癥反應(yīng)。炎癥時(shí)由于在炎癥介質(zhì)參與下引起炎細(xì)胞滲出，從而使HBS1分泌增加，與文獻(xiàn)報(bào)道的一致[7]。THBS1又可能作為炎癥介質(zhì)參與炎癥反應(yīng)。

THBS1引起胃炎的生物學(xué)行為及機(jī)理還不清。近本研究中可能病例數(shù)少而有一定的局限性，在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中從分子學(xué)方面進(jìn)行檢測(cè)，來(lái)提供更可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]楊桂英.熊元志.青海地區(qū)慢性萎縮性胃炎流行病學(xué)特點(diǎn)研究[J].中國(guó)消化內(nèi)鏡雜志2008，2(3)：23-28.

[2]Shi YY，Ding SG． Progress in the etiology andpathogenesis of gastric cancer[J].Chin J Clinicians ( Electron Ed) ( 中華臨床醫(yī)師雜志 電子版) ， 2013，27(19) : 7941-7944.

[3]宋唽.低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠肺內(nèi)凝血酶敏感蛋白-1 的表達(dá)白-1(TSP- l)的結(jié)構(gòu)與功能研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)，2005，2(1)：45-48.

[4]楊艷娟，程德云，鄭西衛(wèi),等.低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠肺內(nèi)凝血酶敏感蛋白-1的表達(dá)[J].四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2012，43(1)：19-23.

[5]米永杰，李健，劉衛(wèi)華.凝血酶敏感蛋白-1 活化 T GF-β1 在糖尿病腎病中作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].西部醫(yī)學(xué)，2011，35(5)：903-806.

[6]尚穎，趙立元，楊景坤.炎性細(xì)胞與胃癌的關(guān)系[J].中國(guó)藥科大學(xué),2015，46(1)：123-128.

[7]繆玉蘭，夏照帆，王廣慶，等.膿毒癥肝損傷中凝血酶敏感蛋白 -l 的變化及意義[J].中國(guó)急救醫(yī)學(xué),2012，36(4)：326-329.

(收稿：2015-09-15)

#通訊作者:青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院

【中圖分類號(hào)】R573

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.04.061

*青海省科技廳自然基金資助項(xiàng)目(2012-ky-720)

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