siRNA靶向沉默Lipocalin-2基因下調MMP-9表達對降低人肺癌A549細胞的侵襲、遷移能力的影響

馬小剛　楊曉光　任敬　趙崢

siRNA靶向沉默Lipocalin-2基因下調MMP-9表達對降低人肺癌A549細胞的侵襲、遷移能力的影響

馬小剛楊曉光任敬趙崢

【摘要】目的利用針對Lipocalin-2的小干擾RNA(siRNA)，觀察Lipocalin-2基因沉默對人肺癌A549細胞MMP-9表達及侵襲、遷移能力的影響。方法采用Real-time PCR和Western blot檢測Lipocalin-2在3種肺癌細胞株(A549、NCI-H661、NCI-H446)及正常人支氣管上皮細胞(HBE)的表達情況。設計并構建靶向Lipocalin-2的siRNA轉染A549細胞，采用Real-time PCR和Western blot檢測轉染效率及Lipocalin-2基因沉默對MMP-9 mRNA和蛋白表達的影響。Transwell小室檢測細胞侵襲能力。細胞劃痕實驗檢測細胞遷移能力。結果Lipocalin-2 mRNA和蛋白在肺癌A549、NCI-H661、NCI-H446細胞株中的表達水平均顯著高于HBE細胞，差異有統計學意義(P＜0.05)。siRNA-Lipocalin-2轉染組Lipocalin-2 mRNA和蛋白表達水平與陰性對照組和空載體對照組比較，差異有統計學意義(P＜0.05); siRNA-Lipocalin-2轉染組MMP-9 mRNA和蛋白表達水平與陰性對照組和空載體對照組比較，差異有統計學意義(P＜0.05); siRNA-Lipocalin-2轉染組穿膜細胞數、平均遷移距離與陰性對照組和空載體對照組比較，差異有統計學意義(P＜0.05)。結論Lipocalin-2基因沉默通過下調MMP-9表達降低了人肺癌A549細胞的侵襲和遷移能力。

【關鍵詞】肺癌; Lipocalin-2; MMP-9; A549細胞;侵襲;遷移

肺癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，發病率和致死率極高，遠處轉移早，患者預后差。脂質運載蛋白-2 (Lipocalin-2)是載脂蛋白家族成員之一，在調節脂代謝、滲透壓及抗炎方面發揮重要作用。近年來，國外研究發現Lipocalin-2與乳腺癌等惡性腫瘤發病密切相關，在腫瘤細胞凋亡、黏附、浸潤轉移等過程中扮演重要角色［1］。基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)因其降解細胞外基質和基膜的作用，參與了腫瘤的侵襲轉移過程［2］。本課題組前期研究發現Lipocalin-2、MMP-9在肺癌患者血清中異常高表達，提示二者可能參與肺癌發生發展、侵襲轉移過程［3］。……