斜脈暗羅葉甾體類成分研究*

劉冰晶，熊　躍，曾　靖

(1.贛南醫學院藥學院；2.江西省腦血管藥理重點實驗室，江西　贛州　341000；3.南昌市中西醫結合醫院藥劑科，江西　南昌　330003)

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斜脈暗羅葉甾體類成分研究*

劉冰晶1,2，熊躍3，曾靖1,2

(1.贛南醫學院藥學院；2.江西省腦血管藥理重點實驗室，江西贛州341000；3.南昌市中西醫結合醫院藥劑科，江西南昌330003)

摘要：目的：研究斜脈暗羅葉的化學成分。方法：95%乙醇提取斜脈暗羅葉，制備總浸膏，硅膠柱色譜分離其成分，理化性質和波譜法鑒定其結構。結果：分離得到3種甾體化合物，分別為β-谷甾醇(1)、β-胡蘿卜甙(2)、豆甾-4-烯-3-酮(3)。結論：所有化合物均首次從斜脈暗羅葉中分離得到。

關鍵詞：斜脈暗羅；化學成分；甾體

斜脈暗羅(P.plagioneura)是我國特有藥用植物，分布于廣東、廣西、海南[1]。暗羅屬植物全球約有200多種，我國有17種[2]。斜脈暗羅在民間廣泛用作治療。本課題組在篩選海南一系列藥用植物抗腫瘤活性中發現，斜脈暗羅的乙醇提取物在200 μg·mL-1時對人類肺腺癌細胞(SPCA-1)有較好的抑制作用。國內外學者對暗羅屬植物進行過化學成分研究，得到倍半萜類[3]、二萜類[4-5]、生物堿類[6-10]等化合物。本文為了進一步研究斜脈暗羅葉部活性成分，我們對斜脈暗羅葉化學成分進行了系統研究。通過部位分離、反復柱色譜(硅膠、C18反相硅膠、Sephadex LH-20)等手段,從斜脈暗羅葉二氯甲烷部位分離得到3種單體化合物，根據理化性質和波譜數據，鑒定這些化合物為：β-谷甾醇(1)、β-胡蘿卜甙(2)、豆甾-4-烯-3-酮(3)，所有化合物均首次從該植物葉中分離得到。

1儀器與試劑

核磁共振儀(Brucker AV400 MHz)，高效液相色譜儀(安捷倫)，XT5-100型顯微熔點測定儀(溫度未校正)，4001型電子天平，紫外線分析暗箱(YOZO-KX)，柱色譜硅膠(200～300目，青島海洋化工廠)，硅膠H 硅膠、GF254(青島海洋化工廠)，C18反相硅膠(日本YMC公司)，葡聚糖LH-20凝膠(Amersham Blosclences公司)，其余試劑均為分析純及色譜純。

2藥材

斜脈暗羅于2008年7月采自海南省昌江縣霸王嶺自然保護區，原植物由海南師范大學生物系鐘瓊芯教授鑒定為PolyalthiaplagioneuraDiels，標本現藏于海南師范大學熱帶藥用植物化學教育部重點實驗室。

3提取分離

斜脈暗羅葉4.2 kg(干重)用15 L質量分數95%的酒精回流三次，合并提取液減壓回收溶劑得乙醇浸膏約2 L，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取至回收溶劑后蒸餾瓶壁幾乎無物質為止，分別得石油醚部位63 g、二氯甲烷部位135 g，乙酸乙酯部位72 g、正丁醇部位44 g。

取二氯甲烷部位與150 g硅膠拌樣，經硅膠柱層析,以石油醚-乙酸乙酯(100%，90%，80%～80%，90%，100%)梯度脫洗，每500 mL為一餾分，根據薄層層析色譜追蹤，合并相同組分，得A-O十五個餾分。A流分經反復硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯(15∶1)洗脫，得化合物1(30 mg)；B流分經反復硅膠柱色譜，石油醚-氯仿(4∶1)洗脫，得化合物 2(20 mg)和3(15 mg)。

4結構鑒定

化合物1：白色針狀晶體，難溶于乙醇，不溶于甲醇、水，易溶于氯仿、乙酸乙酯，用薄層色譜分析，在紫外燈254 nm和365 nm均不顯熒光，I2熏顯色呈黃棕色，5%硫酸乙醇溶液顯色為紫紅色，該化合物性質與已知化合物β-谷甾醇二者的物化性質相近，故可初步判斷該化合物為β-谷甾醇，取該化合物與β-谷甾醇標準品進行薄層色譜展開對照，二者的比移值相同。取該化合物與β-谷甾醇標準品混合后測熔點，混合熔點不下降，故確定為β-谷甾醇(β-Sitosterol)。

化合物2：白色粉末，m.p. 268～270 ℃。難溶于氯仿、甲醇等溶劑，易溶于吡啶。Molish反應為陽性，與蘿卜苷標準品薄層層析Rf值一致，二者混合熔點不下降，故確定為β-胡蘿卜苷(β-Daucosterol)。

化合物3：白色長針狀結晶(丙酮)；溶于石油醚、氯仿、丙酮，不溶于甲醇；254 nm紫外燈下有紫紅色熒光。與濃硫酸顯紫色。推測為甾體或三萜類的化合物；從整個1H-NMR譜的峰形以及δ：5.74(1H,s)的烯氫質子信號峰，說明該物質為甾體類化合物，且僅含有一組雙鍵；13C-NMR譜的δ：199.5的羰基碳信號、171.5和123.6的雙鍵碳信號進一步證明此甾體含有α, β不飽和酮結構；13C-NMR譜顯示共有29個碳，表明該化合物為含29個碳原子的酮羰基甾烯類化合物；1H-NMR譜的高場處還給出了6個CH3，分別為：δ：1.20(3H,s),0.93(3H,d,J=6.5 Hz),0.86(3H,t,J=7.5 Hz),0.84(3H,d,J=8.0 Hz),0.82(3H,d,J=7.0 Hz)，0.73(3H,s)。該化合物的光譜數據與文獻[11-12]報道數據一致，故確定該化合物為豆甾-4-烯-3-酮。

5結論

本文首次對斜脈(PolyalthiaplagioneuraDiels)葉化學成分進行了系統研究，從斜脈暗羅葉的乙醇提取物的二氯甲烷部位分離得到3種甾體化合物，這3種甾體化合物均是首次從斜脈暗羅葉中分離出來。

致謝：本實驗核磁共振均由上海鑫飾化工科技有限公司劉鑫劍代為測試，在此列出，以表謝意。

參考文獻：

[1]吳德鄰.海南及廣東沿海島嶼植物名錄[M].北京：科學出版社,1994:9-10.

[2]中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志[M].第30卷.第2分冊.北京:科學出版社,1979:10.

[3]CM Hasan，MA Hossain，MA Rashid.Clerodane Diterpenoids fromPolyalthiaIongifoliavar. Pendulla[J]. Biochemical Systematics & Ecology,1995,23(3):331-332.

[4]A Jossang，M Leboeuf，A Cavé，et al.Alcalo?des des Annonacees, L: Alcalo?des DePolyalthiacauliflora[J].J Nat Prod，1984,47:504-513.

[5]YC Wu，CY Duh，SK Wang，et al.Two new natural azafluorene alkaloids and a cytotoxic aporphine alkaloid from Polyalthia longifloria[J].J Nat Prod，1990,53(5):1327-1331.

[6]鄭祥慈，楊仁洲，徐任生，等.斜脈暗羅素甲—具有C5-OH的單四氫呋喃環型番荔枝內酯[J].植物學報，1994,36(7):557-560.

[7]Bingjing Liu,LanJian,Guangying Chen.Chemical Constituents and in Vitro anticancer Cytotoxic Activities ofPolyalthiaplagioneura[J].Chemistry of Natural Compounds，2014,49(6):1172-1174.

[8]Bingjing Liu,Lin Wang,Guangying Chen,et al. Isolation and Crystal Structure of Marcanine A fromPolyalthiaplagioneura[J].Molecules，2010,15：6349-6356.

[9]Bingjing Liu,Guangying Chen,Changchun Cen, et al.1-(5-Hydroxy-7-methoxy-2,2-dimethyl-2H-chromen-6-yl)ethan-1-one[J].Acta Crystallogr Sect E Struct Rep Online，2010，66(Pt 6):o1441.

[10]劉冰晶，陳光英，簡藍，等.斜脈暗羅莖化學成分研究[J].中草藥，2011，42(7):1264-1266.

[11]Helene Guinaudeau.Aporphinoid AlkaloidsⅢ[J].J natural products,1983,46(6):761-835.

[12]Jongbunp rasertVichien,Bavovada,Rapepol.Chemical Constituents of Fissistigm a polyanthoides[J].Science Asia,1999,25(1):31-33.

Steroidal Composition Research on Leaves ofPolyalthiaPlagioneura

LIUBing-Jing1,2,XIONGYue3,ZENGJing1,2

(1.SchoolofPharmacy,GannanMedicalUniversity;2.JiangxiProvincicalKeyLabofCerebrovascularpharmacology,Ganzhou,Jiangxi341000；3.Dept.ofPharmacy,NanchangIntegratedHospitalofChineseandWesternMedicine,Nanchang,Jiangxi330003)

Abstract:Objective：To isolate and identify the components from the leaves of P. plagioneura.Methods：The compounds were isolated and purified by silica gel column, Sephadex LH-20,and C18chromatography. Their chemical structures were elucidated on the basis of physicochemical properties and spectral data.Results:Three steroidal compounds were isolated and identified as: β-sitosterol (1), β-daucosterol (2), Stigmast-4-en-3-one(3). Conclusion:All compounds are isolated from the leaves of P. plagioneura for the first time.

Key words:P. plagioneura;chemical constituents; steroidal

*基金項目：江西省科技廳項目(20142BBG70113);江西省衛生廳項目(GJJ13678)

通訊作者：曾靖，男，教授，主要從事中藥藥理學研究。E-mail:zengjing61@hotmail.com

中圖分類號：R285.5

文獻標志碼：A

文章編號：1001-5779(2016)02-0187-03

DOI:10.3969/j.issn.1001-5779.2016.02.006

(收稿日期：2015-11-30)(責任編輯：敖慧斌)