核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白質(zhì)1在胃癌中的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系

胥 穎，董丹丹，李 科，李芳華

(四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院病理科，四川 成都 610072)

核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白質(zhì)1在胃癌中的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系

胥 穎，董丹丹，李 科，李芳華

(四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院病理科，四川 成都 610072)

目的 檢測胃癌組織中核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白質(zhì)1(special AT-rich sequence-binding protein 1，SATB-1)與臨床病理特征的相關(guān)性。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)Envision法檢測97例胃癌患者和20例癌旁組織中SATB1蛋白的表達，應(yīng)用Spearman法分析其與臨床病例特征的相關(guān)性。結(jié)果 胃癌組織中SATB1蛋白表達陽性率為60%，高于癌旁組織10%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P< 0.05)。SATB1蛋白在胃癌中的陽性表達率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，腫瘤浸潤深度和臨床TNM分期密切相關(guān)(P< 0.05)，與年齡、性別、腫塊大小無顯著相關(guān)性(P> 0.05)。結(jié)論 SATB1在胃癌組織中的高表達預(yù)示胃癌惡性程度高，臨床分期晚，可能存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預(yù)后不良，因此檢測SATB1表達可作為臨床篩選胃癌高危轉(zhuǎn)移者、制定治療方案和判斷預(yù)后的一個新指標。

胃癌；核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白質(zhì)1；免疫組織化學(xué)

胃癌是消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率和病死率均很高，在我國其病死率居各類癌癥病死率的第一位，在世界范圍內(nèi)，胃癌的病死率居各類惡性腫瘤的第二位。多數(shù)胃癌確診時已屬于晚期，發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移是造成死亡的主要原因[1]。探討胃癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移機制，尋找可能的預(yù)測指標，對監(jiān)測胃癌病程進展，轉(zhuǎn)移潛能及預(yù)后估計具有重要的價值。本研究采用免疫組織化學(xué)檢測胃癌及毗鄰癌旁胃粘膜組織中核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1(special AT-rich sequence-binding protein 1，SATB1)，并分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集四川省人民醫(yī)院病理科2015年1月至6月間手術(shù)切除并病理診斷明確為胃腺癌的97例患者，其中男78例，女19例，年齡31～81歲，中位年齡63歲；中高分化44例，低分化53例；腫瘤未侵及漿膜者20例，侵及漿膜或漿膜外者77例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移72例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例。根據(jù)美國腫瘤-淋巴結(jié)-轉(zhuǎn)移(tumor node metastasis，TNM)分期標準，Ⅰ期+Ⅱ期22例，Ⅲ期+Ⅳ期75例。術(shù)前均未行放射治療或化學(xué)治療。另選取距離腫瘤5 cm以上正常胃黏膜組織20例作為對照。

1.2 試劑 SATB1(產(chǎn)品編號：BIO66710兔抗人多克隆抗體)購自英國beacomBio公司，Envision法免疫組織化學(xué)試劑盒及DAB顯色試劑盒均購自DAKO公司。

1.3 免疫組織化學(xué)染色 取經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋的存檔蠟塊，4 μm連續(xù)切片，56 ℃烤片2 h后經(jīng)二甲苯連續(xù)脫蠟3次，每次10 min，100%，90%，85%乙醇脫二甲苯各5 min，水洗后進行Envision免疫組織化學(xué)染色。具體步驟如下：①水洗，pH6.0檸檬酸鹽修復(fù)液高壓修復(fù)3 min；②水洗，3%H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶10 min；③水洗，Harris蘇木素復(fù)染10 s；④PBS緩沖液洗片，滴加SATB1(工作濃度1∶3000)一抗置于4 ℃冰箱孵育過夜；⑤次日用PBS緩沖液洗片，滴加DAKO公司Envision(K5007)二抗，37 ℃孵育30 min；⑥PBS緩沖液洗片，DAB顯色，光鏡下控制顯色時間，入水終止反應(yīng)；⑦常規(guī)脫水，封片。染色步驟嚴格按照要求進行，用PBS代替一抗作為陰性對照，用已知陽性切片作為陽性對照。

1.4 判定標準 SATB1主要定位于細胞核，出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達，SATB1判讀采用二級計分法。按陽性細胞的比例計分：陽性細胞0～5%為0分，5%～10%為1分，10%～50%為2分，>50%為3分。按染色強度計分：無色為0分，淡黃色為弱染色計1分，黃色或深黃色為中度染色計2分，黃褐色或棕褐色為強染色計3分。將上述兩項得分結(jié)果相乘：<3分為陰性(-)，≥3分為陽性(+)。均在不了解臨床資料的情況下閱片。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料比較采用卡方檢驗，相關(guān)性用Spearman相關(guān)分析，P< 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SATB1在胃癌及癌旁組織中的表達 免疫組化檢測顯示，SATB1陽性表達均位于細胞核，呈棕黃色顆粒。SATB1在胃癌組織的陽性表達率為60%(59/97)，癌旁正常組織中呈極弱陽性或陰性，陽性表達率僅為10%(2/20)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P< 0.05)，見圖1、圖2。

圖1 SATB1在胃腺癌中的表達(Envision法) a：陽性(×100)； b：陽性(×40)；c：陰性(×100)

圖2 SATB1在癌旁正常胃黏膜組織中陰性表達，Envision法(×100)

2.2 胃癌SATB1的表達與臨床病理參數(shù)特征的關(guān)系 SATB1表達與患者的年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度等無相關(guān)性(P> 0.05)。浸及漿膜或漿膜外組和未及漿膜組的陽性表達率分別為66.2%和40%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.585，P=0.032)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的陽性表達率分別為68%和40%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.130，P=0.013)；TNM分期Ⅲ+Ⅳ期和Ⅰ+Ⅱ期的陽性表達率分別為66.7%和40%(χ2=4.736，，P=0.030)。SATB1在胃癌中的陽性表達與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理TNM分期密切相關(guān)(P< 0.05)，見表1。

表1 97例胃癌SATB1表達與臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

SATB1 是一種組織特異性表達的核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白，在胸腺細胞中顯著表達。SATB1位于3號染色體3p23區(qū)，全長763個氨基酸，包含2個CUT序列，可以通過形成類似盤狀同源區(qū)域的二聚體，以非常高的親和力與核基質(zhì)區(qū)相結(jié)合，進而調(diào)節(jié)DNA結(jié)合能力和胞核內(nèi)亞結(jié)構(gòu)的定位，并招募染色質(zhì)重建因子，通過影響染色質(zhì)高級結(jié)構(gòu)從而實現(xiàn)對目標基因表達的時空特異性調(diào)控，從而進一步調(diào)節(jié)細胞分化，凋亡，腫瘤生長與轉(zhuǎn)移。

Han等在2008年首次報道了SATB1與腫瘤的關(guān)系，他們檢測到24種乳腺上皮細胞，僅在侵襲性的乳腺細胞中檢測到了SATB1 mRNA和蛋白的表達。研究發(fā)現(xiàn)，SATB1能對涉及腫瘤發(fā)生的1000多種基因的表達進行調(diào)控，包括控制黏附性，細胞周期，細胞外基質(zhì)，信號通路，細胞間連接和凋亡的基因等，因而被稱為“基因組織者”。SATB1能上調(diào)腫瘤生長基因的表達，同時下調(diào)抑癌基因[2]。在接下來的幾年中，已經(jīng)有報道SATB1在各種實體腫瘤中過表達與預(yù)后及臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，比如結(jié)腸癌的研究中，發(fā)現(xiàn)SATB1的高表達與結(jié)直腸癌的TNM分期，腫瘤浸潤深度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良等因素密切相關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)都提示SATB1在結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展起重要作用[3～5]，此外還有報道稱在肝癌[6]，子宮內(nèi)膜癌[7]，卵巢癌[8]，前列腺癌等的異常高表達與這些腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

本實驗研究采用免疫組化檢測了97例胃癌組織中SATB1的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)59例胃癌SATB1陽性(60%)，而在20例癌旁正常胃黏膜組織中SATB1陽性率僅為10%。胃癌組織中SATB1的高表達與腫瘤病理分期以及浸潤深度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈密切相關(guān)，提示SATB1在胃癌晚期發(fā)生浸潤及轉(zhuǎn)移的過程中起到了重要作用，胃癌SATB1的表達與腫瘤的發(fā)生，發(fā)展進程，預(yù)后密切相關(guān)，提示SATB1可能會成為預(yù)測早期胃癌的惡性程度和潛在轉(zhuǎn)移傾向的新指標，用于患者腫瘤的治療方案和預(yù)后評估提供依據(jù)，具有十分重要的臨床意義。

[1] 劉科. 核基質(zhì)結(jié)合蛋白SATB1對胃癌生物學(xué)行為的影響及其機制研究[D].華中科技大學(xué)，2010.

[2] 譚曉虹，岑洪，郭保平，等. 乳腺癌組織中特異AT序列結(jié)合蛋白1的表達及臨床意義[J]. 實用醫(yī)學(xué)雜志，2012，28(1)：83-85.

[3] 陳翠敏，江丹，丁彥青，等. 結(jié)腸癌組織中SATB1的表達及其臨床意義[J]. 診斷病理學(xué)雜志，2012，19(2)：140-143.

[4] 畢洪鐘，王偉，胡敏敏，等. 特異性核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1在消化系腫瘤中的研究進展[J]. 世界華人消化雜志，2014，22(1)：67-73.

[5] 高超，朱艷卿，劉穎，等. SATB1基因在結(jié)直腸癌中的表達及其臨床意義[J]. 腫瘤防治研究，2013，40(2)：159-163.

[6] 李光輝，楊定華，李湘竑，等. SATB1在不同侵襲潛能肝癌細胞株的表達[J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2012，32(7)：986-990，994.

[7] 楊興杰，張杰，牛娜，等. SATB1與ER、PR在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達及臨床意義[J]. 實用醫(yī)學(xué)雜志，2012，28(6)6：948-950.

[8] 趙曉蘭，王平. SATB1、BRMS1在書卵巢漿液性腺癌中的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系[J]. 四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2011，42(1)1：82-85，105.

SATB1 expression in gastric cancer and relationship between the expression and clinicopathologic characteristics

XU Ying，DONG Dan-dan，LI Ke，LI Fang-hua

(Department of Pathology，Sichuan Academy of Medical Science & Sichuan Provincial People’s Hospital，Chengdu 610072，China)

Objective To investigate the expression of nuclear matrix combining area binding protein 1(SATB -1)in gastric cancer tissues and the relationship between the expression and clinicopathologic characteristics.Methods The expression of SATB-1 in 97 samples of gastric cancer tissue and 20 samples of tissue adjacent to carcinoma were measured by using Envision method of immunohistochemistry.Spearman analysis was used to explore the relationship between the expression and clinicopathologic characteristics.Results The positive rate of SATB1 protein expression in the cancer tissue was 60% that was higher than that of tissue adjacent to carcinoma (10%)(P< 0.05).The positive rate of SATB1 expression in gastric cancer was significantly associated with lymph node metastasis，tumor infiltration depth and clinical TNM stage (P< 0.05)，but not associated with age，gender and tumor size (P> 0.05).Conclusion The high expression of SATB1 in gastric cancer tissue indicates the high gastric malignant degree and late clinical stage with a potential lymph node metastasis and poor prognosis.Therefore，detection of SATB1 expression can be used as a novel marker for screening the risk of gastric cancer metastasis，making the treatment plan and predicting the prognosis.

Gastric cancer； SATB1；Immunohistochemistry

R361

A

1672-6170(2016)02-0060-03

2015-11-06；

2016-01-06)