甲狀腺轉錄因子及Napsin A在肺腺癌轉移至漿膜腔積液脫落細胞中的表達

曾 濤，翁永彬，楊宗梅

(四川省自貢市中醫醫院病理科，四川 自貢 643000)

甲狀腺轉錄因子及Napsin A在肺腺癌轉移至漿膜腔積液脫落細胞中的表達

曾 濤，翁永彬，楊宗梅

(四川省自貢市中醫醫院病理科，四川 自貢 643000)

目的 探討甲狀腺轉錄因子(thyroid transcription factor-1，TTF-1)及Napsin A在肺腺癌漿膜腔積液脫落細胞學中的診斷價值。方法 收集胸水及心包積液標本67例，經離心沉淀制作成細胞石蠟塊，經HE切片篩檢出肺腺癌轉移42例、間皮細胞反應性增生16例及乳腺癌轉移9例。采用免疫組織化學SP法標記三組細胞中TTF-1、Napsin A的表達。結果 TTF-1在肺腺癌中表達38例(90.48%)，在增生間皮細胞及乳腺癌細胞中無表達；Napsin A在肺腺癌中表達35例(83.33%)，在增生間皮細胞中表達僅1例(6.25%)，肺腺癌中TTF及Napsin A的表達明顯高于其他兩組，差異有統計學意義(P< 0.001)。結論 TTF-1和Napsin A是兩項重要的肺腺癌標記物，對鑒別漿膜腔積液脫落細胞學的組織來源具有重要價值。

肺腺癌；脫落細胞學；細胞塊；免疫組化

近年來，肺腺癌的發病呈明顯上升趨勢并年輕化，且早期多無特異癥狀，部分患者以胸腔或/和心包腔積液為首發癥狀，需行積液脫落細胞檢查以明確診斷，但在轉移的早期，積液中的惡性細胞成分較少，與脫落的增生漿膜腔間皮細胞混合在一起，以常規脫落細胞學及普通HE染色很難鑒別診斷。細胞塊是將收集的脫落細胞做成石蠟塊，具有組織學的諸多優點[1]，但因缺乏腫瘤特有的間質背景成分，又難以憑間質血管、神經間的關系協助診斷良、惡性。為此，本研究在制作細胞石蠟塊的基礎上，借助組織起源特異性因子—甲狀腺轉錄因子(thyroid transcription factor-1，TTF-1)及Napsin A對胸水細胞塊中的異型細胞成分進行標記，以提高診斷準確率，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 收集2012年1月至2015年6月我院送檢的胸腔積液54例及心包積液13例，全部病例均有臨床、病理(手術病理診斷史、細胞異型性、免疫細胞化學表達模式結果)、輔助檢查(胸水生化酶指標、CT影像資料)等完整的診斷資料。

1.2 方法

1.2.1 細胞塊制備方法 將胸水或心包積液標本靜置4小時后，適量傾去上部標本、保留其底部胸水約20 ml，搖勻后取10 ml標本于一次性軟塑料試管中，離心機2000 r/min離心5 min，棄去上清液(血性胸水需加入適量50%的乙醇溶解紅細胞)。若離心后沉淀標本較少，可重復加樣離心一次。輕輕傾去上清液，沿沉淀物邊緣上2 mm處用剪刀剪去沉淀物外多余的試管，剩余試管底部及標本直接用拭鏡紙包裹于塑料包埋盒，固定于中性福爾馬林中，然后放入脫水機中進行固定、脫水、浸臘，包埋。并行常規HE染色。

1.2.2 免疫細胞化學方法 步驟同免疫組織化學SP法、DAB染色。抗原修復方法用pH為6.0的檸檬酸鹽緩沖液高溫高壓修復。每次均以已知陽性肺腺癌組織標本做陽性對照、TBS代替一抗做陰性對照。所有一抗、試劑盒均由福州邁新生物技術開發有限公司提供。

1.3 結果判讀 TTF-1位于胞核呈棕黃色顆粒狀為陽性(胞質非特異著染者視為污染，重新做一遍后仍無改善者，判為陰性)，Napsin A位于胞質呈棕黃色顆粒狀為陽性。

1.4 統計學方法 用SPSS 17.0統計軟件進行數據分析。組間比較采用χ2檢驗。P< 0.05為差異有統計意義。

2 結果

2.1 HE染色結果 可見大量異型細胞，表現為胞核著濃染、核形不規整，排列呈巢團或彌漫成片者共67例，依據病史資料、影像資料、輔助檢查資料提示，其中肺腺癌42例，乳腺癌9例，反應性間皮增生16例。

圖1 肺腺癌患者心包積液細胞塊中TTF-1、Napsin A的表達 a：異型細胞核表達TTF-1；b：異型細胞質表達Napsin A (IHC DAB染色 ×100)

2.2 免疫細胞化學染色 免疫細胞化學檢測發現，肺腺癌的TTF-1陽性表達率高達90.48%，特異性達100%；Napsin A的陽性表達率達83.33%，特異性達97.6%，見表1、表2。

表1 肺腺癌及反應性增生間皮細胞、乳腺癌中免疫細胞化學表達結果

表2 肺腺癌及反應性增生間皮細胞表達模式 (n)

3 討論

由于肺腺癌多起源于肺泡，常發生在周圍肺組織，故早期臨床多無癥狀，往往因出現轉移特別是胸腔轉移引起積液時方就診，且一旦肺腺癌出現漿膜腔惡性積液時，常因肺壓迫性萎縮、肺實變，普通X射線甚至CT也常難以發現病灶，即使在CT引導或超聲引導下也難以穿刺到準確病灶并獲取到有價值的標本；而此時，胸腔及心包腔的積液穿刺卻相對容易得多，可不借助任何影像引導即可獲得標本進行脫落細胞學檢查。雖然脫落細胞學檢查方法因為設備簡單，操作簡便，患者痛苦少而易于接受；然而由于癌轉移的初期患者積液中的惡性細胞成分較少，與脫落的漿膜腔間皮細胞混合在一起，從常規脫落細胞學及普通HE染色很難鑒別診斷。

TTF-1是一種分子量為38～40 KDa的核蛋白，在胎兒肺組織和成人Ⅱ型肺泡上皮、甲狀腺濾泡上皮中存在，而在Ⅰ型肺泡上皮中不表達。由于甲狀腺來源的癌超過95%的類型為乳頭狀癌，其預后良好，幾乎不發生胸腔及心包腔轉移，故在鑒別是否為肺源性腺癌中TTF-1具有理論上的特異性。由于TTF-1陽性定位在胞核，故在免疫細胞化學的定位分析上具有技術上的特異性。事實上，我們的實驗結論顯示陽性均為胞核，即使有極少量的異型細胞，也能很好的表達TTF-1(如圖1)。

Napsin 是一種胃酶樣天冬氨酸蛋白酶，有兩種密切相關的Napsin A和Napsin B，其中Napsin A是一種分子量接近38 KDa的單鏈蛋白，在人類的肺和腎內高表達。因此在肺的轉移性腺癌的組織起源上有重要的應用價值，有報道Napsin A和TTF-1在轉移性肺腺癌中表達率分別達87.0%和81.5%[2]，雖然二者間差異沒有統計學意義，但Napsin A的評分高于TTF-1(P< 0.001)，且在肺原發性腺癌中表達亦如此。而我們的資料分別達83.33%和90.48%，且特異性均較高：Napsin A的表達特異性達97.6%，TTF-1的特異性達100%。當然也有的通過組織芯片方法研究了1674例含鱗癌及小細胞癌在內的大宗病例，而發現Napsin A比TTF-1在鑒別原發性肺癌中更敏感且特異[3]，說明與癌的類型有關。但該報道表達率也均較高，研究表明在肺腺癌與肺鱗癌的鑒別中也有重要價值，說明該兩項標記在肺源性癌的脫落細胞學中也有重要的病理診斷價值。同時研究中發現，有2個病例TTF-1陰性表達，而Napsin A陽性，由此可見聯合應用二者可提高陽性檢出率。有報道[4]用雙染法同時標記胸水中肺腺癌細胞，發現TTF-1和Napsin A在83%的肺腺癌病例中同時表達TTF-1及Napsin A，4%的病例單表達TTF-1，9%的病例單表達Napsin A。也支持我們的實驗。

但需注意的是，TTF-1和Napsin A在肺外組織起源性腫瘤中亦有報道，比如結腸、子宮內膜、宮頸和卵巢等[3，5，6]，因此診斷上最好聯合應用二者并且必須結合臨床病史、尤其是繼往手術病理診斷史、影像學(超聲及CT、MRI、X射線)甚至是重要的生化指標(腫瘤酶譜)，這樣的診斷才更可靠。同時，我們在今后的研究中要積累非肺源性腫瘤的免疫組化表型以提高對該標記的全面應用性認識。

[1] 劉福川，王小兵，陳守菊，等.胸腹水細胞塊的免疫細胞化學研究[J].中國腫瘤，2004，13(1)：42-44.

[2] Kim WH，Chung DH，Kim MY，et al.Napsin A is a useful marker for metastatic adenocarcinoma of pulmonary origin[J].Histopathology，2014，65(2)：195-206.

[3] Turner BM，Cagle PT，Sainz IM，et al.NapsinA，a new marker for lung adenocarcinoma，is complementary and more sensitive and specific than thyroid transcription factor 1 in the differential diagnosis of primary pulmonary carcinoma：Evaluation of 1674 cases by tissue micorarray[J].Archives of pathology﹠laboratory medicine，2012，136(2)：163-171.

[4] Liu L，Cohen C，Siddiqui MT.Thyroid transcription factor 1 and napsin A double staining in lung adenocarcinoma in plerual fluid[J].Acta Cytologica：The Journal of clinical cytology and cytopathology，2012，56(4)：425-430.

[5] Fan L，Li F，Memahon L，et al.Diagnostic utility of PAX8，TTF-1 and NapsinA for discriminating metastatic carcinoma from primary adenocrcinoma of the lung[J].Biotechnic and Histochemistry，2012：87(8)：30-34.

[6] Jennifer J，Findeis Hosey，Qi yang，et al.Compbination of NapsinA and TTF-1 immunohistochemistry helps in differential primary lung adenocarcinoma from metastatic carcinoma in the lung[J].Applied immunohistochemistry and molecular morphology：AIMM，2011，9(4)：313-317.

The expression of TTF-1 and Napsin A in metastased tumor cells in pleural effusions of pulmonary adenocarcinoma

ZENG Tao，WENG Yong-bin，YANG Zong-mei

(Department of Pathology，Zigong City Hospital of Traditional Chinese Medical，Zigong 643000，China)

Objective To investigate the diagnostic value of thyroid transcription factor-1(TTF-1) and Napsin A for identification of pulmonary adenocarcinoma cells in pleural effusions.Methods The samples of pleural effusions and pericardial effusions were collected from 67 patients and made to be paraffin cytoblocks after precipitation by centrifugation.From these samples，42 cases were identified as lung adenocarcinoma，16 cases as mesothelial cell reactive hyperplasia and 9 cases as breast adenocarcinoma by using HE staining.Then，expressions of TTF-1 and Napsin A in the three types of diseases were examined with immunohistochemical SP method.Results TTF-1 expression was positive in 38 cases with pulmonary adenocarcinoma but negative in cases with hyperplasia mesothelial cells and breast adenocarcinomas.Napsin A expression was positive in 35 cases with pulmonary adenocarcinoma and one case with hyperplasia of mesothelial cells.The differences were all significant (P< 0.001).Conclusion These data suggest that TTF-1 and Napsin A are two important markers for the pulmonary adenocarcinoma.They are very usefully to identify the cells in pleural effusions.

Pulmonary adenocarcinoma； Exfoliative cytology； Paraffin cytoblock； Immunohistochemistry

R446.8； R734.2

A

1672-6170(2016)03-0062-03

2015-09-15；

2016-02-26)