不同干燥方法對虎杖主要有效成分含量的影響

余志芳，歐泉，文靜，羅婷婷，馬云桐

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不同干燥方法對虎杖主要有效成分含量的影響

余志芳，歐泉，文靜，羅婷婷，馬云桐

［摘要］目的：比較不同干燥方法對虎杖有效成分含量的影響，為虎杖的產地初加工提供科學依據。方法：將采挖的鮮虎杖隨機分組，分別采用曬干、陰干、50℃低溫干燥、高溫殺青干燥、真空冷凍干燥方法進行干燥，以HPLC法測定虎杖中虎杖苷、白藜蘆醇、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黃素、大黃素甲醚的含量為評價指標，比較5種方法處理的虎杖藥材質量優劣。結果：不同干燥處理方法后有效成分含量差異較大，其中曬干處理使有效成分損失最多，低溫干燥、冷凍干燥、自然陰干有利于虎杖有效成分的保留。結論：從經濟成本和成分保留及實用性綜合分析，陰干更宜于虎杖的干燥處理。

［關鍵詞］虎杖；干燥方法；有效成分；HPLC法

［作者單位］成 都中醫藥大學藥學院 中藥材標準化教育部重點實驗室四川省中藥資源系統研究與開發利用重點實驗室省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 611137

Tel:18380191389 Email:zhengnlyzf@163.com

中藥材虎杖是蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.的干燥根及根莖，其作為傳統大宗藥材具有利濕退黃、清熱解毒、散瘀止痛、止咳化痰之功效［1］。臨床用于濕熱黃疸、風濕痹痛、經閉、水火燙傷、跌撲損傷、癰腫瘡毒，咳嗽痰多［1］。現代研究表明其所含活性成分較多，主要分為二苯乙烯類和蒽醌類化合物，二苯乙烯類為虎杖苷和白藜蘆醇，蒽醌類化合物主要以大黃素、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷，大黃素甲醚、大黃酚等為代表［2-4］。藥理研究表明虎杖苷具有擴張血管、降血脂、保肝作用［5，6］，虎杖苷注射液是中國第一個受美國FDA臨床審批的天然藥物，其苷元白藜蘆醇具有抗炎、抗腫瘤、保肝作用［7，9］，尤其白藜蘆醇在抗艾滋病方面具有顯著活性［11］，使得白藜蘆醇受國際醫藥行業的關注。而以大黃素、大黃素甲醚、大黃苷為代表的蒽醌類化合物等在抗菌、抗炎、抗腫瘤及其調節免疫力等方面具有顯著活性［12，13］。

中藥材干燥效果直接影響產品的使用、質量和外觀［14］。朱俊霖等［15］采用6種干燥方法處理黃芩，發現不同干燥方法對黃芩中黃芩苷和黃芩素的含量具有較大影響。檀偉靜等［16］采用4種干燥方法對梔子進行處理，結果不同處理組梔子苷等3種有效成分含量變化較大。但目前還未見干燥處理對虎杖成分含量變化的影響，本文對比了冷凍干燥、高溫殺青干燥、低溫（50℃）干燥、自然曬干、自然陰干5種方法，以虎杖5種有效成分含量的變化為指標，系統評價干燥方法對虎杖藥材品質的影響，為虎杖的產地初加工標準提供數據參考，以期避免藥材在加工過程中品質降低。

1　材料與試劑

1.1 試驗材料

實驗材料取自四川省巴中市虎杖種植基地，經成都中醫藥大學馬云桐教授鑒定為蓼科虎杖屬植物虎杖（Reynoutria japonica Houtt.），采集鮮品后切片備用。

1.2 主要儀器與試藥

Labconco型凍干機（美國）；電熱鼓風干燥機（上海將任試驗設備有限公司）；KQ5200E型醫用超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；高效液相分析系統配雙波長檢測器和在線脫氣系統（日本島津公司）； 色譜柱Agilent Zorbax XDB-C18（4.6×250mm，5μm）（安捷倫公司）；BT-457型電子天平（深圳市博途電子科技公司）；QUINTIX224-1CN型電子分析天平（北京sartorius天平有限公司）。

大黃素（批號：131009）、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷（以下稱大黃苷，批號：141209）、大黃素甲醚（批號：140820）、白藜蘆醇（批號：150122）、虎杖苷（140828）對照品（以上均購自成都克洛瑪生物科技有限公司，純度均≥98%）；無水乙醇（成都科龍化學試劑廠）；甲醇、乙腈（美國賽默飛世爾有限公司）

2　方法與結果

2.1 干燥處理方法

將藥材鮮品切片后隨機分為5份，每份約1.0 Kg，攤開于托盤中，分別冷凍干燥、高溫殺青干燥（105 ℃殺青2 h后50 ℃鼓風直至干燥）、低溫干燥（50 ℃鼓風干燥）、自然曬干、自然陰干；樣品干燥期間每隔12 h稱重，分析其失水狀況；藥材干燥至兩次稱重 ＜3.0 g，粉碎過40目篩備用。

2.2 含水量分析

取虎杖樣品按“2.1”項下方法處理不同處理組樣品干燥過程重量變化見圖1，各處理組干燥所需時間及各組性狀差異見表1。樣品粉粹后對其進行水分測定，水分測定參照2010版《中國藥典》采用烘干法：稱2 .0 g藥材粉末平攤于恒重過的扁形稱量瓶中，105 ℃干燥 8 h，移至干燥器中冷卻后精密稱定，根據減失重量計算其含水量，測量結果見表1。

圖1 干燥過程樣品重量變化

由圖1可知冷凍干燥組、高溫殺青干燥組、低溫干燥組在12 h內迅速失水，失水量分別為42.7%、44.2%、41.8%，12 h后失水量變化不明顯。由于0 ～12 h是夜間干燥，陰干組及曬干組失水量均不大，分別僅為5.3%和5.5%，12-24h白天期間該兩組失水量迅速增加分別為38.1%、24.3%，由結果可知冷凍干燥、高溫殺青、低溫干燥處理虎杖失水最快，而曬干和陰干失水較慢。

表1 不同干燥處理藥材干燥時間和含水量

由表1可知，冷凍干燥處理虎杖只需36 h即可達到干燥狀態，而自然陰干時間最長為96h。各組藥材水分均符合藥典規定不得高于12%標準，其中陰干組水分含量最高。藥材斷面色澤顯示冷凍干燥藥材顏色最淺，其次是50℃低溫干燥組，高溫殺青干燥組和陰干組藥材顏色棕黃色，曬干組藥材顏色最深，接近棕褐色。

2.3 對照品制備

分別稱取虎杖苷4.87 mg 、白藜蘆醇0.08 mg、大黃苷0.75 mg 、大黃素0.23 mg 、大黃素甲醚0.38 mg 至10 mL容量瓶，以甲醇為溶劑定容，稀釋2倍后配成混合對照品溶液備用。

2.4 樣品溶液制備

稱取0.2 g藥材粉末，加入60%乙醇25 mL，超聲提取30 min，過濾后定容至50 mL容量瓶備用，進樣前過0.45 μm濾膜。

2.5 色譜條件

Agilent Zorbax XDB-C18柱（4.6×250 mm，5μm）；流動相乙腈-0.5%乙酸水；洗脫梯度（以乙腈濃度表示）：0-10 min，15%；10～18 min，15% ～ 25%；18～35 min，25%～35%；35～48 min，35%～70%；48～65 min，70%～78%，流速1.0 mL/min；柱溫30 ℃；檢測波長290 nm；進樣體積10μL按照此色譜條件分析得到的樣品和對照品色譜圖見圖2。

圖2 虎杖樣品中5種有效成分的HPLC圖譜

2.6 方法學考察

2.6.1 標準曲線繪制 取混合對照品溶液分別進樣2μL，4μL，6 μL，8μL，12μL，15μL，分別計算各化合物濃度與色譜峰面積之間的回歸方程，線性關系良好，結果見表2。

表2 虎杖中5種成分的回歸方程

2.6.2 精密度試驗 取同一虎杖樣品，按照“2.2.2”項下制備供試品，按照“2.5”項下色譜方法連續進樣5次，測定虎杖苷、白藜蘆醇、大黃苷、大黃素、大黃素甲醚的峰面積，各化合物峰面積的RSD（n=6）分別為0.1%，0.3%，0.2%，0.4%，2.0%。

2.6.3 重復性考察 稱取5份虎杖樣品，按照“2.2.2”項下制備樣品，按“2.2.3”項下色譜方法分析得到樣品中虎杖苷、白藜蘆醇、大黃苷、大黃素、大黃素甲醚的含量分別為23.763、0.441、7.941、0.596 、0.507mg/g，RSD（n=5）分別為2.0 %、1.3%、1.3%、1.7%、2.0%。

2.6.4 穩定性考察 取同一虎杖樣品，按照“2.2.2”項下制備供試品，按“2.2.3”項下色譜方法每隔6 h進樣，計算上述5種化合物色譜峰面積RSD，各化合物RSD（n=6）分別為0.1%、1.1%、1.1 %、1.8%、2.1%，表明各化合物在36 h內穩定性良好。

2.6.5 加樣回收試驗 分別稱取虎杖苷10.010mg、白藜蘆醇0.312mg、大黃苷3.280mg、大黃素0.360mg、大黃素甲醚0.250mg至100ml容量瓶中，60%乙醇定容，得到混合對照液。根據“2.6.3”重復性實驗得到樣品中5種有效成分的含量，取樣品6份，分別為0.10865、0.10216、0.12279、0.10645、0.10195、0.12265 mg，各份樣品分別加上述混合對照品10mL，再加60%乙醇15mL，按“2.4”項下方法制備供試品，經“2.2.3”色譜分析方法得到各樣品色譜峰，根據峰面積與回歸方程計算回收率得到虎杖苷、白藜蘆醇、大黃苷、大黃素、大黃素甲醚回收率分別為96.7 %、95.2%、98.1%、98.2%、101.0%。

2.7 樣品測定

將虎杖鮮品不同處理得到的干燥品按照“2.2.2”項下制備樣品，按“2.2.3”項下色譜條件下測定，以干燥品計，鮮品和干燥品中5種化學成分的含量見表3。

表3 不同干燥處理后虎杖5種活性成分含量

如表3，與鮮品對比，經高溫殺青干燥、低溫干燥、陰干、曬干組處理后虎杖苷的含量依次下降了2.2%、5.3%、11.2%、18.5%，而白藜蘆醇比鮮品升高了33.9%、218.8%、238.4%、150.9%，而冷凍干燥和高溫殺青干燥對虎杖苷和白藜蘆醇的含量變化不大。 大黃苷數據顯示經5組干燥方法處理，除低溫干燥組和陰干組含量分別降低了15.6%和11.0%外，其他各組變化不大。相應的低溫干燥組和陰干組大黃素的含量分別升高了47.8%和55.1%，而高溫殺青組大黃素下降了22.2%。同樣，高溫殺青組中大黃素甲醚含量降低量也最大，達到58.3%，其他組對大黃素甲醚含量影響卻存在不規則變化。

3　討論

本研究中，經高溫殺青干燥、低溫干燥、陰干、曬干處理后虎杖苷含量較鮮品依次下降，相應的白藜蘆醇含量卻顯著增高，這可能是這幾種干燥方法使虎杖苷降解為其苷元白藜蘆醇，而曬干組虎杖苷的降低量最大，白藜蘆醇卻只是適當上升，這可能是與曬干環境下光照引起已轉化的白藜蘆醇又降解有關，這與周麗［17］研究表明0.5 h日光光照即可引起白藜蘆醇的降解相吻合，因此曬干不可作為虎杖的干燥方法。同樣的，低溫干燥組與陰干組中大黃苷含量較鮮品降低，相應的大黃素含量較鮮品上升，可能是大黃苷降解為其苷元大黃素的原因。高溫殺青干燥組大黃素和大黃素甲醚含量較鮮品均降低，可能是蒽醌類化合物酚羥基較多，高溫下更易氧化［18］。從有效成分保留方面評價5種干燥方法的優劣為：低溫干燥最佳，冷凍干燥和自然陰干次之，其次是高溫殺青干燥，曬干最不利于其有效成分的保留。從實際考慮冷凍干燥和低溫干燥需要高成本投入不符合實際，綜合考慮虎杖有效成分及經濟成本，自然陰干可作為虎杖的干燥方法。

［參考文獻］

［1］國家藥典委員會.中國藥典2010年版一部［s］.北京:中國醫藥科技出版社， 2010.

［2］肖凱，宣利江，徐亞明，等.虎杖的水溶性成分研究［J］.中草藥，2003，34（6）:496.

［3］金雪梅，金光洙.虎杖的化學成分研究［J］.中草藥， 2007，38（10）:1446.

［4］傣靈林.虎杖的化學成分及其質量研究.沈陽藥科大學碩士學位論文，2003，6.

［5］玉梅，王君明，崔瑛，等.基于二苯乙烯類為主要活性成分的虎杖藥理作用研究進展［J］.中國實驗方劑學雜志，2011，17（9）:263.

［6］陳劍明，張聲生，等.虎杖苷對非酒精性脂肪肝保護作用的實驗研究［J］.中華中醫藥學刊， 2015，33（5）:1188.

［7］劉俊，徐云虹.虎杖提取物白藜蘆醇對人胃癌7901細胞增殖和凋亡的影響［J］.時珍國醫國藥，2013，24（7）:1627.

［8］閏靜，王振月，劉丹寧，等.白黎蘆醇及其苷的生物活性研究進展［J］.中醫藥學報，2000，2:39.

［9］SUN SP， SUN ZJ， WU SL， et al. The protective effect of Resveratrol for liver anaemia ［J］. Chinese Journal of General Surgery， 2005，14（2）: 149.

［10］余慧琳.白藜蘆醇的生理功能及其應用前景［J］.生物學通報，2005，40（11）:12.

［11］Heredia A，Davis C，Redfield R.Synergistic inhibition of HIV-1 in activated and resting peripheral blood mononuclear cells，monoeyte—derived macrophages， and selected drug— resistant isolates with nucleoside analogues combined with a natural product，resveratrol［J］.Acquit Immune Defic Syndr， 2000，25（3）:246.

［12］丁艷，黃志華.大黃素藥理作用研究進展［J］.中藥藥理與臨床，2007，23（5） : 235.

［13］張明，荔志云，趙紅斌，等.大黃素甲醚對神經細胞缺氧性損傷保護作用的實驗研究［J］.西北國防醫學雜志，2012，33（2）:106.

［14］徐晚秀，李靜，宋飛虎，等.中草藥干燥現狀［J］.中藥與臨床，2015，6（2）:114.

［15］朱俊霖，閆永紅，張學文，等.不同干燥方法對黃芩有效成分含量的影響［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18（5）:7.

［16］檀偉靜，廖華軍，林珠燦，等.不同干燥方法對梔子中主要有效成分含量的影響［J］.亞太傳統醫藥，2012，08（3）:18.

［17］周麗，邵繼紅，王峰，等.HPLC法分析溶劑和光照對白藜蘆醇反式向順式轉化的影響［J］.中國釀造， 2010， （7）:173.

［18］劉薇，葉玲，趙潔，等.高效液相色譜法考察大黃素在HBSS溶液中的溶解度及其穩定性［J］.中國衛生檢驗雜志，2009，（8）:1775.

（責任編輯：胡慧玲）

Effect of different drying methods on active components contents of Huzhang

YU Zhi-fang， OU Quan， WEN Jing，LUO Ting-ting， MA Yun-tong//（School of Pharmacy， Chengdu University of Traditional Chinese Medicine； Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine， Ministry of Education； National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research， Development and Utilization of Chinese Medicine Resources， Chengdu 611137，Sichuan）

［Abstract］Objective: To provide a scientific basis for the original processing of Huzhang by comparing effect of different drying methods on active components content. Method: The fresh medicinal material was divided into 5 groups randomly and treated using the methods of drying methods including natural drying in the sun， natural drying in the shade， oven 50℃ lowtemperature drying， high-temperature drying under 105℃， and vacuum freeze-drying. The contents of polydatin， resveratrol，emodin-8-O-glucoside， emodin and physcion were used as examine indicators to compared the effect of different methods. Result: Significant differences were found among components contents after treated with different drying methods. The drying in the sun caused the most loss of active ingredients. However， low-temperature drying， freeze-drying and drying in the shade were beneficial for the active components reservation. Conclusion: Comprehensively considering cost， remained active components and practicability， the method of drying in the shade is suggested to be adopted for Huzhang processing.

［Key words］Huzhang； drying method； active component； HPLC

［中圖分類號］R282.4

［文獻標識碼］A

［文章編號］1674-926X（2016）02-004-04

［基金項目］巴 州區道地中藥材虎杖種植技術集成及產業化示范項目（編號：313-672）

［作者簡介］余志芳（1989-），女，碩士生，從事中藥品種、質量及資源研究

［通訊作者］馬 云桐（1963-），男，教授，從事中藥種質及資源研究工作 Email:mayuntong06@163.com

［收稿日期］2016-03-04