梨炭疽病菌生物學特性及防治藥劑的室內篩選

陳國平，趙 杰

（1上海市浦東新區農業服務中心泥城站，上海201306；2上海市浦東新區農業技術推廣中心，上海201201）

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梨炭疽病菌生物學特性及防治藥劑的室內篩選

陳國平1，趙 杰2*

（1上海市浦東新區農業服務中心泥城站，上海201306；2上海市浦東新區農業技術推廣中心，上海201201）

摘 要：研究了梨炭疽病菌的生物學特性，并對防治藥劑進行了室內初步篩選。結果表明：植物煎汁培養基中以梨果和梨枝培養基較有利于菌絲生長，梨果培養基有利于產孢；PDA培養基最適宜菌落生長，葡萄糖蛋白胨瓊脂培養基產孢量最多。菌絲生長的適宜溫度為5—30℃，最適溫度25℃；菌落產孢能適應較廣的pH范圍，以pH =3產孢量最多；菌絲的致死溫度為56℃，黑暗條件下產孢量最大。在測試的碳源中，麥芽糖、乳糖和葡萄糖最適宜菌絲生長，蔗糖最適宜產孢；氮源中以酵母膏、蛋白胨和牛肉膏最適宜菌絲生長，蛋白胨和牛肉膏最適宜產孢。采用生長速率法測定了14種殺菌劑對病菌的抑制作用，其中多菌靈、咪鮮胺錳鹽、氟啶胺、苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯的毒力較高。

關鍵詞：梨炭疽病；梨炭疽病菌；生物學特性；殺菌劑

鮮梨是我國主要果品之一，也是上海浦東新區的優勢產業，其中‘翠冠’梨因果形大、外觀好、風味佳，深受廣大消費者喜愛，市場銷售情況常供不應求，666.7 m2產值達8 900元（人民幣，下同）（大眾水果中僅次于葡萄）。梨炭疽病是由膠孢狀炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides Penz.）引起的真菌性病害，能侵染桃、梨、葡萄和柑橘等多種果樹［1］，隨著果樹老齡化的發展，該病發生日益嚴重，已成為影響果品產量和品質的重要病害之一［2］。近幾年，國內對梨炭疽病的病菌診斷、發生規律和藥劑防治方面開展了大量研究，并取得了一定成績［2-5］，然而目前生產上仍將化學防治作為控制該病害的主要措施。本試驗通過對當地梨炭疽病菌的生物學特性和室內殺菌劑的篩選研究，以期探索改善果園環境控制病害的方法。

1　材料與方法

1.1供試病原菌

梨炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides Penz.），采自浦東新區梨園，經室內組織分離、純化［6］，病原菌于PDA培養基上培養5 d用于試驗。

1.2供試藥劑

50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑（江蘇輝豐農化股份有限公司），12.5%腈菌唑乳油（深圳諾普信農化股份有限公司），0.3%丁子香酚可溶液劑（南通神雨綠色藥業有限公司），70%代森聯水分散粒劑［允發化工（上海）有限公司］，10%苯醚甲環唑水分散粒劑（江蘇豐登農藥有限公司），50%克菌丹可濕性粉劑（江蘇龍燈化學有限公司），80%代森錳鋅可濕性粉劑（江蘇省農墾生物化學有限公司），70%丙森鋅可濕性粉劑［拜耳作物科學（中國）有限公司］，22.7%二氰蒽醌懸浮劑（江西禾益化工有限公司），250 g/L醚菌酯懸浮劑［先正達（蘇州）作物保護有限公司］，45%咪鮮胺乳油（以色列馬克西姆化學公司），50%多菌靈懸浮劑（江蘇龍燈化學有限公司），500 g/L氟啶胺懸浮劑（浙江石原金牛農藥有限公司），30%吡唑醚菌酯懸浮劑（深圳諾普信農化股份有限公司）。

1.3生物學特性觀察

1.3.1植物煎汁對梨炭疽病菌菌落生長和產孢量的影響

將梨炭疽病菌于20%梨樹葉片、枝條和未成熟梨果的煎汁液培養基上25℃培養7 d，觀察菌落生長情況，并測產孢量［7-8］。

1.3.2不同培養基對菌落生長和產孢量的影響

選用PDA、PSA、察貝克氏、葡萄糖蛋白胨瓊脂、淀粉瓊脂和麥芽糖瓊脂等6種培養基［7］，于直徑為9 cm的平板中央接種直徑為1 cm的病原菌菌絲塊，25℃培養5 d后測量菌落直徑，第7天測產孢量［7］。

1.3.3溫度和pH對菌落生長和產孢量的影響［7］

將直徑為1 cm的病原菌菌絲塊接種到PDA平板中央，分別于5—40℃下培養5 d后測量菌落直徑。

用乳酸和NaOH配制pH 3—10的PDA培養基，于平板中央接種直徑為1 cm的病原菌菌絲塊，25℃培養5 d后測量菌落直徑，第7天測產孢量。

1.3.4菌落致死溫度的測定

取直徑為1 cm的菌絲塊于不同溫度的試管中處理10 min，然后接種到PDA平板中央，于25℃培養5 d，觀察菌絲生長情況［9］。

1.3.5光照對菌落生長和產孢量的影響

將直徑1 cm的菌絲塊接種到PDA平板中央，分別于連續光照、連續黑暗、12 h光照12 h黑暗交替下，25℃培養5 d后測量菌落直徑，第7天測產孢量。

1.3.6不同碳、氮源對菌落生長和產孢量的影響

采用真菌生理培養基［9］，以KNO3為氮源，測定葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、果糖和淀粉等碳源對菌落生長的影響，25℃培養5 d測量菌落直徑，第7天測產孢量。以蔗糖為碳源，測定硝酸鉀、硫酸銨、氯化銨、酵母膏、牛肉膏、蛋白胨和尿素等氮源對菌落生長的影響，25℃培養5 d后測量菌落直徑，第7天測產孢量。

1.4殺菌劑的毒力測定

采用生長速率法［9-10］進行測定：根據試驗情況，配置5個濃度的含藥PDA培養基，將直徑為1 cm的菌絲塊放在含藥培養基中央，25℃培養5 d，測量菌落直徑、計算抑制率、以藥劑有效成分的濃度為測試濃度計算回歸方程和抑制中濃度EC50。

2　結果與分析

2.1菌落培養性狀觀察

梨炭疽病菌在梨果和梨枝培養基上生長較好，5 d后直徑分別為6.58 cm和6.37 cm，在梨葉培養基上生長較慢；培養7 d時的產孢量以梨果培養基最多，梨葉和梨枝培養基較少（表1）。

表1　梨炭疽病菌在植物煎汁培養基上菌落生長和產孢情況Table 1 Colony growth and spore production of C.gloeosporioides in plant juice media

2.2不同培養基對菌落生長和產孢量的影響

梨炭疽病菌在PDA培養基上生長最好，培養5 d后的直徑為8.48 cm，其次為麥芽糖瓊脂培養基和PSA培養基；7 d后的產孢量以葡萄糖蛋白胨瓊脂培養基最多，為2.900×107個/皿，其余依次為PDA、PSA、麥芽糖瓊脂培養基、淀粉瓊脂培養基和察貝克氏培養基（表2）。

表2　6種培養基對梨炭疽病菌菌落生長和產孢量的影響Table 2 Effects of 6 media on colony growth and spore production of C.gloeosporioides

2.3溫度和pH對菌落生長和產孢量的影響

梨炭疽病菌在溫度為5—30℃均能生長，其中以25℃最為適宜，直徑為8.48 cm。菌落在pH =3—10均能正常生長，且都有孢子產生，其中菌落生長以pH =5—8最為適宜，菌落直徑在7 cm以上；產孢量以pH =3強酸環境最大，達到6.167×106個/皿，但菌絲稀疏，緊貼培養基，其次為pH =7—8的中性至弱堿性（表3）。

表3　溫度和pH對梨炭疽病菌菌落生長和產孢量的影響Table 3 Effects of temperature and pH on colony growth and spore production of C.gloeosporioides

2.4菌落致死溫度

將菌絲塊在40—54℃的水浴中處理10 min，于PDA平板上培養7 d后均能形成菌落，而56℃以上不能生長，因此菌落的致死溫度為56℃處理10 min。

2.5光照對菌落生長和產孢量的影響

病原菌不同光照條件下菌落生長差異不大；產孢量以全暗條件下最大，為1.4833×107個/皿，其次為光暗交替和全光條件（表4）。

表4　光照條件對梨炭疽病菌菌落生長和產孢量的影響Table 4 Effects of light on colony growth and spore production of C.gloeosporioides

2.6不同碳、氮源對菌落生長和產孢量的影響

菌落生長最適宜的碳源為麥芽糖、乳糖和葡萄糖，菌落直徑分別為6.15 cm、5.68 cm和5.60 cm，最不適宜的為果糖；產孢量最適宜的碳源為蔗糖，產孢量為5.833×106個/皿（表5）。

表5　碳源對梨炭疽病菌菌落生長和產孢量的影響Table 5 Effects of carbon sources on colony growth and spore production of C.gloeosporioides

菌落生長最適宜的氮源為酵母膏、蛋白胨和牛肉膏等有機氮源，菌落直徑大于6 cm，最不適宜的是硫酸銨和氯化銨；較適宜產孢的氮源為蛋白胨和牛肉膏，產孢量分別為8.767×107個/皿和5.150×107個/皿（表6）。

表6　氮源對菌落生長和產孢量的影響Table 6 Effects of nitrogen sources oncolony growth and spore production of C.gloeosporioides

2.7殺菌劑對梨炭疽病菌的毒力測定

14種殺菌劑對梨炭疽病菌的毒力存在明顯差異，其中以多菌靈、咪鮮胺錳鹽、氟啶胺、苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯的毒力較高，EC50小于1 mg/L；咪鮮胺、丁子香酚、醚菌酯和腈菌唑，EC50小于10 mg/L；二氰蒽醌的EC50為35.1509 mg/L；克菌丹、代森聯、代森錳鋅和丙森鋅的毒力較低（表7）。

表7　14種殺菌劑對梨炭疽病菌的毒力Table 7 Toxicities of 14 fungicides to C.gloeosporioides

3　結論與討論

梨炭疽病菌在梨葉、梨枝和梨果煎汁培養基上能正常生長，其中以梨果和梨枝培養基生長較好，以梨果培養基分生孢子產量較高，可能梨果中含有的糖類有利于菌絲生長和產孢。不同培養基中，以PDA最適宜菌落生長，但以葡萄糖蛋白胨瓊脂培養基產孢量最多。

病原菌無論單糖或多糖都可以利用，但菌落生長最適宜的碳源為麥芽糖、乳糖和葡萄糖，產孢最適宜的碳源為蔗糖。病原菌能利用有機和無機氮，但菌落生長最適宜有機氮，產孢較適宜的氮源為蛋白胨。病原菌在5—30℃下均能生長，最適25℃，pH =3—10的條件下能產生孢子，最適宜pH為3；菌絲塊的致死溫度為56℃；菌落生長對光照的要求不嚴格，但產孢量以全暗條件下最大。

劉郵洲等［11］研究了梨炭疽病菌部分特性，在菌絲生長溫度和pH方面與本研究結果相似；而適宜的碳源和氮源與本研究結果有一定差異，這可能與病菌長期生存的環境有關。

有機肥（有機氮）用量過大、過剩，速效肥偏少，會削弱梨樹生長勢，有利于炭疽病的發生。選擇高地建園，溝系暢通，科學施肥，合理修剪，改善梨園土壤環境，能有效控制發病，說明改變環境和科學種植是控制病害的重要途徑之一。

目前，蜜梨等果品產業正在向規模化、省工化、保護地的方向發展，為梨炭疽病的標準化防控提供了條件。本試驗表明，多菌靈、咪鮮胺錳鹽、氟啶胺、苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯的毒力較高，其中苯醚甲環唑用于防治果樹多種病害，取得了良好效果。傳統農藥多菌靈不僅對梨炭疽病菌具有較高的毒力，研究發現，其對甜瓜枯萎病菌［9］、黃瓜菌核病菌［10］、葡萄灰霉病菌［12］、桃褐腐病菌［13］和水稻惡苗病病菌［14］等多種病菌也有很高的毒力，在當前普遍追求新農藥的形勢下，傳統農藥仍值得繼續合理利用。

參 考 文 獻

［1］呂佩珂，蘇慧蘭，龐震，等.中國現代果樹病蟲原色圖簽［M］.北京：化學工業出版社，2013：97-98，164-165，322-323，471-472.

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［10］趙杰，周超英，顧振芳.腐霉利和多菌靈及其復配劑對黃瓜菌核病菌的毒力測定［J］.上海交通大學學報（農業科學版），2008，26（4）：223-325.

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［12］趙杰，徐心，周超英.7種殺菌劑對葡萄灰霉病的抑菌試驗［J］.上海農業科技，2014（4）：145.

［13］趙杰，徐心，曹忠.五種殺菌劑對桃褐腐病菌的抑菌作用初探［J］.上海農業科技，2014（5）：151.

［14］李斌，趙杰，黃玉人.5種殺菌劑對水稻惡苗病病菌的毒力測定［J］.上海農業科技，2015（1）：122.

（責任編輯：程智強）

Biological characteristics of Colletotrichum gloeosporioides Penz.and indoor screening of fungicides

CHEN Guo-ping1，ZHAO Jie2*
（1Nicheng Station of Pudong New District Agricultural Service Center，Shanghai 201306，China；2Pudong New District Agro-Technology Extension Center，Shanghai 201201，China）

Abstract：The biological characteristics of Colletotrichum gloeosporioides Penz.were studied and the fungicides of controlling pear anthracnose were preliminarily selected in a laboratory.The results showed that pear fruit medium and pear branch medium were both plant juice media suitable for the mycelial growth，and pear fruit medium was also suitable for the spore production；Potato dextrose agar（PDA）medium and dextrose peptone agar medium were the most suitable for the colony growth and spore production respectively.The temperature suitable for the mycelial growth was 5—30℃and the best was 25℃；The pH limits suitable for the colony to produce spores was quite wide and at pH 3 the spore production was the greatest；The thermal death point of the mycelia was 56℃；The spore production was the greatest in darkness.Among the tested carbon sources，maltose，lactose and dextrose were favorable for the mycelial growth，and sucrose was the most favorable for the spore production；Among the tested nitrogen sources，yeast extract，peptone and beef extract were favorable for the mycelial growth，and peptone and beef extract were favorable for the spore production.Testing the inhibiting effects of 14 fungicides on C.gloeosporioides by growth rate method indicated that carbendazim，prochloraz-manganese chloride complex，fluazinam，difenoconazole and pyraclostrobin had high toxicity.

Key words：Pear anthracnose；Colletotrichum gloeosporioides Penz.；Biological characteristics；Fungicides

中圖分類號：S436.612

文獻標識碼：A

文章編號：1000-3924（2016）03-105-05

DOI：10.15955/j.issn1000-3924.2016.03.21

收稿日期：2015-09-29

基金項目：上海市科技興農推廣項目［滬農推字（2015）第1-4號］

作者簡介：陳國平（1958—），男，大專，農藝師，研究方向：植物保護。Tel：021-58077713，E-mail：2746448530@qq.com

*通信作者：趙杰（1979—），男，碩士，高級農藝師，研究方向：園藝作物栽培與植物保護。Tel：021-58588032，E-mail：zhaocaoyou@163.com