大皰性類天皰瘡皮損部位HBD-2表達的研究

朱麗媛 甄 莉

（山西省太原市山西醫科大學，山西 太原 030001）

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大皰性類天皰瘡皮損部位HBD-2表達的研究

朱麗媛 甄 莉

（山西省太原市山西醫科大學，山西 太原 030001）

【摘要】目的 通過研究人類β-防御素2（HBD-2，human beta-2 defensin）在大皰性類天皰瘡中的表達水平，探討其在大皰性類天皰瘡發病和預后中的作用。方法 選取20例病理診斷為大皰性類天皰瘡（BP）皮損，陽性對照組選取20例尋常性銀屑病患者皮損部位，陰性對照組選取20例正常成人皮膚組織。用免疫組化（SP）法檢測HBD-2在各組標本的石蠟切片中的表達部位及水平。選擇平均灰度值作為參考數據，采用SPSS18.0統計軟件分析，組間對照選用秩和檢驗，以P<0.05差異有統計學意義。結果 ①β-防御素的表達：正常皮膚組織的免疫組化染色基底層可見少量HBD-2的表達，BP患者皮損的基底層、棘層、顆粒層可見HBD-2的表達，銀屑病患者皮損處基底層、棘層、顆粒層可見HBD-2的表達。②HBD-2在BP表皮中的表達，比正常皮膚高（Z=-10.892，P<0.001），比銀屑病皮損高（Z=-5.385，P<0.001）。結論 大皰性類天皰瘡的發病可能 HBD-2有關，大皰性類天皰瘡的免疫調節過程可能有HBD-2的參與。

【關鍵詞】大皰性類天皰瘡；防御素-2；銀屑病

大皰性類天皰瘡（BP）是一種表皮下大皰病，有自身抗原形成，好發于老年人。主要特征是皰壁厚、緊張不易破，組織病理表現為表皮下水皰，且好發于胸腹部和四肢近端。目前病死率較高 ，其發病機制尚不清楚。大部分學者傾向于認為BP為一種自身免疫性疾病[1]。近來研究表明，β-防御素2促進機體T細胞的趨化和增殖，參與特異性免疫反應，增強生物機體主動抵抗外來微生物的侵害，還具有促進肥大細胞脫顆粒，釋放炎性介質的作用，參與了銀屑病、疣等多種皮膚性疾病的過程，然而，HBD-2在大皰性類天皰瘡中的研究，國內外鮮有報道，本實驗采用免疫組化的方法半定量的檢測HBD-2在大皰性類天皰瘡患者皮損組織中的表達，并對大皰性類天皰瘡的發病機制進行探討。

1 資料與方法

1.1 研究對象：20例大皰性類天皰瘡患者皮膚活檢標本均來自山西醫科大學第一臨床醫院，男9例，女11例，年齡45~65歲，平均55.5歲，病程20 d~5個月，取20例銀屑病患者作為陽性對照組，男性12例，女性8例，年齡25~65歲，平均41歲，所有標本經組織病理確診。正常皮膚組織來自山西醫科大學第一醫院整形手術切除的外觀正常的皮膚，其中男性5例，女性15例，年齡21~65歲，平均年齡39歲。入選所有病例4個月內未接受糖皮質激素治療、免疫抑制治療及其他治療，且排除了感染性疾病及系統性疾病，妊娠期及哺乳期患者未納入本次研究。

1.2 方法

1.2.1 將組織標本制成石蠟標本，石蠟標本切片至4 μm厚，將實驗的切片進行常規脫蠟至水，高壓鍋抗原修復45 s，PBS浸洗3次，每次3 min，3% H2O2滅活，PBS 浸洗后，滴加山羊血清37 ℃孵育20 min，滴加一抗（HBD-2的濃度為1∶250）。4 ℃過夜，PBS浸洗3 min 3次，滴加二抗，并進行DAB顯色，自來水終止顯色，蘇木精復染，封片。陰性對照為滴加PBS液去除假陽性。

1.2.2 免疫組化檢測HBD-2結果判定：細胞胞質出現棕黃色顆粒為結果陽性細胞，不出現即為陰性。每張切片在光學顯微鏡的400×視野下均選取5個不重疊的代表部位，用計算機圖像分析儀測定平均灰密度值，再用統計學方法取中位數進行結果比較。

1.3 統計學分析：所有數據均經SPSS18.0統計軟件進行分析，用中位數M表示。計量資料的組間采用成組秩和檢驗，以α=0.05為檢驗水準。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 表達部位 HBD-2在大皰性類天皰瘡皮損處、銀屑病皮損處及正常皮膚的表達部位不同，在大皰性類天皰瘡的基底層、棘層、顆粒層的胞質及胞核表達，呈強陽性；在尋常型銀屑病皮損處基底層、棘層和顆粒層細胞的胞質表達，在毛囊、皮脂腺、小汗腺及血管壁亦可見表達；正常皮膚的基底層可見HBD-2的少量表達甚至陰性表達。

2.2 表達強度 HBD-2在大皰性類天皰瘡皮損區、銀屑病皮損區及正常皮膚的表達強度不同，HBD-2在大皰性類天皰瘡皮損區表達高于比正常皮膚，甚至高于尋常型銀屑病陽性對照組，見表1。

表1 三組平均灰度值的比較

3 討 論

大皰性類天皰瘡（bullous pemphigoid，BP）是一種好發于中老年人的自身免疫性表皮下大皰病。針對表皮細胞間物質橋粒芯蛋白的自身抗體可以使表皮棘細胞松解[2]，已有實驗證實BP患者體內存在針對BP180的自身反應性T細胞，能自發識別BP180。

人類β防御素是防御素家族中的重要分支，人類β防御素家族成員較多，有β-防御素1、2、3、4，β-防御素2（HBD-2）是人類最早從銀屑病患者體內發現的β防御素家族成員，呈誘導性性表達，自發現以來就備受關注，研究其甚多，其中HBD-2不僅可通過該變生物膜通透性直接殺滅病原微生物，還可以通過介導T淋巴細胞釋放免疫因子調節機體的免疫應答，在炎性反應和創傷修復過程發揮著重要作用。

本次實驗中，HBD-2在大皰性類天皰瘡患者皮損處表達于基底層、棘層、顆粒層的胞質及胞核，在皮脂腺、毛囊、血管壁及小汗腺亦可見少量表達，表明在大皰性類天皰瘡皮損處免疫活動活躍，推測大皰性類天皰瘡皮損處不易發生感染；HBD-2可能參與該病的發生及發展，目前關于HBD-2與大皰性類天皰瘡的研究，國內未見報道，國外有少量報道。本實驗中，正常皮膚基底部有少量HBD-2的表達，其表達與皮膚的免疫功能有關，能夠起到一定抵抗外來微生物的作用。本實驗中HBD-2在銀屑病皮損區基底層、棘層和顆粒層細胞的胞質表達，在毛囊、皮脂腺、小汗腺及血管壁亦可見表達，德國Harder[3]等發現HBD-2在銀屑病皮損中的表達，合成和分泌HBD-2的細胞主要是上皮細。多種細胞因子及細菌病毒產物均可誘導HBD-2的表達。Hollox等[4]對銀屑病患者和正常人群的β防御素基因區域進行多態性分析，發現與銀屑患者的HBD-2基因的拷貝數增多，Ong等[5]研究發現銀屑病患者皮膚結構雖然被破壞，但是卻很少發生感染，其原因之一即為銀屑病患者皮損區HBD-2表達較高，Huh[6]等研究了HBD-2在尋常型銀屑病皮損處中的表達分布情況，發現HBD-2在尋常型銀屑病患者皮損處主要表達于基底層、棘層和顆粒層細胞的胞質。

上述結果表明，大皰性類天皰瘡患者的HBD-2表達比正常皮膚高，甚至高于尋常型銀屑病患者，HBD-2參與了大皰性類天皰瘡的發病過程，為大皰性類天皰瘡的治療提供新的思路，同時也可以為其他自身免疫性疾病的治療提供新的思路，減少了傳統糖皮質激素治療帶來的不良反應。

參考文獻

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[3] Harder J,Bartels J,Christopher E,et al.Apeptideantibiotic from human skin[J].Nature,1997,387(6636):861-862.

[4] Hollox EJ,Huffmeier U,Zeeuwen PL,et a1.Psoriasis is associated with increased β-defensin genomic copy number[J].Nat Genet, 2008,40(1):23-25.

[5] Ong PY,Ohtake T,Brandt C,et al.Endogenous antimmicrobial petides and skin infections in atopic dermatitis[J].N Engl J Med,2002,347 (15):1151-1150.

[6] Huh WK,Oono T,Shirafuji Y,et al.Dynamic alteration of human beta-defensin 2 localizatin from cytoplasm to intercellualr space in psoriatic skin[J].J Mol Med,2002,80(10):678-684.

中圖分類號：R758.66

文獻標識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）06-0091-02