胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平變化及臨床意義

陳志凱，傅松維，鮑舟君，李卓棟

(浙江省舟山醫院 檢驗中心，浙江 舟山 316000)

胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平變化及臨床意義

陳志凱Δ，傅松維，鮑舟君，李卓棟

(浙江省舟山醫院 檢驗中心，浙江 舟山 316000)

目的 觀察胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平變化特點，探討其臨床意義。方法 回顧性分析浙江省舟山醫院自2012年1月～2014年6月消化內科及胃腸外科收治的84例胃癌患者為研究對象(觀察組)，選擇30例健康人為對照組。采用qRT-PCR檢測所有研究對象血清miR-200b和miR-200c水平，比較2組間血清miR-200b和miR-200c水平差異，探討胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平與其臨床及病理特點之間的關系。結果 胃癌組血清miR-200b和miR-200c水平均明顯低于對照組，差異均有統計學意義(均P<0.05)。胃癌患者不同年齡、性別、分化程度和浸潤深度之間血清miR-200b和miR-200c水平差異無統計學意義；較高臨床分期及合并淋巴結轉移的患者血清miR-200b和miR-200c水平明顯低于較低臨床分期和無淋巴結轉移者，差異均有統計學意義(均P<0.05)。血清miR-200b和miR-200c水平診斷胃癌的AUC分別為0.826(95%CI：0.741～0.911，P<0.001)和0.856(95%CI：0.778～0.935，P<0.001)。結論 胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平明顯降低，并且與臨床分期和淋巴結轉移密切相關，檢測血清miR-200b和miR-200c水平有助于判斷胃癌并判斷預后。

胃癌；血清；miR-200b；miR-200c；臨床意義

近年來胃癌的發生率越來越高，但是因為缺乏有效的篩查手段，大多數患者確診時已經到了病程的中晚期，因而失去最佳治療時機，因此其死亡率較高。血清腫瘤標志物仍是診斷腫瘤性疾病的主要指標之一，簡單易行，無論是在大醫院還是基層醫院都可以實現。傳統的與胃癌相關的腫瘤標志物如CA72-4、CA12-5、CA19-9及CEA等雖然具有一定的臨床價值，但是其敏感性和特異性有限，難以滿足臨床需要[1]。隨著人們對于微小RNA(miRNA)的研究逐漸深入，越來越多的研究發現miRNA與腫瘤性疾病的發生和發展具有密切聯系，因而有望成為診斷腫瘤的新指標[2]。尤其是miR-200家族與消化系統腫瘤的關系已經成為臨床醫師關注和研究的熱點問題之一，主要包括miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141和miR-429五個成員[3]。研究顯示胃癌組織中miR-200b及miR-200c表達減少，且擁有較差的預后[4]。但是對于胃癌患者血清中的miR-200b和miR-200c水平變化及臨床病理參數之間的關系報道較少。本研究旨在觀察胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平變化特點并探討其臨床意義，為臨床上更好地診斷胃癌提供參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究采用回顧性分析，選擇自2012年1月～2014年6月在浙江省舟山醫院消化內科及胃腸外科住院治療的84例胃癌患者為研究對象，所有患者均符合以下納入標準：①初次診斷為胃癌；②血清miR-200b和miR-200c水平的測定均在術前進行；③均經病理學檢查證實為胃癌。排除以下患者：①既往診斷為胃癌，此次再次入院治療者；②測定血清miR-200b和miR-200c水平時已接受過胃癌切除手術者；③臨床資料不完整者。其中男49例，女35例；年齡36～84歲，平均(59.67±6.26)歲；分化程度為低分化54例，中分化18例，高分化12例；腫瘤浸潤深度為侵及漿膜46例，未及漿膜38例；腫瘤的臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期40例，Ⅲ～Ⅳ期44例；無淋巴結轉移22例，合并淋巴結轉移62例。選取同期在我院進行體檢的30例健康人為對照組，其中男18例，女12例；年齡34～83歲，平均(57.35±6.37)歲。2組間性別及年齡差異無統計學意義。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：所有研究對象均在入院時或體檢時抽取外周靜脈血5 mL用于檢測血清miR-200b和miR-200c水平，所有血液標本采集后統一放置于-80 ℃冰箱內保存最后統一進行操作。血清miR-200b和miR-200c水平的檢測均采用qRT-PCR方法進行檢測，所有試劑盒均由上海吉瑪生物科技有限公司提供，并嚴格按照說明書進行操作。比較2組間血清miR-200b和miR-200c水平差異，探討胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平與其臨床及病理特點之間的關系，采用相關性分析探討血清miR-200b和miR-200c之間的相關性。

1.2.2 血清miR-200b和miR-200c的檢測方法：①血清總miRNA的提取：所有標本均取離心后血清400 μL并參照Ambion公司提供的試劑盒提取血清總miRNA；②血清中總miRNA水平的檢測：根據Applied Biosystems公司提供的試劑盒說明書進行逆轉錄，采用real-time qPCR進行定量分析。采用RNU6作為內參，所有引物均由Applied Biosystems公司合成，其中miR-200b和miR-200c的引物分別為5’-TGGATGGAGTCAGGTCTCTA-3’和5’-CAGTGAGGCTGGATTCG-3’。

2 結果

2.1 2組間血清miR-200b和miR-200c水平比較 胃癌組血清miR-200b和miR-200c水平均明顯低于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組間血清miR-200b和miR-200c水平比較Tab.1 Comparison of serum miR-200b and miR-200c levels between

*P<0.05，與對照組比較，compared with control group

2.2 胃癌患者血清miR-200b水平與臨床及病理參數之間的關系 胃癌患者不同年齡、性別、分化程度和浸潤深度之間血清miR-200b水平差異無統計學意義；但是較高臨床分期及淋巴結轉移的患者血清miR-200b水平明顯低于較低臨床分期和無淋巴結轉移者，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 胃癌患者血清miR-200b水平與臨床及病理參數之間的關系Tab.2 The relation between serum miR-200b and clinical or pathological features in gastric cancer patients(±s)

2.3 胃癌患者血清miR-200c水平與臨床及病理參數之間的關系 胃癌患者不同年齡、性別、分化程度和浸潤深度之間血清miR-200c水平差異無統計學意義；但是較高臨床分期及合并淋巴結轉移的患者血清miR-200c水平明顯低于較低臨床分期和無淋巴結轉移者，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 胃癌患者血清miR-200c水平與臨床及病理參數之間的關系Tab.3 The relation between serum miR-200c and clinical or pathological features in gastric cancer patients(±s)

2.4 血清miR-200b和miR-200c水平診斷胃癌的ROC曲線分析 對血清miR-200b和miR-200c水平繪制診斷胃癌的ROC曲線，結果發現血清miR-200b和miR-200c水平診斷胃癌的AUC分別為0.826(95% CI：0.741～0.911，P<0.001)和0.856(95% CI：0.778～0.935，P<0.001)。見圖1。

圖1 血清miR-200b和miR-200c水平診斷胃癌的ROC曲線Fig.1 Receiver operating characteristic of serum miR-200b and miR-200c diagnosed as gastric cancer

3 討論

目前臨床上對于早期胃癌的診斷仍缺乏特異性的指標和有效的手段，血清腫瘤標志物檢測仍然是臨床上常用的協助診斷腫瘤性疾病的方法之一。經典的腫瘤標志物主要包括以下3類[5-6]：在胚胎期大量表達而正常人體內僅少量表達，如甲胎蛋白(AFP)；腫瘤細胞膜糖基化形成的糖鏈抗原，如CA12-5；腫瘤組織中大量表達的酶、激素和蛋白質等抗原。這些腫瘤標志物在一定程度上能夠協助臨床醫師發現和診斷一些腫瘤性疾病，但是由于敏感性和特異性有限，其臨床價值難以滿足臨床需要。

微小RNA(miRNA)是人體內非編碼的內源性單鏈RNA分子，其大小約為22個核苷酸組成，涉及到體內細胞的增殖、分化和凋亡等過程[7]。近年來隨著研究的深入，人們發現約52.5%編碼miRNA的基因位于腫瘤相關區域或染色體的脆性位點，這一點提示miRNA在腫瘤性疾病的發生發展過程中也發揮了重要作用，并且被稱為新型的腫瘤標志物[8]。miR-200家族是其中研究較多的一類微小RNA，諸多研究已經證實miR-200家族在多種腫瘤(如惡性黑色素瘤、胰腺癌、膀胱癌、肝癌等)的發生和發展過程中發揮了一定的作用[9]。miR-200b和miR-200c又是miR-200家族中研究較多的微小RNA，2者分別位于人類的1號和12號染色體上，并且具有類似的核心RNA序列，且在多數腫瘤疾病中表現出一定的抗腫瘤作用，大量研究表明miR-200b和miR-200c與抑制腫瘤的侵襲性轉移具有密切聯系[10]。迄今為止對于miR-200研究較多地集中在抑制轉錄因子ZEB1/ZEB2的表達上，主要表現在miR-200可以直接抑制ZEB1/ZEB2的表達并增加E-鈣粘蛋白的生成，最終阻斷上皮-間質轉化[11]。已有研究表明胃癌組織中miR-200b和miR-200c表達明顯下調，并且隨著其表達的降低，患者的臨床分期越高，且生存時間越短，并推測這種表達的下調與其直接抑制DNA甲基轉移酶DNAMT3A和DNAMT3B和間接抑制DNAM1的表達有關[12]。但是對于胃癌患者血清中的miR-200b和miR-200c水平與腫瘤特征之間的關系研究較少。

本研究中通過檢測胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平后發現，胃癌組血清miR-200b和miR-200c水平均明顯低于健康人組，差異均有統計學意義(P<0.05)；胃癌患者不同年齡、性別、分化程度和浸潤深度之間血清miR-200b和miR-200c水平差異無統計學意義；但是較高臨床分期及合并淋巴結轉移的患者血清miR-200b和miR-200c水平明顯低于較低臨床分期和無淋巴結轉移者，差異均有統計學意義(P<0.05)。這一點與何利恒[13]的研究結果一致。表明胃癌患者體內miR-200b和miR-200c水平的降低減弱了其正常的抗腫瘤作用，導致腫瘤擴散和轉移加劇。進一步的統計學表明血清miR-200b和miR-200c水平診斷胃癌的AUC分別為0.826(95% CI：0.741～0.911，P<0.001)和0.856(95% CI：0.778～0.935，P<0.001)，具有極高的臨床診斷價值。說明血清miR-200b和miR-200c水平可以作為協助診斷胃癌的有效腫瘤標志物，筆者相信隨著進一步研究的深入和檢驗技術的發展，血清miR-200b和miR-200c水平必將成為臨床上診斷胃癌的常規且有效的手段。

綜上所述，胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平明顯降低，并且與臨床分期和淋巴結轉移密切相關，檢測血清miR-200b和miR-200c水平簡單可行，并且有助于判斷胃癌及預后。

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[13] 何利恒. miR-200b和miR-200c在人胃癌患者血清中的表達及其臨床意義[D].衡陽：南華大學，2014.

(編校：王儼儼)

Changes of serum levels of miR-200b and miR-200c in patients with gastric cancer and its clinical significance

CHEN Zhi-kaiΔ, FU Song-wei, BAO Zhou-jun, LI Zhuo-dong

(Inspection Center，Zhoushan Hospital of Zhejiang Province, Zhoushan 316000, China)

ObjectiveTo obverse the changes of serum levels of miR-200b and miR-200c in patients with gastric cancer and discuss its clinical significance. MethodsA total of 84 patients with gastric cancer admitted at the department of gastroenterology and gastrointestinal surgery of Zhoushan Hospital of Zhejiang Province from January 2012 to June 2014 were retrospectively investigated(the observation group) and 30 healthy people were selected as the control group. The levels of serum miR-200b and miR-200c of all people were tested by qRT-PCR and the difference about serum miR-200b and miR-200c were compared between the two groups and the relation among the serum miR-200b and miR-200c and clinical or pathological features were discussed. ResultsThe levels of serum miR-200b and miR-200c of the gastric cancer group was lower than that of the control group, respectively, there were significant differences(allP<0.05). There were no statistical significances in serum miR-200b and miR-200c with different ages, genders, differentiation degree and depth of invasion. The levels of serum miR-200b and miR-200c of the gastric cancer patients with higher degree of clinical stage and lymphatic metastasis was lower than that of the gastric cancer patients with lower degree of clinical stage and without lymphatic metastasis,respectively, the differences were statistically significant(allP<0.05).The AUC of the levels of serum miR-200b and miR-200c to diagnose gastric cancer were respectively 0.826(95% CI 0.741-0.911,P<0.001) and 0.856(95% CI：0.778-0.935,P<0.001). ConclusionThe levels of serum miR-200b and miR-200c in patients with gastric cancer decrease obviously and they are closely related to clinical stages and lymph node metastasis; it is helpful to diagnose gastric cancer and pedict prognosis to test the serum miR-200b and miR-200c.

gastric cancer; serum; miR-200b; miR-200c; clinical significance

陳志凱，通信作者，男，本科，初級檢驗師，研究方向：胃癌腫瘤標志物血清檢驗，E-mail：sdlwwlli@126.com。

R735.2

A

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.05.64