精子DNA碎片率與男性不育的關系研究

黎智彪　嚴共全　黃莉　梅金梁?陳亮

[摘要] 目的 分析研究精子DNA碎片率與男性不育的關系，探究不育患者年齡、精子碎片率和精液常規參數的相關性。方法 選擇我院收治的男性不育患者100例作為本次研究的對象，收治時間在2013年3月～2014年6月，按照年齡將這100例患者分成三組，25～29歲組（n=33），30～35歲組（n=33），36～50歲組（n=34），使用SCD檢測其精子DNA碎片率，分析檢測其精液常規參數。結果 正常形態精子率和精子活力不存在相關性（r=0.65，P>0.05）；精子活力和年齡存在負相關（r=-2.41，P<0.05）；和精子DFI存在正相關關系（r=0.33，P<0.05）。結論 隨著年齡的增長精子活力會逐漸的下降，對男性的生育能力具有影響，且精液常規參數與精子DNA碎片率不存在密切的聯系，故認為，精子DNA碎片檢測可以在精液常規分析中應用，作為反映男性生育能力的重要指標。

[關鍵詞] 精子DNA碎片率；男性不育；關系

[中圖分類號] R711.6 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2016）09-128-03

[Abstract] Objective To analyze and research the relationship between sperm DNA fragmentation rate and male infertility， and to explore the relativity among age， sperm fragmentation rate and semen routine parameters of infertile patients. Methods 100 male infertility patients who were selected as the study object this time from March 2013 to June 2014 in our hospital were divided into three groups according to the age， which were 25-29 years old group（n=33）， 30-35 years old group（n=33）， and 36-50 years old group（n=34）， SCD was utilized to detect the sperm DNA fragmentation rate and analyze semen routine parameters. Results There was no correlation between normal sperm morphology rate and sperm motility（r=0.65， P>0.05）. There was a negative correlation between sperm motility and age（r=-2.41， P<00.05）， and positive correlation between sperm motility and sperm DFI（r=0.33， P<00.05）. Conclusion With the increase of age， the sperm activity would gradually decrease， which had an effect on the male fertility. There was no close relationship between semen routine parameters and sperm DNA fragmentation rate. Therefore， sperm DNA fragmentation detection could be applied in semen routine analysis， which was considered as an important indicator of male fertility.

[Key words] Sperm DNA fragmentation rate， Male infertility； Relationship

男性不育是指育齡夫婦同居1年，未采取任何避孕措施，因男方原因造成不育的現象稱為男性不育。相關的臨床研究資料表明[1]，男性的年齡和自然流產具有密切的關系，男性年齡越大，意味著精子碎片率的概率越大，相關的研究資料認為，精子碎片率和男性生育力存在密切的聯系，精子碎片率越高，男性的生育力則相對較弱，目前臨床學術上關于精子脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）碎片率與男性不育關系方面的研究資料較少，臨床尚未有完全的定論[2]。本研究為進一步探究精子DNA碎片率與男性不育的關系，特選擇了我院收治的100例男性不育患者作為研究對象，經研究發現精子DNA碎片率和精液常規各參數不存在相關性，通過整理匯總分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將我院2013年3月～2014年6月收治的男性不育患者100例作為本次研究的對象，按照年齡將這100例患者分成三組，20～29歲組（n=33），30～35歲組（n=33），36～50歲組（n=34）。

25～29歲組患者的平均年齡為（26.1±1.3）歲，不育時間為（3.1±2.3）年，精液體積為（2.32±0.15）mL；30～35歲組患者的平均年齡為（32.1±1.3）歲，不育時間為（4.0±2.3）年，精液體積為（2.32±0.15）mL；36～50歲組患者的平均年齡為（36.3±1.3）歲，精液體積為（2.45±0.17）mL，育齡夫婦婚后一直同居，性生活正常，亦未采取任何避孕措施，一年以上未懷孕者稱為不孕癥，自確診為不孕癥后已有（5.2±2.6）年，即不育時間為（5.2±2.6）年。

經確認，參與本次研究的所有患者均在婚后同居1年以上、夫妻性生活正常、未采取避孕措施而未育者，且將心肝腎功能異常、血液系統異常、神經系統異常及不愿配合本次調查研究的患者排除在外，所有患者均符合本次研究的基本條件。

1.2 方法

提醒患者在檢測前1個星期禁欲，使用手淫法采集患者的精液標本，并使用潔凈的塑料容器放置標準，待標本液化后，使用偉力彩色精子質量檢測系統對5μL的精液進行常規分析，檢測各組的精子活力、密度和精液量，使用瑞-吉染色鏡檢觀察[3]。

使用精子染色質擴散法對精子DNA碎片檢測，使用生理鹽水將新鮮的精液稀釋至10×106/mL，稀釋結束后進行常規的精液檢查，將60μL的待測標本加入至熔化的易熔凝膠管中，并充分混勻，將標本放入37℃中的暖箱中孵育待用，將精子凝膠混合液加入至預先處理的載玻片上，放入22cm2的蓋玻片上，放入2～8℃的冰箱中，凝固5min[4]。

1.3 觀察指標

對所有研究患者的精液體積、精子濃度、精子活力、正常形態精子率、精子DFI（精子DNA完整性）進行觀察，并探討精子DNA碎片率與男性不育的關系。

1.4 統計學處理

對所有研究患者的精液體積、精子濃度、精子活力、正常形態精子率、精子DFI使用SPSS18.0軟件進行數據處理，以95%作為可信區間，精液體積、精子濃度、精子活力、正常形態精子率、精子DFI使用（）表示，使用t檢驗，數據結果顯示P<0.05，則認為差異具有統計學意義，使用Pearson相關系數對不育男性的年齡、精子密度、活力、形態、精液量等指標的相關性進行檢驗和分析。

2 結果

2.1 各年齡段的精子參數比較表

精子DFI，精液體積，精子濃度、精子活力、正常形態精子率在3個年齡組組間差異無統計學意義（P>0.05），具體如表1所示。

2.2 精子活力和年齡的關系

本研究統計結果表明，正常形態精子率和精子活力不存在相關性（r=0.65，P>0.05），精子活力和年齡存在負相關（r=-2.41，P<0.05），和精子DFI存在正相關關系（r=0.33，P<0.05）。

3 討論

不育癥給家庭造成了嚴重的危害，相關的研究資料表明，有50%的不育夫婦均因為男性存在生殖功能缺陷，但是男性的生育能力的檢測手段相對缺乏，精子濃度、活力、形態是評估男性生育能力的重要指標，近年來，以精子DNA損傷為特征的精子染色結構異常對男性生育能力具有較好的預測價值。

遺傳物質正確傳遞給后代需要以精子DNA保持完整為前提，精子DNA的完整性在受精過程和胚胎發育中扮演著重要的角色[5]，多年的臨床實踐經驗表明[6]，自然生育、輔助生殖技術治療結局與精子質量的優劣具有密切的聯系，精子DNA的損傷會給輔助生殖技術治療結局、自然生育造成不良影響，且其損傷與復發性流產具有密切的關系，目前，臨床上關于DNA的損傷機制尚未有明確的闡述，但多認為該病與多因素的聯合作用結果有關。穩定態二氧化氯（stabilized chlorine dioxide，SCD）法檢測是反映男性不育患者精子DFI的常見手段，精液常規參數檢測結果表明，不育患者的精液量、密度、男性精子DFI、正常形態比率不會受患者年齡增長的影響，但精子活力會受年齡增長的影響，但是精子DNA碎片率、精子活性等與精液常規各參數無明顯的聯系[7-8]。

目前臨床上對胚胎發育、受精率是否與精子DNA碎片化有關存在較大的爭論，相關的臨床資料表明，男性精子DFI如果在30%以上，就會降低正常妊娠的可能性，精子細胞核內的DFI含量一般經歷著從少到多的過程，DFI的分布含量較少，非蛋白編碼區分布就會有大量的精子DNA損傷斷裂區域，但該現象并不會導致精子功能下降，但是當精子DNA的損傷斷鏈得不到及時有效的修復時[9-10]，精子DNA蛋白編碼區基因就會在精漿中有害因素的影響下發生損壞，精子功能在此影響下也會受到損傷。還有相關的臨床資料認為，精子染色質中的DFI也會影響精子的穩定性，導致IVF受精過程中雄性原核的形成受阻，降低受精率[11-13]。另一方面，精子卵裂停滯、卵裂率的降低與男性不育患者精子表達微管的基因損傷有關，胚胎數量增多后，胚胎的質量就會受損[14-15]。

本研究結果表明，正常形態精子率和精子活力不存在相關性（r=0.65，P>0.05），精子活力和年齡存在負相關（r=-2.41，P<0.05），和精子DFI存在正相關關系（r=0.33，P<0.05）。故認為隨著年齡的增長精子活力會逐漸的下降，對男性的生育能力具有影響，且精液常規參數與精子DNA碎片率不存在密切的聯系，故認為，精子DNA碎片檢測可以在精液常規分析中應用，作為反映男性生育能力的重要指標。

[參考文獻]

[1] Baumbach J，Rogers JP，Slattery RA，et al.Segregation distortion in a region containing a male-sterility， female-sterility locus in soybean[J].Plant Science： An International Journal of Experimental Plant Biology，2012，195：151-156.

[2] 史海躍，鄭娟，周黎明，等.精子DNA碎片率對男性不育及早期復發性流產的影響[J].中國現代醫生，2015，53（26）：72-75.

[3] 馬強，劉小霞，楊杰，等.切除修復交叉互補組5基因rs17655多態性對精子DNA碎片率和原發性男性不育的影響研究[J].中國全科醫學，2013，16（32）：3817-3820.

[4] 瞿虎，江春強，汪中揚，等.精子DNA碎片率與形態學及輔助生殖結局的相關性分析研究[J].中國醫藥指南，2015，13（13）：1-3.

[5] 楊譯，姜輝，張海嬌，等.男性不育患者年齡與精子DNA碎片和精液常規參數的相關性分析[J].中國性科學，2012，21（2）：17-19.

[6] 崔險峰，丁攀，張云山，等.精索靜脈曲張患者精漿丙二醛水平與精子DNA碎片率的相關性分析[J].天津醫藥，2012，40（4）：385-386.

[7] Alessandro MS，Galmarini CR，Iorizzo M，et al.Molecular mapping of vernalization requirement and fertility restoration genes in carrot.[J].Theoretical and Applied Genetics： International Journal of Breeding Research and Cell Genetics，2013，126（2）：415-423.

[8] 張帥，孟嘯寅，卓勝楠，等.精子DNA碎片對IVF-ET結局的影響[J].天津醫科大學學報，2013，19（2）：124-126，130.

[9] 商學軍，莫敦勝，詹緒新，等.左卡尼汀在男性不育患者精子DNA損傷中的保護作用[J].第三軍醫大學學報，2015，37（15）：1508-1512.

[10] 張帥，張云山.精子DNA碎片化在男性不育中的研究進展[J].山西醫藥雜志，2012，41（19）：1005-1007.

[11] 許金榜，黃海龍，康躍凡，等.男性少弱精子癥不育患者精子DNA碎片檢測情況分析[J].中國現代醫學雜志，2013，23（23）：75-78.

[12] 張艷萍，張麗紅，邱毅，等.特發性男性不育癥患者精子功能檢測的臨床分析[J].生殖與避孕，2015，35（7）：489-493.

[13] Kumar P，Vasupalli N，Srinivasan R，et al.An evolutionarily conserved mitochondrial of 108 is associated with cytoplasmic male sterility in different alloplasmic lines of Brassica juncea and induces male sterility in transgenic Arabidopsis thaliana[J].Journal of Experimental Botany，2012，63（8）：2921-2932.

[14] 鐘慧芝，呂福通，謝丹尼，等.γH2AX與男性不育患者精子DNA損傷的關系及意義[J].重慶醫學，2015，44（8）：1044-1047，1051.

（收稿日期：2015-12-21）