丹參中丹參酮IIA的快速提取方法的研究

謝顯莉 張利

（四川省中江縣農業局 四川中江 618100）

丹參中丹參酮IIA的快速提取方法的研究

謝顯莉 張利

（四川省中江縣農業局 四川中江 618100）

本研究對影響超聲細胞粉碎法提取丹參酮ⅡA的多個因素進行研究，以丹參飲片作試材，優選料液比、乙醇濃度、顆粒大小、超聲時間、超聲功率五個工藝參數。丹參顆粒為60目，提取溶劑為50%乙醇，超聲功率為1000W，超聲時間4min，丹參酮ⅡA的最高提取率可達0.5316%；超聲細胞粉碎法具有提取效率高、時間短、能耗低的優點，是丹參酮ⅡA提取的有效途徑之一。

超聲細胞粉碎法；丹參飲片；丹參酮ⅡA；工藝參數；快速提取

引言

中藥丹參為唇形科（Lamiaceae）鼠尾草屬多年生草本植物丹參（Salvia miltiorrhiza）的干燥根及根莖，是我國傳統中藥材。丹參有效成分中主要包括水溶性的酚酸類成分和脂溶性的丹參酮類成分。其中脂溶性成分存在于丹參根皮中，具有抑菌、抑制血小板聚集、耐缺氧、改善冠狀動脈供血等藥理作用[1]，主要是含菲醌類結構的丹參酮類化合物，代表成分為丹參酮I、丹參酮ⅡA和隱丹參酮。丹參中的丹參酮ⅡA含量較高，該成分也是判斷丹參提取物提取效果和丹參藥材品質的重要指標[2]。由于丹參酮ⅡA對光不穩定，且受熱易分解[3]，因此傳統的有機溶劑浸提法存在著有用量大、耗時長、工序多、產率低等問題。超聲波提取法具有提取時間短、無需加熱、產率高、污染少等優點[4～5]。超聲細胞粉碎儀功率高且可調節，相比超聲波清洗器能夠顯著縮短提取時間，探討功率對其提取率的影響，得出的最適工藝參數更具可控性。

本研究通過超聲波細胞粉碎儀從丹參飲片中提取丹參酮ⅡA，以確定最適的提取工藝，旨在為從丹參飲片中提取丹參酮ⅡA提供一個優良、便捷的提取方法，也為合理開發利用丹參資源開辟一條新的途徑。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

丹參飲片購買于四川天然生中藥飲片有限公司。

丹參酮ⅡA對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110766-200518）；乙醇（分析純，成都科龍化工試劑有限公司）。

1.2 主要儀器

JP99-2D超聲波細胞粉碎機（寧波新芝生物科技股份有限公司）；UV-3200PC紫外可見分光光度計（上海美譜達儀器有限公司）；LC-20A高效液相色譜儀系統（日本島津公司），配備SPD-20A型紫外檢測器、SIL-20A型自動進樣器、LC-20AB型輸液泵、CTO-10AS型柱溫箱、DGU-20A3型在線脫氣機；BT-124s分析天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；FW-100萬能粉碎機（天津泰斯特儀器有限公司）；HG-9070電熱恒溫鼓風干燥箱（上海一恒科技有限公司）；Water Purifier實驗室專用超純水機（四川沃特爾科技發展有限公司）。

1.3 丹參酮ⅡA含量測定

1.3.1 色譜條件

色譜柱：Phenomenex C18（250mm×4.6mm，5μm，Torrance，USA）；流動相：甲醇：水（75：25）；檢測波長：270nm；流速：1.0mL·min-1；柱溫：35℃；進樣量：10μL。理論塔板數按丹參酮ⅡA 峰不低于2000。

1.3.2 供試品溶液的制備

取丹參飲片置于60℃烘箱中干燥至質量恒定，粉碎，過篩，儲于干燥器中備用。精確稱取粉末1.000g于50mL具塞的錐形瓶中，加入適當濃度、適當體積的乙醇，密封稱量溶液總質量并記錄，超聲波提取，靜置至室溫，用乙醇補足減失的重量。提取液搖勻、過濾，定容于25.00mL棕色容量瓶中，用孔徑為0.45μm濾膜濾過，即得供試品溶液，待測[2]。

1.3.3 樣品測定

將樣品供試液注入高效液相色譜儀，在色譜條件下進行分析，測得的峰面積代入相應線性方程，并轉化為濃度單位，并按照以下方程計算樣品中丹參酮ⅡA的提取率。

式中：Y為丹參酮ⅡA的提取率（%）；C為由標準曲線得到丹參酮ⅡA的濃度（μg·mL-1）；N為丹參酮ⅡA的稀釋倍數；V為供試品溶液的總體積（mL）；m為丹參飲片粉末質量。

1.4 實驗設計

選取乙醇濃度（A）、顆粒大小（B）、超聲時間（C）、超聲功率（D）為因素，以丹參酮ⅡA的提取率為指標，進行L9（34）正交設計。實驗所得數據采用正交設計助手Ⅱ（專業版）處理，以優選出丹參飲片中丹參酮ⅡA的最佳提取工藝。

2 結果和分析

在料液比固定為1：10的試驗條件下，L9（34）正交試驗與分析結果見表1，方差分析結果見表2。四因素的極差結果（表1）表明，影響超聲波提取丹參酮ⅡA提取率的主次因素為：B（顆粒大小）>A（乙醇濃度）>C（超聲時間）>D（超聲功率），最適提取工藝條件為A1B3C2D2。乙醇濃度對提取效率影響雖然較大，但由于乙醇濃度為40%和50%時，提取效率相差不大，考慮到試劑的回收利用，乙醇濃度為50%較為合適。綜合以上分析結果，以丹參酮ⅡA的提取率為考核指標，確定實際生產工藝條件為A2B3C2D2，即丹參顆粒為60目，提取溶劑為50%乙醇，超聲功率為1000W，超聲時間為4min。

表1 L9（34）正交試驗結果

表2 方差分析

由于此最佳試驗組合未出現在九次試驗方案中，經驗證后丹參酮ⅡA的提取率可達0.5316%。

3 結論與討論

超聲細胞粉碎法提取丹參飲片中丹參酮ⅡA的最適工藝參數為乙醇濃度50%，顆粒大小60目，超聲時間4min，超聲功率1000W。該結果與張瓊引[6]報道的結論：以70%乙醇提取4次，30min/次有所差異，主要原因可能在于其使用的是超聲波清洗器，功率較低，而本研究采用超聲細胞粉碎法提取丹參酮ⅡA，顯著減少提取時間，并考察了超聲功率對丹參飲片中丹參酮ⅡA提取率的影響。因此，本研究可為丹參飲片中丹參酮ⅡA的快速提取及含量分析評價提供方法參考。通過驗證，超聲細胞粉碎法提取丹參飲片中丹參酮ⅡA取得了較好的效果。

[1]高玉貴，宋玉梅，楊友義，唐冀雪，劉文富.丹參酮的藥理[J].藥學學報，1979，14（2）：75～82.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學工業出版社，2015.

[3]林恒標，林恒寬.丹參酮ⅡA 的穩定性研究[J].中醫研究，2005，18（8）：16.

[4]畢躍峰，賈陸，張小娟，孫孝麗，劉宏民.不同提取方法對丹參中丹參酮ⅡA和丹酚酸 B 含量測定的影響[J].藥物分析雜志，2009，29（7）：1209～1212.

[5]Dong J，Liu YB，Liang ZS，Wang WL.Investigation on ultrasound-assisted extraction of salvianolic acid B from Salvia miltiorrhiza root[J].Ultrasonics Sonochemistry，2010，17：61～65.

[6]張瓊引，顧燕.超聲法提取丹參藥材中丹參酮ⅡA的工藝優化[J].中南醫學，2009，12（7）：918～919.

R284

A

1005-7897（2016）10-0097-02

2016-5-10

謝顯莉，女，四川中江人，農藝師，從事經濟作物技術推廣工作。