血清和視網膜下液中氨基酸和VEGF表達水平與孔源性視網膜脫離程度的關系

王　亮，伍　蕓，吳棕伯，劉　偉

?

·臨床論著·

血清和視網膜下液中氨基酸和VEGF表達水平與孔源性視網膜脫離程度的關系

王亮，伍蕓，吳棕伯，劉偉

Department of Ophthalmology, Jingshan People’s Hospital, Jingshan 431800, Hubei Province, China

Correspondence to:Liang Wang. Department of Ophthalmology, Jingshan People’s Hospital, Jingshan 431800, Hubei Province, China. 4702723231@qq.com

Received：2016-01-11Accepted：2016-07-13

?AIM:To analysis the relation of severity of rhegmatogenous retinal detachment with the levels of amino acids and vascular endothelial growth factor (VEGF) in the serum and in subretinal fluid.

?METHODS: Forty-eight patients (52 eyes) with rhegmatogenous retinal detachment treated in our hospital were selected. According to the degree of retinal detachment, patients were divided into <1/2 quadrant group, 1/2-3/4 quadrant group and >3/4 quadrant group. Fifty-five healthy objects for physical examination in our hospital were selected as the control group，to compare the differences of amino acids and VEGF levels in the serum. Correlation analysis on VEGF levels and amino acids in the serum and in subretinal fluid among patients with different grades of rhegmatogenous retinal detachment was conducted.

?RESULTS: In patients with rhegmatogenous retinal detachment, the tryptophan in serum was 28.59±4.46mg/L, phenylalanine 8.95±2.55mg/L, methionine 8.15±2.17mg/L, valine 28.62±5.29mg/L, histidine 18.96±1.85mg/L and VEGF 589.92±185.34μg/L, which were higher than those in the control group, and the difference was statistically significant(P<0.05). The levels of phenylalanine was 9.85±1.21mg/L, histidine 20.63±2.07mg/L and VEGF 718.69±283.34μg/L in the subretinal fluid of >3/4 quadrant group, which were significantly higher than those in the <1/2 quadrant group and 1/2-3/4 quadrant group (P<0.05). VEGF in the subretinal fluid of VEGF in the rhegmatogenous retinal detachment group were positively correlated with phenylalanine (r=0.542,P<0.001), and histidine (r=0.782,P<0.001).

?CONCLUSION: The levels of amino acids and VEGF in the subretinal fluid of patients with rhegmatogenous retinal detachment was higher than those in normals and increased with the severity of retinal detachment.

Citation:Wang L, Wu Y, Wu ZB,etal. Relation of severity of rhegmatogenous retinal detachment with the levels of amino acids and VEGF in the serum and in the subretinal fluid.GuojiYankeZazhi(IntEyeSci) 2016;16(8):1453-1456

摘要

目的：分析血清和視網膜下液中氨基酸和血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)表達水平與研究孔源性視網膜脫離程度關系。

方法：選取本院診斷治療的孔源性視網膜脫離患者48例52眼，根據視網膜脫落范圍分<1/2象限組，1/2～3/4象限組和>3/4象限組，選取同期在我院健康體檢者55例55眼作為對照組，比較孔源性視網膜脫離患者與對照組的血清中氨基酸和VEGF水平的差異。比較孔源性視網膜脫離患者不同脫離程度視網膜下液中氨基酸以及VEGF水平的差異。視網膜下液中VEGF水平與氨基酸的相關分析。

結果：孔源性視網膜脫離患者血清中色氨酸28.59±4.46mg/L、苯丙氨酸8.95±2.55mg/L、蛋氨酸8.15±2.17mg/L、纈氨酸28.62±5.29mg/L、組氨酸18.96±1.85mg/L以及血管內皮生長因子589.92±185.34μg/L高于對照組，且差異有統計學意義(P<0.05)；孔源性視網膜脫離患者脫離程度>3/4象限者視網膜下液的苯丙氨酸9.85±1.21mg/L、組氨酸20.63±2.07、血管內皮生長因子718.69±283.34μg/L高于<1/2象限者和1/2～3/4象限者，且差異具有統計學意義(P<0.05)。孔源性視網膜脫離患者視網膜下液VEGF與苯丙氨酸呈正相關(r=0.542，P<0.001)，與組氨酸呈正相關(r=0.782，P<0.001)。

結論：孔源性視網膜脫離患者的視網膜下液中氨基酸和VEGF的表達高于正常對照組，且隨脫離程度的增加而上升。

關鍵詞：孔源性視網膜脫離；視網膜下液；氨基酸；血管內皮生長因子

引用：王亮，伍蕓，吳棕伯，等.血清和視網膜下液中氨基酸和VEGF表達水平與孔源性視網膜脫離程度的關系.國際眼科雜志2016;16(8):1453-1456

0引言

孔源性視網膜脫離是眼科臨床常見的疾病，其發病機制尚未完全明確，已有的臨床研究認為其是視網膜和玻璃體共同作用的結果，裂孔的形成并不一定導致視網膜脫離，還與玻璃體對裂孔邊緣的牽拉力有關。目前臨床一般首選手術治療孔源性視網膜脫離。雖然近年來隨著眼科手術技術的進步，孔源性視網膜脫離的手術成功率已大大提高，但仍有部分患者無法治愈，甚至導致失明。目前視網膜脫離仍是臨床常見的致盲性眼病[1]。

當視網膜出現裂孔時，玻璃體對孔緣產生牽拉，液化的玻璃體、脈絡膜下滲液等經裂孔進入視網膜下，形成視網膜下積液。在視網膜脫離的過程中，隨著膜降解、糖代謝、蛋白釋放、能量轉換等活動，視網膜下積液的成分也發生轉變。因而對視網膜下積液進行分析有助于評估視網膜功能和患者的視力預后[2]。本研究分析了視網膜下液中氨基酸和血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)表達水平與孔源性視網膜脫離程度的關系，現將結果報道如下。

1對象和方法

1.1對象選取本院診斷治療的孔源性視網膜脫離患者48例52眼，其中男27例30眼，女21例22眼。年齡21～67(平均43.58±11.27)歲。裂孔數目：1個裂孔26例28眼，2個裂孔15例15眼，3個及以上裂孔7例9眼。裂孔位置：顳上象限24例25眼，顳下象限10例11眼，鼻上象限7例9眼，鼻下象限5例5眼，黃斑部2例2眼。根據視網膜脫落范圍分為<1/2象限組，1/2～3/4象限組和>3/4象限組。其中<1/2象限組12例14眼，男9例10眼，女3例4眼，平均年齡41.37±9.58歲；1/2～3/4象限組19例20眼，男11例11眼，女8例9眼，平均年齡42.68±8.72歲；>3/4象限組17例18眼，男7例8眼，女10例10眼，平均年齡44.05±6.42歲；并選取同期在我院健康體檢者55例55眼作為對照組，其中男31例31眼，女24例24眼，年齡26～65(平均44.12±12.54)歲，各組間的年齡和性別比均無統計學差異(P>0.05)。病例納入標準：(1)符合孔源性視網膜脫離診斷標準，并行手術治療且需放視網膜下液的患者。(2)患者的臨床資料齊全。(3)與患者簽訂了知情同意書。對照組納入標準：(1)無眼部疾患的健康體檢者。(2)無全身疾病史的研究對象。(3)研究對象同意采集視血清，并簽訂了知情同意書。排除標準：(1)排除因神經系統、顱腦腫瘤等疾病造成的眼部疾患的患者。(2)排除有全身疾病的患者。

1.2方法

1.2.1樣本采集和檢測在視網膜手術中選擇視網膜下積液最多處作為放液點，切開鞏膜，無菌生理鹽水沖洗、蘸干后脈絡膜穿刺收集視網膜下液。靜置后加入等量20%三氯乙酸，離心后取上清液待測。氨基酸采用日本島津公司高效液相色譜儀檢測。流動相A液：0.5mol/L醋酸鈉緩沖液/甲醇80/20。B液：醋酸鈉緩沖液/甲醇20/80。色譜柱：C18柱：250mm×4.6mm，檢測波長：330nm/420nm。VEGF采用美國Labsystems Dragon公司酶聯免疫測定儀，ELISA試劑盒購自武漢博士德公司。

1.2.2觀察指標和檢查方法比較兩組研究對象血清中色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、亮氨酸、亮氨酸、纈氨酸、精氨酸、組氨酸、丙氨酸、甘氨酸以及VEGF的差異。比較孔源性視網膜脫離患者脫離程度<1/2象限者、1/2～3/4象限者、>3/4象限者視網膜下液的色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、纈氨酸、組氨酸以及VEGF的差異。孔源性視網膜脫離患者視網膜下液VEGF與苯丙氨酸、組氨酸、色氨酸、蛋氨酸、纈氨酸的相關分析。

2結果

2.1兩組患者血清氨基酸和VEGF水平比較孔源性視網膜脫離患者血清的色氨酸28.59±4.46mg/L高于對照組17.35±3.68mg/L，苯丙氨酸8.95±2.55mg/L高于對照組5.42±1.71mg/L，蛋氨酸8.15±2.17mg/L高于對照組3.65±1.24mg/L，纈氨酸28.62±5.29mg/L高于對照組20.45±5.53mg/L，組氨酸18.96±1.85mg/L高于對照組11.23±1.64mg/L，血管內皮生長因子589.92±185.34μg/L高于對照組105.63±64.27μg/L，且差異有統計學意義(P<0.05)；蘇氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、精氨酸、丙氨酸、甘氨酸在兩組間無統計學差異(P>0.05)，見表1。

2.2不同脫離程度孔源性視網膜脫離患者視網膜下液氨基酸和VEGF水平比較孔源性視網膜脫離患者脫離程度>3/4象限者視網膜下液的苯丙氨酸9.85±1.21mg/L高于<1/2象限者6.38±1.52mg/L和1/2～3/4象限者7.65±1.46mg/L，組氨酸20.63±2.07高于<1/2象限者14.55±1.92mg/L和1/2～3/4象限者16.84±2.15mg/L，血管內皮生長因子718.69±283.34μg/L高于<1/2象限者254.62±87.58μg/L和1/2～3/4象限者492.37±192.07μg/L，且差異具有統計學意義(P<0.05)。色氨酸、蛋氨酸、纈氨酸在各象限間無統計學差異(P>0.05)，見表2。

2.3孔源性視網膜脫離患者視網膜下液VEGF和氨基酸水平相關性分析孔源性視網膜脫離患者視網膜下液VEGF與苯丙氨酸、組氨酸呈正相關(r=0.542、0.782，P<0.001)，與色氨酸、蛋氨酸、纈氨酸無相關關系(r=0.153、0.184、0.116，P=0.142、0.091、0.263)，見圖1。

3討論

正常的視網膜是一層排列緊密的組織，視細胞外節組織與視網膜色素上皮細胞的微絨毛緊密嵌合，視網膜色素上皮細胞的能量代謝泵在視網膜下腔形成的有效負壓，維持視網膜的位置正常[3]。孔源性視網膜脫離是由于視網膜裂孔所致，但裂孔的形成并不是引起視網膜脫離的唯一原因，還與玻璃體有關[4]。液化的玻璃體、脈絡膜滲液在重力作用、眼球轉動等因素影響下進入視網膜下腔，玻璃體對視網膜裂孔邊緣產生一定的縱向牽拉力。當視網膜下腔液體量超過維持視網膜正常位置的力量時即導致孔源性視網膜脫離的發生[5]。

有研究認為，液化的玻璃體是視網膜下積液的主要來源，液化的玻璃體進入視網膜下腔后進入脈絡膜循環，脈絡膜回流增加而導致眼壓降低[6]。低眼壓又會反過來促進脈絡膜毛細血管擴張，增加液體滲出，使視網膜下腔積液增加,如此形成一個惡性循環[7]。此外視網膜下積液具有一定的刺激性，可加重視網膜色素上皮層調亡[8]。因此，視網膜下積液除了液化的玻璃體外，還包括脈絡膜毛細血管滲出液，其中含有感光細胞碎片、視網膜色素上皮細胞碎片[9]。由于目前臨床上對于血管內皮生長因子的檢測多采用ELISA法，如視網膜下液中混入血液成分，紅細胞、血小板含有一定量的同工酶，可影響檢測結果的準確性。因此，在取視網膜下液標本時，應注意避免混入血液[10]。

表1　兩組患者血清氨基酸和VEGF水平比較　，mg/L)

表2　不同脫離程度孔源性視網膜患者視網膜下液氨基酸和VEGF水平比較　±s

注：aP<0.05vs<1/2象限，cP<0.05vs1/2～3/4象限。

圖1孔源性視網膜脫離患者視網膜下液VEGF與苯丙氨酸、組氨酸呈正相關A:苯丙氨酸;B:組氨酸。

本研究對孔源性視網膜脫離患者視網膜下液成分進行儀器分析，發現觀察組患者視網膜下液的色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、纈氨酸、組氨酸等氨基酸以及血管內皮生長因子的表達水平高于對照組，且差異有統計學意義(P<0.05)。這一結果提示，孔源性視網膜脫離患者視網膜下液的氨基酸、血管內皮生長因子的表達水平高于正常范圍，可將其作為確診孔源性視網膜脫離的輔助診斷指標。本研究在對不同程度的孔源性視網膜脫離患者的視網膜下液進行對比分析發現，脫離程度>3/4象限者視網膜下液的苯丙氨酸、組氨酸、血管內皮生長因子均高于<1/2象限者和1/2～3/4象限者，且差異具有統計學意義(P<0.05)。這一結果提示，視網膜脫離程度越嚴重，患者視網膜下液的苯丙氨酸、組氨酸、血管內皮生長因子的水平就越高，可將視網膜下液中氨基酸和血管內皮生長因子的表達水平作為孔源性視網膜脫離患者病情嚴重程度的評估指標。相關性分析結果顯示，視網膜下液VEGF與苯丙氨酸、組氨酸呈正相關，提示隨著視網膜脫離的病程進展，眼內組織可能發生了某些代償性變化。

本研究得出如下結論：孔源性視網膜脫落患者的視網膜下液中氨基酸和VEGF的表達高于正常，且隨脫離程度的增加而上升。但本研究僅僅闡明了孔源性視網膜脫離后視網膜下液的氨基酸、血管內皮生長因子等水平的變化規律，但由于孔源性視網膜脫離后視網膜下液的形成機制、對視功能的影響機制等尚未完全明確，對于視網膜下液的氨基酸、血管內皮生長因子等水平升高，究竟是孔源性視網膜脫離的病變原因，還是病變導致的結果尚未明確[11]。氨基酸、血管內皮生長因子水平的變化也不能完全代表視網膜脫離后的神經損傷過程，其它成分在孔源性視網膜脫離患者視網膜下液中的表達尚待更加深入的研究探索[12]。

參考文獻

1葛麗娜，沈麗君，趙振全，等.孔源性視網膜脫離術后黃斑形態和視力的研究.中國實用眼科雜志2012；30(9)：1045-1048

2惠延年.值得重視的眼底病研究熱點與難點：原發性視網膜脫離的治療和手術后視力恢復.中華眼底病雜志2013；29(2)：117-120

3 Gibson R，Fletcher EL，Vingrys AJ，etal.Functional and neurochemical development in the normal and degenerating mouse retina.JCompNeurol2013；521(6)：1251-1267

4關健，劉蕊，萬超，等.玻璃體切割聯合C3F8氣體填充術治療孔源性視網膜脫離的療效分析.中國實用眼科雜志2015；33(8)：909-912

5田超偉，王雨生，蘇曉娜，等.鞏膜外墊壓術治療家族性滲出性玻璃體視網膜病變合并孔源性視網膜脫離.臨床眼科雜志2013；21(6)：484-486

6楊宇，袁敏而，李梓敬，等.家族性滲出性玻璃體視網膜病變相關性孔源性視網膜脫離的臨床特征分析.中華眼底病雜志2015；31(3)：260-262

7劉莎.23-G微創玻璃體手術后早期低眼壓的預防研究.徐州醫學院2013

8禹海，高明宏，李穎，等.累及黃斑的孔源性視網膜脫離手術后黃斑下積液眼黃斑形態變化與視力預后的關系及其影響因素分析.中華眼底病雜志2013；29(2)：136-141

9孟自軍，高永峰，王艷婷，等.孔源性視網膜脫離術后持續性黃斑下積液的相干光斷層掃描觀察與分析.中華眼科雜志2013；49(12)：1075-1080

10任建濤，黃旭東，孫先勇，等.孔源性視網膜脫離視網膜下積液中神經元特異性烯醇酶和S100B濃度的研究.世界中醫藥學會聯合會眼科專業委員會第四屆學術年會、中國中西醫結合學會眼科專業委員會第十二屆中西醫結合學術年會、中華中醫藥學會眼科分會第十二屆中醫眼科學術年會暨山東省第十七次眼科學學術會議論文集2013：510-512

11楊宇，袁敏而，于珊珊，等.家族性滲出性玻璃體視網膜病變相關的孔源性視網膜脫離患者對側眼臨床特征.中山大學學報(醫學科學版)2015；36(2)：313-316

12 Ducournau Y，Boscher C，Adelman RA，etal.Proliferation of the ciliary epithelium with retinal neuronal and photoreceptor cell differentiation in human eyes with retinal detachment and proliferative vitreoretinopathy.GraefesArchClinExpOphthalmol2012；250(3)：409-423

作者單位：(431800)中國湖北省京山縣人民醫院眼科

作者簡介：王亮,畢業于湖北醫藥學院，學士，主治醫生，研究方向：青光眼、視網膜病。

通訊作者：王亮.4702723231@qq.com

收稿日期：2016-01-11 修回日期： 2016-07-13

DOI:10.3980/j.issn.1672-5123.2016.8.12

?KEYWORDS:rhegmatogenous retinal detachment; subretinal fluid;amino acids; vascular endothelial growth factor

Relation of severity of rhegmatogenous retinal detachment with the levels of amino acids and VEGF in the serum and in the subretinal fluid

Liang Wang, Yun Wu, Zong-Bo Wu, Wei Liu

Abstract