誘騙受體3在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清中的檢測及臨床意義

王　信， 王　健， 江　超， 李季青， 郭文靜， 陳琳潔， 李志軍，潘少君

(蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科， 蚌埠　233004；*通訊作者，E-mail：181577518@qq.com)

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誘騙受體3在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清中的檢測及臨床意義

王信， 王健*， 江超， 李季青， 郭文靜， 陳琳潔， 李志軍，潘少君

(蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科， 蚌埠233004；*通訊作者，E-mail：181577518@qq.com)

摘要：目的檢測類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者血清中誘騙受體3(DcR3)的水平，分析其在RA、SLE中的臨床意義。方法收集RA患者血清33例，SLE患者血清35例，健康對照者30名，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定血清中DcR3水平，并分析血清DcR3水平與IFN-γ的相關(guān)性，各組均數(shù)的比較采用ANOVA檢驗；相關(guān)性分析用Spearman相關(guān)性分析。結(jié)果RA患者血清DcR3水平(4 630.03±3 182.24)pg/ml顯著高于健康對照組[(480.53±150.06)pg/ml，P=0.002]及SLE患者組[(1 068.77±881.86)pg/ml，P=0.011]，RA患者血清DcR3水平與IFN-γ水平呈正相關(guān)(rs=0.775，P﹤0.05)。SLE患者血清DcR3水平高于健康對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.167)。結(jié)論DcR3在RA患者血清中表達(dá)增高，且與血清IFN-γ水平變化呈正相關(guān)；DcR3在SLE患者血清中表達(dá)增高但不具統(tǒng)計學(xué)意義。

關(guān)鍵詞：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；系統(tǒng)性紅斑狼瘡；誘騙受體3；γ-干擾素

誘騙受體3(decoy receptor 3，DcR3)是一種新近發(fā)現(xiàn)的腫瘤壞死因子受體(tumor necrosis factor receptor，TNFR)超家庭成員[1]，是一種特殊的細(xì)胞凋亡抑制劑，其配體包括：FasL，TL1A，LIGHT。有研究顯示，DcR3可以通過競爭性結(jié)合FasL，TL1A，LIGHT抑制炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡[2]，也可通過誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞凋亡、促進(jìn)單核細(xì)胞分化等直接調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的活性[3,4]。有研究表明，在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡的血清中DcR3 的表達(dá)都有明顯上升, 并促進(jìn)疾病發(fā)展[5，6]。本研究通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測RA及SLE患者血清中DcR3、IFN-γ的表達(dá)，分析RA、SLE血清DcR3水平與IFN-γ水平之間的相關(guān)性，探討DcR3在RA及SLE中表達(dá)的臨床意義。

1資料與方法

1.1臨床資料

RA及SLE患者血清來源于2014-07～2015-10就診于蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科門診及住院的RA患者33例及SLE患者35例，RA入選患者均符合2010年美國風(fēng)濕病學(xué)會(ACR)修訂的RA分類標(biāo)準(zhǔn)，其中男性13例，女性20例，年齡18-76歲，平均(50±13)歲。SLE患者的入選標(biāo)準(zhǔn)為美國風(fēng)濕病學(xué)會(ACR)1997年修訂的SLE分類診斷標(biāo)準(zhǔn)，男性2例，女性33例，年齡2l-45歲，平均(30±6)歲。RA及SLE均排除伴有其他自身免疫性疾病、超敏反應(yīng)性疾病和腫瘤、移植、感染等免疫相關(guān)疾病的患者。

健康對照組來自蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院職工體檢者，健康對照組的入選標(biāo)準(zhǔn)：肝腎功能、血脂、血常規(guī)、尿常規(guī)、影像學(xué)檢查均正常，并排除有自身免疫性疾病、超敏反應(yīng)性疾病及近期感染史者。其中男性15名，女性15名，年齡23-48歲，平均(36±22)歲。

1.2試劑與儀器

Human DcR3 ELISA Kit(批號：081415 0005)試劑盒、Human IFN-gamma ELISA Kit試劑盒(批號：082815 0131)均購自美國RayBiotech 公司。全自動酶標(biāo)儀IMarK 購自日本BIO-RAD公司。

1.3研究方法

1.3.1標(biāo)本采集清晨空腹采集RA、SLE患者和對照組靜脈全血2 ml，4 ℃放置自然凝固后1 500 r/min離心10 min，分離血清，分裝后置于-20 ℃低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2血清DcR3和IFN-γ測定采用ELISA雙抗體夾心法，按試劑盒說明書操作。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理

2結(jié)果

2.1RA及SLE患者血清DcR3水平

33例RA患者血清DcR3水平為(4 630.03±3 182.24)pg/ml，顯著高于健康對照組[(480.53±150.06)pg/ml，P=0.002]及SLE患者組[(1 068.77±881.86)pg/ml，P=0.011]，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義； 35例SLE患者血清DcR3水平高于健康對照組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.167，見表1)。

2.2RA及SLE患者血清IFN-γ水平

33例RA患者血清IFN-γ水平為(1 342.21±481.92)pg/ml，顯著高于健康對照組[(248.97±62.61)pg/ml，P﹤0.001]及SLE患者組[(425.65±362.07)pg/ml，P﹤0.001]，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義； 35例SLE患者血清IFN-γ水平高于健康對照組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.411，見表1)。

組別nIFN-γDcR3RA組331342.21±481.92*4630.03±3182.24**SLE組35425.65±362.07*1068.77±881.86**健康對照組30248.97±62.61480.53±150.06

與健康對照組比較，*P﹤0.05，**P﹤0.001

2.3RA及SLE患者血清DcR3水平與IFN-γ水平的相關(guān)性分析

RA患者血清DcR3水平與IFN-γ水平呈正相關(guān)(rs=0.775，P﹤0.05，見圖1)。SLE患者血清DcR3水平與IFN-γ水平相比較，兩者間無相關(guān)性(rs=0.290，P=0.092，見圖2)。

圖1　RA患者DcR3濃度與IFN-γ濃度相關(guān)性散點圖Figure 1　Correlation between serum DcR3 and IFN-γ levels in RA patients

圖2　SLE患者DcR3濃度與IFN-γ濃度相關(guān)性散點圖Figure 2　Correlation analysis between serum DcR3 and IFN-γ levels in SLE patients

3討論

誘騙受體3(decoy receptor 3，DcR3)是近年發(fā)現(xiàn)的新型免疫分子，為可溶性腫瘤壞死因子受體(TNFR)超家族成員，目前已知的DcR3配體主要有：FasL，TL1A，LIGHT。DcR3與上述3種配體的親和力依次為:TL1A>FasL>LIGHT[7],DcR3可通過競爭性結(jié)合LIGHT、FasL和TL1A，抑制活化T淋巴細(xì)胞凋亡，或抑制T淋巴細(xì)胞分泌γ-干擾素(IFN-γ)，誘導(dǎo)其向Th2細(xì)胞(Th2)分化，或直接調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的活性，比如促進(jìn)單核細(xì)胞分化為M2型巨噬細(xì)胞和破骨細(xì)胞，誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞凋亡等，從而抑制正常功能受體介導(dǎo)的生物學(xué)功能[8-10]，與多種疾病的發(fā)生和發(fā)展等密切相關(guān)[11]。

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種常見的慢性自身免疫性疾病，可以導(dǎo)致包括外周關(guān)節(jié)在內(nèi)的多系統(tǒng)受累，大量研究顯示在RA的發(fā)病過程中細(xì)胞因子是引起滑膜炎癥與關(guān)節(jié)損傷的重要介質(zhì)，在RA致病中可能起著關(guān)鍵作用。

目前的研究顯示,RA患者體內(nèi)DcR3水平明顯升高，并與IFN-γ、IL-4的表達(dá)呈正相關(guān)。Takahashi等[12]用ELISA的方法檢測RA、骨關(guān)節(jié)炎患者血清及關(guān)節(jié)液中DcR3的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)RA患者血清及關(guān)節(jié)液中DcR3的濃度較骨關(guān)節(jié)炎組明顯升高，但與病情程度未發(fā)現(xiàn)有相關(guān)性。另有研究人員測定了骨關(guān)節(jié)炎患者和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜細(xì)胞中DcR3的 mRNA和蛋白的表達(dá)，結(jié)果表明兩種患者的滑膜細(xì)胞中均有DcR3的表達(dá)，且表達(dá)量基本一致,并發(fā)現(xiàn)將DcR3融合蛋白與滑膜細(xì)胞共孵育可以誘導(dǎo)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞的凋亡[13,14]。周玉秀等[15]分別使用ELISA試劑盒檢測血清DcR3的含量，熒光定量PCR檢測DcR3在外周單核細(xì)胞中mRNA水平，發(fā)現(xiàn)DcR3在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者體內(nèi)會表達(dá)增加，而且隨著病情的加重表達(dá)量會增加。在本實驗中，應(yīng)用ELISA方法檢測了DcR3在RA血清中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)RA患者血清DcR3水平較健康人和系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者顯著升高，且與血清IFN-γ水平顯著相關(guān)，本結(jié)果與周玉秀等[15]及孫可歆等[16]的研究結(jié)果相符。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus, SLE)是一種常見而復(fù)雜的自身免疫性疾病(AID)，大量資料表明，SLE患者體內(nèi)T淋巴細(xì)胞識別自身抗原，參與疾病發(fā)生發(fā)展的各個環(huán)節(jié)。Otsuki等[17]首先在 SLE 患者的外周血單個核細(xì)胞(PBMC)中發(fā)現(xiàn)DcR3 mRNA高表達(dá)。2007年Lee等[18]研究首次證明在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清中DcR3濃度增加, 發(fā)現(xiàn)DcR3在SLE的發(fā)病機(jī)制中的作用可能通過增強(qiáng)T細(xì)胞應(yīng)答,減少已激活T細(xì)胞凋亡。2008年Han等[19]研究發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞起源的DcR3可以導(dǎo)致狼瘡小鼠的發(fā)病，提示血清DcR3檢測可以作為系統(tǒng)性紅斑狼瘡的輔助診斷指標(biāo)。但現(xiàn)有的研究中，SLE患者血清DcR3水平有異議。本研究應(yīng)用ELISA方法檢測DcR3在SLE血清中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)SLE患者血清DcR3水平較健康人升高(P>0.05)，但明顯低于RA血清DcR3水平(P﹤0.05)，且與血清IFN-γ水平無相關(guān)性。與Chokdeemeeboon等[20]研究的結(jié)果相符，但與國內(nèi)某些研究[21，22]結(jié)果不一致。Chokdeemeeboon等[20]研究證明DcR3水平與患者的病情活動度相關(guān)，SLEDAI≥10 的患者組血清中DcR3水平明顯高于病情不活躍組(SLEDAI ≤10)),該研究中有30例標(biāo)本檢測不到DcR3，其中有29例來自病情不活躍組[20]。本研究中SLE患者血清標(biāo)本DcR3水平普遍較低，可能與患者病情活動度不高有關(guān)，另一方面，DcR3參與SLE發(fā)病的機(jī)制可能是多方面的。它可通過抑制LIGHT功能、調(diào)控免疫細(xì)胞數(shù)目和前述的凋亡調(diào)控來影響SLE的發(fā)病，其具體機(jī)制有待進(jìn)一步深入探討。

綜上所述，RA患者血清中DcR 3水平顯著高于正常人群，且與IFN-γ的表達(dá)呈正相關(guān)，DcR3在RA發(fā)病中的作用為其發(fā)病機(jī)制提供了有價值線索，可對疾病的進(jìn)一步治療提供依據(jù)。SLE患者血清中DcR 3水平雖也高于正常人群，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，應(yīng)進(jìn)一步研究其在SLE疾病的發(fā)生發(fā)展中的作用。

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基金項目：蚌埠醫(yī)學(xué)院校自然科學(xué)資助項目(BYKY1460)

作者簡介：王信，女，1986-08生，碩士，住院醫(yī)師，E-mail：273084414@qq.com

收稿日期：2016-04-15

中圖分類號：R593.241

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1007-6611(2016)07-0611-04

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2016.07.007

Clinical significance of detection of serum decoy receptor3 in patients with rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus

WANG Xin, WANG Jian*, JIANG Chao,LI Jiqing, GUO Wenjing, CHEN Linjie, LI Zhijun,PAN Shaojun

(DepartmentofRheumatologyandImmunology,FirstAffiliatedHospitalofBengbuMedicalCollege,Bengbu233004,China；*Correspondingauthor,E-mail：181577518@qq.com)

Abstract：ObjectiveTo investigate serum decoy receptor 3(DcR3) concentration in patients with rheumatoid arthritis(RA) and systemic lupus erythematosus(SLE)，and analyze its clinical significance．MethodsThe serum from 33 RA patients，34 systemic lupus erythematosus(SLE) patients and 30 healthy donators were selected．The serum DcR3 concentration was detected by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)．The correlation between serum DcR3 level and interferon gamma(IFN-γ) with RA and SLE were investigated．ANOVA test and Spearman correlation analysis were used for statistical analysis with software SPSS 13.0. ResultsSerum DcR3 level in RA patients[(4 630.03±3 182.24)pg/ml] was significantly higher than those of the healthy donators[(480.53±150.06)pg/ml,P=0.002] and SLE patients [(1 068.77±881.86)pg/ml,P=0.011]. Serum DcR3 level was positively correlated with IFN-gamma level(rs=0.775,P﹤0.05). Serum DcR3 level in SLE patients was higher than those of healthy donators, but there was no statistically significant difference(P=0.167).ConclusionDcR3 expression increases in serum of RA patients, and is positively correlated with the serum level of interferon-gamma. The increase of serum DcR3 levels in SLE patients has no statistical significance.

Key words:rheumatoid arthritis；systemic lupus erythematosus；decoy receptor 3;interferon-γ