ADIPOR2基因多態(tài)性與動脈粥樣硬化血栓形成性腦梗死的相關性研究

袁　彬，張黎軍，李　青，王超偉

(新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)二科，河南新鄉(xiāng) 453100)

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ADIPOR2基因多態(tài)性與動脈粥樣硬化血栓形成性腦梗死的相關性研究

袁彬，張黎軍，李青，王超偉

(新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)二科，河南新鄉(xiāng) 453100)

目的探討脂聯(lián)素受體2(ADIPOR2)基因多態(tài)性與血清脂聯(lián)素(APN)水平、頸動脈內(nèi)膜中層厚度(IMT)及動脈粥樣硬化性腦梗死風險的相關性。方法采用病例對照研究，選取2009年9月至2014年9月該院收治的動脈粥樣硬化血栓形成性腦梗死患者300例作為觀察組，另選取同期300例體檢健康者作為對照組。收集所有受試者的臨床資料，行頸動脈檢查并測量IMT，檢測血清APN水平，測定ADIPOR2基因rs12342多態(tài)性，比較組間ADIPOR2基因多態(tài)性，分析其與血清APN和IMT的關系。結果AA基因型與GG基因型相比，患動脈粥樣硬化血栓形成性腦梗死的概率增加，差異有統(tǒng)計學意義(OR=1.903，95%CI：1.092～2.703,P=0.011)。與對照組相比，觀察組中各基因型亞組IMT值均升高，APN水平均降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。與GG基因型相比，AA、AG基因型IMT值均升高，APN水平均降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。結論ADIPOR2基因多態(tài)性可能是中國漢族人動脈粥樣硬化性腦梗死發(fā)病的一個基因位點。

動脈粥樣硬化血栓形成性腦梗死；脂聯(lián)素；脂聯(lián)素受體2；單核苷酸多態(tài)性；內(nèi)膜中層厚度

動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是腦梗死發(fā)病機制中一個重要的病理因素。脂聯(lián)素(adiponectin，APN)被認為是一個對機體有保護作用的脂肪因子，APN通過它的特殊受體調節(jié)糖和脂類代謝，從而起到抗動脈粥樣硬化、抗炎，提高胰島素敏感性、能量平衡，以及維持糖和脂肪代謝等重要作用。本研究中，筆者選擇脂聯(lián)素受體2(adiponectin receptor 2，ADIPOR2)的基因rs12342來研究ADIPOR2的基因多態(tài)性與動脈粥樣硬化血栓形成性腦梗死的相關性，并分析ADIPOR2的基因多態(tài)性與血清APN及頸動脈內(nèi)膜中層厚度(intima-media thickness，IMT)之間的關系，旨在探討ADIPOR2與腦梗死發(fā)作風險之間的關系及其作用機制，以期為腦梗死的防治提供新的思路。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2009年9月至2014年9月本院神經(jīng)內(nèi)科收治的發(fā)病24 h以內(nèi)入院的腦梗死患者300例為觀察組，其中男191例，女109例，年齡34～83歲，平均(65.1±11.3)歲；所有患者均符合2007年韓國改良版的TOAST病因分型中動脈粥樣硬化血栓形成型。排除條件：(1)腦栓塞患者；(2)動脈畸形和動脈瘤引起的腦梗死患者；(3)動脈炎、自身免疫性疾病、腫瘤、血液病，肝、腎功能不全及慢性炎癥性疾病患者；(4)入院前30 d內(nèi)無輸血史，2周內(nèi)無服用擴張血管及抗凝藥物史，3周內(nèi)無急性心肌梗死病史者。另選取同期本院體檢健康者300例作為對照組，其中男201例，女99例，年齡35～87歲，平均(65.5±11.1)歲，均無腦梗死及短暫腦缺血發(fā)作病史，其余排除標準同觀察組。納入的所有研究對象均為河南省漢族人，相互間均無血緣關系，近3個月未服用各類降血脂藥物。該研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，所有受試者均簽署知情同意書。

表1　　兩組一般臨床資料比較

1.2方法

1.2.1資料收集詢問所有受試者的吸煙、飲酒及既往病史(高血壓病、糖尿病、高脂血癥)，高血壓、糖尿病分別遵照《中國高血壓防治指南》及《中國糖尿病防治指南》診斷標準，高脂血癥遵照1997年《血脂異常防治建議》診斷標準。

1.2.2頸動脈檢查及分組腦梗死患者于入院當日，健康體檢者于體檢當日在本院B超室行頸動脈檢查。分別觀察雙側頸總動脈起始部，主干及頸動脈分叉部，頸內(nèi)外動脈主干血管內(nèi)膜有無斑塊，以及斑塊性質、數(shù)目、大小。同時，觀察動脈血管管壁內(nèi)膜并測量IMT。

1.2.3血清APN水平測定采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定，嚴格按說明書進行操作。

1.2.4ADIPOR2 rs12342基因多態(tài)性檢測采用限制性片段長度多態(tài)性PCR(PCR-RFLP)對ADIPOR2基因rs12342多態(tài)性進行分析。于患者入院次日清晨，用乙二胺四乙酸鈉(EDTA-Na)抗凝管采集肘靜脈血5 mL，取中層白細胞用于基因組DNA提取。提取基因組DNA后，PCR擴增出目的基因片段，產(chǎn)物長度為387 bp，上游引物5′-CAA GGG CAA GGG AGG AAA-3′，下游引物5′-CAG GGA GTG AGG TAC AAG ACG A-3′。以DNA標記物為DNA片段長度標記，采用150 mV電壓電泳45 min，最終確定目的片段的長度。酶切產(chǎn)物以2%瓊脂糖凝膠電泳。

2　結　　果

2.1兩組一般臨床資料比較兩組年齡、性別和體質量指數(shù)(BMI)比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；而觀察組吸煙、飲酒率，以及高血壓、糖尿病、高脂血癥發(fā)生率均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。見表1。

2.2兩組ADIPOR2 rs12342基因型和等位基因頻率分布比較經(jīng)擬合優(yōu)度χ2檢驗，基因型和等位基因頻率在兩組間的分布均符合Hardy-Weinberg平衡。rs12342基因型和等位基因頻率的分布在兩組間比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。觀察組rs12342 AA基因型頻率高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),而兩組rs12342 AG、CG基因型頻率比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；觀察組A等位基因頻率高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表2。

2.3ADIPOR2基因多態(tài)性與腦梗死的風險分析與GG基因型相比，AA基因型患動脈粥樣硬化血栓形成性腦梗死的風險增高，差異有統(tǒng)計學意義(OR=1.835，95%CI：1.397～2.691，P=0.012)；校正性別、年齡、BMI、吸煙史、飲酒史、糖尿病、高血壓，以及其他一些混雜因子的影響，AA基因型患動脈粥樣硬化血栓形成性腦梗死的風險仍然增高，差異有統(tǒng)計學意義(OR=1.903，95%CI：1.092～2.703，P=0.011)。提示rs12342 AA基因型是動脈粥樣硬化血栓形成性腦梗死的獨立危險因素，患病風險增加至1.903倍。與GG基因型相比，AG基因型患動脈粥樣硬化血栓形成性腦梗死的概率無明顯上升(OR=1.310，95%CI：0.698～2.754)，差異無統(tǒng)計學意義(P=0.372)；校正性別、年齡、BMI、吸煙史、飲酒史、糖尿病、高血壓，以及其他一些混雜因子的影響，AG基因型患動脈粥樣硬化血栓形成性腦梗死的概率仍無明顯上升(OR=1.397，95%CI：0.746～2.195)，差異無統(tǒng)計學意義(P=0.774)。見表3。

表2　　兩組ADIPOR2 rs12342基因型和等位基因頻率分布比較

表3　　ADIPOR2基因多態(tài)性與腦梗死的風險分析

表4　　觀察組及其基因型亞組與對照組IMT及APN水平比較

*：P<0.01，與對照組比較；#：P<0.01，與AA亞組比較；△：P<0.01，與AG亞組比較。

2.4觀察組及其基因型亞組與對照組IMT及APN水平比較觀察組IMT及APN水平與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。與對照組比較，觀察組中各基因型亞組IMT均升高，APN水平均降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；采用方差分析顯示，觀察組中各基因型亞組IMT及APN水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義(F值分別為20.239、163.214，P<0.01)；AA、AG基因型較GG基因型IMT均增加，APN水平均降低，兩兩比較各基因型間IMT及APN水平，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表4。

3　討　　論

APN是脂肪細胞分泌的一個脂肪因子，是脂肪組織特有的基因apMI的產(chǎn)物[1]。APN能夠干擾動脈粥樣硬化的形成，APN的該項功能經(jīng)由多種機制抑制血管的炎性反應而實現(xiàn)[2]。有研究顯示，APN在培養(yǎng)的動脈內(nèi)皮細胞中，能夠降低血管黏附因子在動脈內(nèi)皮細胞的表達，而且該作用呈現(xiàn)劑量依賴性；同時，APN可抑制動脈血管泡沫細胞的生成和平滑肌細胞的增殖。因此，認為APN具有抑制動脈粥樣硬化形成的作用[3]。本研究發(fā)現(xiàn)，患者血清APN水平與IMT呈負相關，即隨著血清APN水平下降，它對動脈粥樣硬化的抑制作用減弱。

APN能夠維持糖和脂類代謝，同時具有抗炎、抗動脈粥樣硬化等作用[4]。本研究結果顯示，動脈粥樣硬化血栓形成性腦梗死患者血清APN水平明顯下降，與相關研究報道一致[4]。APN的抗炎、抗動脈粥樣硬化作用，通過它的特殊受體調節(jié)糖和脂類代謝實現(xiàn)[4]。脂聯(lián)素受體是APN發(fā)揮各種生物效應的關鍵蛋白，它們在人體的多種組織和器官中廣泛表達[5-7]。研究發(fā)現(xiàn)，脂聯(lián)素受體和糖尿病、代謝綜合征、冠心病有密切關系[8]，它們能夠影響細胞的代謝和功能，在疾病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[9]。

ADIPOR2 基因編碼的ADIPOR2蛋白包含387個氨基酸[10]。rs12342位于ADIPOR2基因的3′非翻譯區(qū)(3′UTR)。在本研究中，筆者發(fā)現(xiàn)AA基因型和A等位基因攜帶者動脈粥樣硬化血栓形成性腦梗死的患病風險增加。究其原因，可能是由于APN和動脈粥樣硬化密切相關。最近的全基因組關聯(lián)研究發(fā)現(xiàn)，在ADIPOR2基因所在的染色體12p13有一個部位增加發(fā)生動脈粥樣硬化性腦梗死的風險[11]。在關于中國和阿米西人的研究中發(fā)現(xiàn),rs12342上A等位基因和AA基因型增加了2型糖尿病的發(fā)生風險[12]。Richardson等[12]發(fā)現(xiàn)，rs12342 AA基因型攜帶者三酰甘油水平比GG基因型攜帶者明顯增高，表明rs12342的基因型可能影響脂質代謝。本研究發(fā)現(xiàn)，ADIPOR2 rs12342 AA基因型患者APN水平下降，頸動脈粥樣硬化的程度明顯增加，患腦梗死的風險明顯增加。

rs12342的基因多態(tài)性與缺血性卒中的發(fā)病率相關，其機制尚未明確,rs12342多態(tài)性位于ADIPOR2基因的3′UTR，3′UTR單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)不能引起氨基酸順序的變化，但是在mRNA轉錄過程的很多方面，如翻譯后修飾、細胞內(nèi)定位和轉運中起到很重要的作用，以維持和確保mRNA翻譯有效進行，若發(fā)生變異能夠影響一個或多個基因的表達，從而導致疾病的發(fā)生。

這個位點可能通過上述機制影響ADIPOR2受體的表達及其功能，并且影響APN發(fā)揮其生物效應，從而促進動脈粥樣硬化的形成，最終增加腦梗死的發(fā)病風險。此外，這個位點可能和其他連鎖不平衡的SNPs有關，共同作用引起受體活性的改變。這一推論也需要大樣本量的研究來證實。突變的分子機制引起缺血性中風需要更進一步的深入研究。

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Study on correlation between genetic polymorphisms of ADIPOR2 with atherothrombosis cerebral infarction

YuanBin，ZhangLijun，LiQing，WangChaowei

(SecondDepartmentofNeurology,FirstAffiliatedHospitalofXinxiangMedicalUniversity,Xinxiang,Henan453100,China)

ObjectiveTo explore the relationship between genetic polymorphisms of ADIPOR2 with serum APN level,intima-media thickness(IMT)and atherothrombosis cerebral infarction risk.MethodsThe case control study was adopted,300 patients with atherothrombosis cerebral infarction in our hospital from September 2009 to September 2014 were selected as the observation group,meanwhile contemporaneous 300 individuals undergoing the physical examination were selected as the control group.The clinical data in all the subjects were collected and performed the carotid arterial examination,the serum APN level was detected,the rs12342 polymorphism of ADIPOR2 gene was detected.The genetic polymorphisms of ADIPOR2 were compared between the two groups and its relationship with serum APN and IMT was analyzed.ResultsThe probability for suffering from atherothrombosis cerebral infarction in the AA genotype was increased compared with the GG genotype,the difference was statistically significant(OR=1.903，95%CI：1.092-2.703,P=0.011).Compared with the control group,the IMT values in various subgenotype groups of the observation group were elevated,while the APN levels were decreased,the differences were statistically significant(P<0.01).Compared with the genotype GG,the IMT values in the genotype AA and AG were increased and APN levels were decreased,the differences were statistically significant(P<0.01).ConclusionGenetic polymorphisms of ADIPOR2 maybe a genetic locus for the pathogenesis of Chinese Han people of atherothrombosis cerebral infarction.

atherothrombosis cerebral infarction；adiponectin；adiponectin receptor 2；single nucleotide polymorphism；intima-media thickness

袁彬(1972-)，主任醫(yī)師，博士，主要從事腦血管疾病研究。

R743.3

A

1671-8348(2016)21-2936-03

2016-01-15

2016-04-02)

論著·臨床研究doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.21.017