不同營養液配方對山葡萄幼苗生長的影響

王紅霞，廉 博

(呼倫貝爾市農業技術推廣服務中心，內蒙古海拉爾 021008)

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不同營養液配方對山葡萄幼苗生長的影響

王紅霞，廉 博

(呼倫貝爾市農業技術推廣服務中心，內蒙古海拉爾 021008)

[目的] 研究山葡萄嫩莖段愈傷組織離體培養最佳配方。[方法]以山葡萄優良母株新生枝條嫩梢為外植體，觀察山葡萄在IAA和NAA不同濃度下芽的分化、繼代與生根情況。[結果]在相同條件下，不同濃度IAA和NAA對山葡萄的芽分化、繼代與生根影響顯著。芽分化NAA濃度為0.05 mg/L的時候效果最好，愈傷組織中等，分化出的芽較多。繼代IAA濃度為 0.10 mg/L的時候效果最好，生長旺盛，繁殖倍數較高。生根NAA濃度為 0.10 mg/L的時候效果最好，根粗壯，生根率高。[結論]該研究結果可為山葡萄離體培養奠定基礎。

山葡萄；IAA；NAA；芽分化

山葡萄是葡萄科葡萄屬落葉藤本植物，其含有豐富的碳水化合物、蛋白質、維生素和礦物質，生食可口，味酸甜，富含漿汁，是美味的山間野果[1]。山葡萄可作為葡萄酒釀造的原料，用其所釀的葡萄酒深紅艷麗，風味品質甚佳。我國自20世紀50年代開始研究山葡萄人工馴化栽培并獲得成功。山葡萄苗木常規的繁殖方法有嫁接繁殖、壓條繁殖和扦插繁殖，但嫁接繁殖受接穗來源限制，壓條繁殖系數低，扦插繁殖不易生根[2]。筆者擬采用組織培養的手段來繁殖和培育山葡萄[3-10]，篩選出適合的培養基，以期為山葡萄進一步快繁和大規模工廠化繁殖提供有效途徑。

1　材料與方法

1.1材料以野生山葡萄為材料，取其優良母株新生枝條嫩梢作為外植體材料。

1.2方法

1.2.1外植體消毒。于2014年5月18日在中國農業大學農學院組培實驗室對野生山葡萄優良母株新生枝條嫩梢進行愈傷組織誘導試驗，先用清水洗去外植體表面的殘留，再浸泡1～2 h，裝到無菌瓶中，放到無菌工作臺上，用70%酒精浸泡15 s，無菌水沖洗2～3次，用0.1%HgCl2進行表面消毒8～10 min，無菌水沖洗4～5次，在無菌條件下剝去鱗片與幼葉，切取0.3～0.5 m長的莖尖，接種于培養瓶中。

1.2.2培養條件。基本培養基為MS，加20 g/L蔗糖、720 g/L瓊脂，pH 5.6～5.8，培養溫度24 ℃，每日光照16 h，光強2 000 lx，濕度70%～80%。

1.3試驗設計

1.3.1不定芽誘導培養。 該試驗設4個處理：I.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.010 mg/L +LH 100 mg/L；II.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.005 mg/L +LH 100 mg/L；III.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.020 mg/L +LH 100 mg/L；IV.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.050 mg/L +LH 100 mg/L，每個處理重復3次，每次重復20瓶，每瓶接6個外植體。

為了促進愈傷組織的形成和芽分化，可將接種于培養基I～IV上的外植體先放置于黑暗中處理48～60 h，然后置于2 000 lx光照下，經35～40 d愈傷組織誘導出芽。

1.3.2繼代培養。該試驗設4個處理：V.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.10 mg/L +GA 30.2 mg/L；VI.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.05 mg/L +GA 30.2 mg/L；VII.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.20 mg/L +GA 30.2 mg/L；VIII.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.50 mg/L +GA 30.2 mg/L，每個處理重復3次，每次重復20瓶。將高5 cm以上的山葡萄試管苗切段(帶1～2個側芽)接種于繼代培養基V～VIII上進行繼代增殖。當芽分化較多時，會影響莖的伸長，成苗率會降低，此時宜先將叢生芽切下接種于繼代培養基上，使其成苗后再進行切段培養。

1.3.3生根培養。選擇NAA和IAA作為誘導生根的因素，該試驗設5個處理：IX.1/2 MS+NAA 0.10 mg/L；X.1/2 MS+NAA 0.20 mg/L；XI.1/2 MS+NAA 0.05 mg/L；XII.1/2 MS+IAA 0.10 mg/L；XIII.1/2 MS+IAA 0.05 mg/L，每個處理重復3次，每次重復20瓶。

在繼代培養中，切下莖段可接種于生根培養基IX～XIII上進行生根培養。

1.4調查指標及方法接種后，每隔5～8 d觀察并統計愈傷組織分化情況，生根數、生根率、根生長等指標。

2　結果與分析

2.1芽分化情況由表1可知，接種于培養基IV上的莖尖，愈傷組織中等，平均分化出芽5.0個；接種于培養基I上的莖尖，愈傷組織較大，平均分化出芽0.5個；接種于培養基III上的莖尖，愈傷組織過大，平均分化出芽1.5個；接種于培養基II上的外植體形成愈傷組織很小，外植體啟動困難，沒有分化出芽。

表1不同營養液配方對芽分化的影響

Table 1Effects of different nutrient solution formulas on the bud differentiation ofV.amurensis

培養基Medi-um芽分化情況Buddifferentiation愈傷組織情況CallusI++ 較大II- 無 III+ 過大IV++++中等

注：- 沒有生長；+生長緩慢；++生長較顯著；++++生長旺盛。

Note：-，+，++，and ++++ mean not growing，growing slowly，growing obviously，and growing luxuriantly respectively.

2.2莖段增殖從生長情況看，接種于培養基V上莖段或芽生長快，且同時生出粗壯根系，根與莖同時生長，苗形態正常，生長健壯，繁殖系數可達3.5～4.0；接種于培養基VII上的莖段或芽也長出較多根系，生長情況較好；接種于培養基VIII上的莖段或芽生長較差，繁殖系數較低。

表2不同營養液配方對莖段生長情況的影響

Table 2Effects of different nutrient solution formulas on the growth ofV.amurensis

培養基Medium生長情況Growthstate繁殖系數ReproductioncoefficientV++++3.5～4.0VI+ 無VII+++ 2.0～3.0VIII++ 1.0～2.0

注：- 沒有生長；+生長緩慢；++生長較顯著；++++生長旺盛。

Note：-，+，++，and ++++ mean not growing，growing slowly，growing obviously，and growing luxuriantly respectively.

2.3生根情況從生根情況看，以接種于培養基X上的莖段生根最多，但根細長，試管苗移栽時不易成活；接種于培養基XI、XII和XIII上的莖段生根數較少，根細弱；接種于培養基IX上的莖段生根數適中，根粗壯，生根率也高，該培養基為最佳配方，即莖段生根以1/2 MS+NAA 0.10 mg/L為宜。

表3不同營養液配方對生根情況的影響

Table 3Effects of different nutrient solution formulas on the root growth ofV.amurensis

培養基Medium生根數Numberofroots∥條生根率Rootingrate∥%生長情況GrowthstateIX3～7100粗壯X10以上85細長XI2～575細長或粗壯XII2～370細、短XIII1～245細、短

3　結論

用莖尖組織培養方法進行山葡萄快速繁殖，可保持品種優良性狀，縮短推廣時間。在進行莖尖誘導時，6-BA單獨使用效果要好。在1/2 MS+6-BA l.0 mg/L+NAA 0.050 mg/L+LH 100 mg/L培養基中，愈傷組織中等，分化出的芽較多。為了提高莖尖成活率，可適當將莖尖切至0.5～1.0 mm，但莖尖切取過大，繁殖系數會降低。繼代培養以1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L+IAA 0.10 mg/L+GA 30.2 mg/L(肌醇用量為50 mg/L)為宜，此時生長旺盛，繁殖系數較高。生根培養以1/2 MS+NAA 0.10 mg/L為宜，此時根粗壯，生根率高。繼代培養和生根培養同時進行，這樣可縮短試管苗培養時間，移栽易成活，繁殖系數一般很高。

[1] 高金輝，王玲，張厚良，等.山葡萄組織培養方法[J].東北林業大學學報，2007，35(7)：37-39.

[2] 王軍，宋潤剛.野生果樹栽培及加工技術[M].北京：中國農業技術出版社，2001：13-14.

[3] 王軍，葛玉香，包怡紅.東北山葡萄品種特性比較[J].東北林業大學學報，2004，32(1)：29-31.

[4] 鞏振輝，申書興.植物組織培養[M].北京：化學工業出版社，2007：68-69.

[5] 崔鵬，高秀宇，李波，等.葡萄組織培養中愈傷組織的誘導[J].湖北農業科學，2012，51(4)：827-830.

[6] 馮敏.簡化葡萄組培方法的探討[J].甘肅農業科技，1992(4)：22-23.

[7] 顧沛雯，龔玉梅，關曉慶.葡萄莖尖培養及快速繁殖技術研究[J].中外葡萄與葡萄酒，2002(4)：16-18.

[8] 張炳華，張宏，孫連玉，等.葡萄組織培養快速繁殖的研究[J].煙臺果樹，1995(1)：11-12.

[9] 張劍俠，王賀飛，徐炎，等.中國野生葡萄組織培養研究[J].西北植物學報，2003，23(3)：460-461.

[10] 張建華，莊天明，孫占剛，等.華佳8號葡萄離體繁殖技術的研究[J].上海交通大學學報(農業科學版)，2004，22(3)：309-312.

Influences of Different Nutrient Solution Formulas on Seedling Growth ofVitisamurensisRupr.

WANG Hong-xia, LIAN Bo

(Hulunbeir Agricultural Technology Extension and Service Center, Hailar, Inner Mongolia 021008)

[Objective] To discuss the optimum formula for the in vitro culture of tender stem callus ofVitisamurensisRupr. [Method] Newborn branch tops of good maternal plants ofV.amurensiswere used as explants, and the bud differentiation, subculture and root growth ofV.amurensiswere analyzed under different concentrations of IAA and NAA. [Result] Under the same conditions, different concentrations of IAA and NAA had obvious effects on the bud differentiation, subculture and root growth ofV.amurensis. When NAA concentration was 0.05 mg/L, callus was moderate, and there were more buds. As IAA concentration was 0.10 mg/L, it grew well, and the breeding rate was high. When NAA concentration was 0.10 mg/L, its roots were thick, and the rooting rate was high. [Conclusion] The study can lay the foundation for the in vitro culture ofV.amurensis.

VitisamurensisRupr.; IAA; NAA; Bud differentiation

王紅霞(1981-)，女，內蒙古烏蘭察布人，農藝師，從事農業推廣工作。

2016-05-09

S 663.1

A

0517-6611(2016)19-263-02