Sox9 mRNA在軟骨肉瘤去分化過程中的意義

劉百奇，孟祥龍，張　昊，車德馨，王國文，韓金剛（.齊齊哈爾市第一醫院急診創傷外科，黑龍江6005；.天津醫科大學附屬腫瘤醫院骨與軟組織腫瘤科，天津300060）

Sox9 mRNA在軟骨肉瘤去分化過程中的意義

劉百奇1，孟祥龍1，張昊1，車德馨1，王國文2，韓金剛1（1.齊齊哈爾市第一醫院急診創傷外科，黑龍江161005；2.天津醫科大學附屬腫瘤醫院骨與軟組織腫瘤科，天津300060）

目的探討Sox9 mRNA在軟骨肉瘤去分化過程中所起的作用，并分析其與各臨床病理參數的關系。方法利用免疫組織化學方法檢測Sox9 mRNA在人普通軟骨肉瘤與去分化軟骨肉瘤間的差異表達及其與臨床病理參數的關系。結果與正常軟骨組織比較，Sox9 mRNA在普通軟骨肉瘤中表達上調，在去分化軟骨肉瘤中表達下調；Sox9 mRNA在軟骨肉瘤各分級之間表達水平比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；Sox9 mRNA的陽性表達差異與年齡、性別、部位無關（P＞0.05），而與肺轉移、有無復發有關，且肺轉移及復發者陽性率明顯高于無肺轉移、無復發者，差異有統計學意義（P＜0.01）。結論Sox9 mRNA與軟骨肉瘤的發生、發展、轉移及預后有關。

軟骨肉瘤；免疫組織化學；細胞去分化；腫瘤復發；腫瘤轉移；預后

Sox9 mRNA是許多組織和器官發生、發展所需的重要基因，也是軟骨細胞分化和軟骨形成的重要轉錄因子［1-2］。Sox9 mRNA已被確定在軟骨肉瘤中表達［3］，但對其在軟骨肉瘤中的表達差異及在軟骨肉瘤發生、發展中所起作用的研究甚少。軟骨肉瘤中約90%是普通型軟骨肉瘤，惡性程度屬于低、中度，去分化軟骨肉瘤是在低度惡性軟骨肉瘤或內生軟骨瘤的基礎上，出現了含有骨肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤等高度惡性成分的腫瘤。普通軟骨肉瘤一般預后較好，而多數去分化軟骨肉瘤患者死于廣泛轉移。如何提高軟骨肉瘤患者生存率、減少復發轉移是臨床醫生急需解決的難題。檢測Sox9 mRNA在不同分型軟骨肉瘤中的表達差異有助于揭示其與腫瘤發生、發展、預后的關系，為靶向治療提供可能性。本研究利用分子生物學手段檢測Sox9 mRNA在不同分型軟骨肉瘤組織標本中的表達差異，為軟骨肉瘤去分化后進展快、預后差提供理論依據，并為軟骨肉瘤的診斷、治療提供新方法。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1組織來源軟骨肉瘤石蠟包埋標本來自天津市腫瘤防治重點實驗室，經病理檢查確診，其中包括普通軟骨肉瘤組織標本20例，去分化軟骨肉瘤組織標本20例；另有正常軟骨組織標本20例。

1.1.2試劑Sox9mRNA兔多克隆抗體（Santacruz公司）；鏈霉素抗生物素-過氧化物酶（SP）免疫試劑盒（Sigma公司）。DAB顯示試劑盒（北京中杉金橋生物技術有限公司）。

1.2方法

1.2.1操作方法將蠟塊進行常規切片、脫蠟、水化、抗原修復等處理，嚴格按照SP免疫試劑盒要求操作。Sox9 mRNA陽性細胞主要定位于細胞質及細胞膜。根據染色細胞陽性比例及染色強度，用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對照。

1.2.2結果判定免疫組織化學陽性率計算方法：每張切片在400倍光學顯微鏡下隨機選取10個高倍視野，以陽性細胞比例的平均值為陽性率，然后對結果進行評分：陽性率小于或等于10%為0分，＞10%～25%為1分，＞25%～50%為2分，＞50%為3分；再按染色強度加以評分：無染色為0分，淺黃色為1分，棕褐色為2分，深褐色為3分。將二者相乘作為最后評分：0分記為陰性，≥1分記為陽性。最終分別計算出Sox9mRNA在正常軟骨、普通軟骨肉瘤、去分化軟骨肉瘤中表達的陽性率，以及Sox9 mRNA在不同臨床參數間表達的陽性率。

1.3統計學處理應用SPSS19.0統計軟件進行數據分析，軟骨肉瘤不同分級中Sox9 mRNA的表達差異采用Kruskal-Wallis秩和檢驗（H檢驗），各臨床參數間Sox9 mRNA表達差異采用χ2檢驗。檢驗水準α=0.05，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結　果

2.1Sox9 mRNA在軟骨肉瘤組織和正常軟骨組織中的表達在正常軟骨組織中，Sox9 mRNA基本存在于軟骨細胞核中；在普通軟骨肉瘤和去分化軟骨肉瘤中，Sox9 mRNA基因除在細胞核中表達外，細胞質內也有少量表達。在普通軟骨肉瘤中，Sox9 mRNA表達水平高于正常軟骨組織，在去分化軟骨肉瘤中，Sox9 mRNA表達水平低于正常軟骨組織。與正常軟骨組織比較，Sox9 mRNA在普通軟骨肉瘤中表達上調，在去分化軟骨肉瘤中表達下調。見圖1。

圖1　Sox9 mRNA在不同類型軟骨肉瘤組織和正常軟骨組織中的表達（SP法，400×）

2.2Sox9 mRNA在軟骨肉瘤各分級中的表達Sox9 mRNA在20例正常軟骨組織中表達11例，陽性率為55.0%；在20例普通軟骨肉瘤中表達18例，陽性率達90.0%；在20例去分化軟骨肉瘤中的表達8例，陽性率僅為40.0%。經統計分析，Sox9 mRNA在軟骨肉瘤各分級之間表達水平比較，差異有統計學意義（H=9.077，P＜0.05）。見表1。

表1　Sox9 mRNA在軟骨肉瘤各分級中的表達

2.3軟骨肉瘤中Sox9 mRNA與臨床參數之間關系

40例軟骨肉瘤標本中，Sox9 mRNA陽性表達26例，總陽性率為65.0%。進一步分析發現，Sox9mRNA的陽性表達差異與年齡、性別、部位無關（P＞0.05），與肺轉移、有無復發有關，且肺轉移及復發者陽性率明顯高于無肺轉移、無復發者（P＜0.01）。見表2。

表2　軟骨肉瘤中Sox9 mRNA與臨床參數之間關系

3　討　論

軟骨肉瘤是由軟骨發生的惡性骨腫瘤，是繼骨肉瘤之后第二常見的原發性惡性骨腫瘤，約占原發性骨惡性腫瘤的40%，具有極其復雜的臨床病理特征［4］。軟骨肉瘤通常發生在10～80歲的男性，腫瘤一般通常出現在肩胛骨、肋骨、胸骨或骨盆等部位［5］，其對化療和放射治療不敏感［6］，所以廣泛的局部切除仍是目前主要的治療方式。部分患者通常在手術切除后，因局部侵犯及遠處轉移預后較差［7］，其生存率與尤文氏肉瘤和骨肉瘤相比顯著下降［8］。普通軟骨肉瘤預后一般較好，5年生存率可達60%，去分化軟骨肉瘤預后較差，患者多死于廣泛的遠處轉移。Sox9 mRNA是軟骨形成過程中一個非常重要的調節蛋白，指導軟骨特異性基因的表達，從而調節軟骨組織的發育生長。最近研究報道顯示，Sox9 mRNA基因功能喪失可導致人類軟骨肉瘤細胞凋亡，說明在軟骨肉瘤中Sox9 mRNA發揮著致癌的作用［9］。Sox9 mRNA在多種類型的腫瘤中可增加腫瘤細胞增殖、入侵、遷移的能力［10］，多種生存和預后較差的實性瘤體與Sox9mRNA的過度表達相關［11-12］。

本研究應用免疫組織化學方法探討不同分級軟骨肉瘤之間Sox9mRNA基因表達差異，結果顯示，Sox9mRNA表達在去分化軟骨肉瘤和普通軟骨肉瘤之間存在顯著性差異。與正常軟骨組織比較，Sox9 mRNA在普通軟骨肉瘤組織中高表達，而在去分化軟骨肉瘤組織中低表達，而且這種差異表達與腫瘤的肺轉移、復發相關。這可能也是去分化軟骨肉瘤和普通軟骨肉瘤預后不同的原因之一。但Sox9 mRNA基因在軟骨肉瘤的發生、發展及去分化過程中所起的具體作用尚不清楚，需進一步研究證實。因此，從目前得到的信息來看，有效控制和干擾Sox9 mRNA的表達可能抑制腫瘤的發生和發展。

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［7］Tsou HK，Chen HT，Hung YH，et al.HGF and c-Met interaction promotes migration in human chondrosarcoma cells［J］.PLoS One，2013，8（1）：e53974.

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Significance of Sox9 mRNA in dedifferentiation process of chondrosarcoma

Liu Baiqi1，Meng Xianglong1，Zhang Hao1，Che Dexin1，WangGuowen2，HanJingang1（1.Department of Emergency Trauma Surgery，Qiqihaer Municipal First Hospital，Heilongjiang 161005，China；2.Department of Bone and Soft Tissue Tumor，Affiliated Tumor Hospital of Tianjin Medical University，Tianjin 300060，China）

ObjectiveTo investigate the role of Sox9 mRNA in differentiation process of chondrosarcoma，and to analyze its relation with clinical pathological parameters.MethodsThe expression difference of Sox9 mRNA between common chondrosarcoma and differentiated chondrosarcoma and its relation with the clinical pathological parameters were detected by using the immunohistochemical method.ResultsCompared with normal cartilage tissue，Sox9 mRNA was up-regulated in common chondrosarcoma and down-regulated in differentiated chondrosarcoma；the Sox9 mRNA expression level had statistical difference among different grades of chondrosarcoma（P＜0.05）；the positive difference of Sox9 mRNA expression had no relation with the age，gender and site（P＞0.05），while had relation with the lung metastasis and recurrence，moreover the positive rate in the patients with lung metastasis and recurrence was significantly higher than that in the patients without lung metastasis and recurrence，the difference was statistically significant（P＜0.01）.ConclusionSox9 mRNA is related with occurrence，progression，metastasis and prognosis of chondrosarcoma.

Chondrosarcoma；Immunohistochemistry；Cell dedifferentiation；Neoplasm recurrence；Neoplasm metastasis；Prognosis

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.15.006

A

1009-5519（2016）15-2292-02

劉百奇（1980-），碩士研究生，主治醫師，主要從事骨外科臨床工作。

（2016-03-11）