砂燙生附片與炮附片制備前后6種生物堿的變化

陳 炯， 譚 鵬， 吳月嬌， 秦語欣， 王 蕾， 李 飛（北京中醫藥大學，北京100102）

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砂燙生附片與炮附片制備前后6種生物堿的變化

陳 炯， 譚 鵬， 吳月嬌， 秦語欣， 王 蕾， 李 飛*
（北京中醫藥大學，北京100102）

目的 研究砂燙生附片代替炮附片 （砂燙黑順片）的可能性。方法 泥附子切片制成生附片后砂燙，并觀察其外觀性狀。HPLC法測定單酯型 （苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿）和雙酯型 （新烏頭堿、烏頭堿、次烏頭堿）生物堿總含有量。結果 兩種炮制品外觀性狀均無明顯差異。砂燙生附片制備前雙酯型生物堿總含有量為0.067 5%，制備后降為0.001 5%；炮附片制備前后均檢測不到。砂燙生附片制備前單酯型生物堿總含有量為0.014 1%，制備后增至0.038 2%；炮附片制備前為0.019 5%，制備后降為0.011 4%。兩者均符合 《中國藥典》要求 （雙酯型生物堿總含有量不得超過0.020%）。結論 砂燙生附片 （仲景制法）具有低毒高效的特點，值得深入研究。

生附片；炮附片；砂燙；生物堿；HPLC

附子為毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaelii Debx.子根的加工品，具有回陽救逆、補火助陽、散寒止痛的功能［1］，其為有毒中藥，一般炮制后使用［2］。張仲景所著 《傷寒論》中附子的炮制要求為 “炮，去皮臍，破八片”，有人考證后認為，“炮”是將中藥包裹后在火中燒［3-7］，而 《中國藥典》2010年版 （以下簡稱藥典）收載的炮附片（砂燙黑順片）制備方法為砂燙。本實驗對張仲景使用附子的腳注進行分析，認為其炮制對象為生附子，“炮”法的實質是干熱，包裹后加熱是為了炮制過程中中藥受熱更為均勻，故采用藥典炮附片的炮制方法，以河砂代替包裹物作為中間傳熱體，制備砂燙生附片，并與炮附片從外觀性狀、3種雙酯型 （新烏頭堿、烏頭堿、次烏頭堿）和3種單酯型 （苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿）生物堿含有量進行比較研究，分析其科學價值。

1　材料與試劑

1.1儀器 CGQ-750Z型自控溫鼓式炒藥機；DFT-100型粉碎機 （溫嶺市林大機械有限公司）；Agi1ent1100高效液相色譜儀，包括DAD檢測器、自動進樣器、在線脫氣、四元泵（美國Agi1ent公司）；SB25-12DTDN型超聲波清洗器（寧波新芝生物科技股份有限公司）；SHB-3型循環多用真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）；RE-52型旋轉蒸發儀 （上海振捷實驗設備有限公司）。

1.2材料 黑順片、生附片購自四川江油中壩附子科技發展有限公司，經中國食品藥品檢定研究院張繼主任藥師鑒定為毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaelii Debx.的子根加工品。

烏頭堿 （批號 110720-201111）、新烏頭堿（批號110798-201106）、次烏頭堿 （批號110799-201106）、苯甲酰烏頭原堿（批號 111794-201102）、苯甲酰新烏頭原堿 （批號 111795-201002）、苯甲酰次烏頭原堿 （批號 111796-201002）對照品均購自中國食品藥品檢定研究院。乙腈、四氫呋喃為色譜純 （德國Merck公司）；其他試劑均為分析純；水為純凈水 （杭州娃哈哈集團有限公司）。

2　炮制品制備

2.1砂燙生附片 取潔凈河砂20 kg，置于炒藥機內，溫度升至200℃，投入生附片2 kg，不斷轉動，炒制7 min至表面呈黃棕色時取出，篩去河砂，晾涼，平行制備3批，粉碎備用。

2.2炮附片 （砂燙黑順片） 投入黑順片2 kg，其他操作同 “2.1”項。

3　方法與結果

3.1外觀性狀觀察 生附片表面黃白色，斷面黃白色，質脆；砂燙生附片表面黃棕色，斷面黃色，質脆。黑順片表面、斷面暗黃色，質硬而脆；炮附片表面顏色、斷面顏色、質地與砂燙生附片基本一致。具體見圖1～2。

3.2生物堿含有量的測定［1］

3.2.1色譜條件 Agi1ent Extend C18色譜柱（4.8 mm×250 mm，5μm）；流動相為乙腈-四氫呋喃（25∶15，A）-0.1 mo1/L醋酸銨溶液（每1 000 mL加冰醋酸0.5 mL，B），梯度洗脫 （0～8 min，15%～26%A；48～49 min，26%～35% A；49～58 min，35%A；58～65 min，35%～15%A）；檢測波長235 nm；柱溫25℃；體積流量1.0 mL/min。

3.2.2對照品溶液的制備 精密稱取對照品適量，置于10 m L量瓶中，加入異丙醇-二氯甲烷 （1∶1）混合溶液溶解，并稀釋至刻度，即得含新烏頭堿0.055 mg/mL、烏頭堿0.045 mg/mL、次烏頭堿0.012 mg/mL、苯甲酰新烏頭原堿0.082 mg/mL、苯甲酰烏頭原堿0.022 mg/mL、苯甲酰次烏頭原堿0.097 mg/mL的混合對照品溶液，備用。

3.2.3供試品溶液的制備 分別精密稱取各樣品粉末 （過3號篩）2 g，置于具塞錐形瓶中，加入氨試液 3 mL，再精密加入異丙醇-乙酸乙酯（1∶1）混合溶液50 m L，稱定質量，超聲處理（300 W、40 kHz、25℃以下）30 min，放冷，異丙醇-乙酸乙酯 （1∶1）混合溶液補足減失的質量，搖勻，濾過。精密量取續濾液25mL，40℃以下減壓回收溶劑至干，殘渣精密加入異丙醇-二氯甲烷（1∶1）混合溶液3 mL溶解，過0.45μm微孔濾膜，即得。

3.2.4精密度、穩定性、重復性試驗 由于本實驗的含有量測定方法參考藥典［1］，而藥典均已經過方法學考察，故未進行相關試驗。

圖1　生附片及其炮制品外觀性狀Fig.1 Appearance characters of Shengfupian and its processed p roducts

圖2　黑順片及其炮制品外觀性狀Fig.2 Appearance characters of Heishunpian and its processed products

3.2.5加樣回收率試驗 精密稱取含有量已知的同一砂燙生附片樣品9份，每份2 g，按樣品中苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、新烏頭堿含有量的80%、100%、120%加入對照品溶液，按 “3.2.3”項下方法制備供試品溶液，在 “3.2.1”項色譜條件下進樣10μL。結果見表1。

表1　加樣回收率試驗結果（n=3）Tab.1 Results of recovery tests（n=3）

3.2.6含有量測定 分別精密吸取對照品和供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，外標法計算各供試品中新烏頭堿、烏頭堿、次烏頭堿、苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿的含有量。每批樣品平行測定2份，每份平行2次。結果見表2。

4　討論

附子炮制的目的是減毒，其機制為劇毒型烏頭類雙酯型生物堿在加熱過程中，C8位上的乙酰基水解或分解，失去一分子醋酸，得到相應的苯甲酰單酯型生物堿，其毒性僅為雙酯型烏頭堿的1/50～1/100。再進一步將C14位上的苯甲酰水解或分解，失去一分子苯甲酸，得到親水性氨基醇型類烏頭原堿，其毒性僅為雙酯型烏頭堿的1/2 000～1/4 000［8-10］。

黑順片砂燙后，雙酯型生物堿檢測不到，而生附片砂燙后其總含有量由 0.067 5%降至0.001 5%，表明砂燙生附片與炮附片 （砂燙黑順片）均符合藥典規定 （雙酯型生物堿總含有量不得超過0.020%）。黑順片砂燙后，單酯型生物堿總含有量降低率為42%；生附片砂燙后，雙酯型生物堿總含有量降低約98%，單酯型生物堿總含有量增加約3倍，表明砂燙可以促使生附片中雙酯型生物堿向單酯型轉化，達到減毒的效果。黑順片在產地加工時，需經過膽巴浸泡、煮、浸漂、蒸等過程，雙酯型生物堿向單酯型轉化的一級水解過程已完成，在砂燙時，可能促使其水解或分解，導致含有量進一步降低。

表2　含有量測定結果（%，n=2）Tab.2 Results of content determ ination（%，n=2）

附子于6月下旬至8月上旬采挖，除去母根、須根及泥沙，習稱 “泥附子”。因附子在夏至季節采收后極易腐爛，故須進行產地加工 （膽巴水浸泡）以防腐［11］。藥典法制備附子飲片 （包括黑順片）時，均有 “泥附子洗凈，浸入食用膽巴的水溶液中數日［1］”的產地加工程序。研究表明，附子在膽巴溶液中浸泡20 d后能達到防腐的效果，但膽巴含有量 （以氯化鈣計）達25%～30%［12］，雙酯型和單酯型生物堿均流失70%左右［13］。為保證臨床用藥的安全性和有效性，建議改進泥附子產地加工方法，省去膽巴浸泡和浸漂的炮制工序。砂燙生附片中主要藥效成分單酯型生物堿的含有量較炮附片高約4倍，而且未經膽巴處理，無浸漂過程，可避免膽巴殘留和生物堿成分流失，縮短炮制時間，節約成本。后期藥理實驗研究結果表明，砂燙生附片無明顯毒性，具有抗炎鎮痛、抗心衰的作用，故砂燙生附片 （仲景制法）具有低毒高效的特點，在炮制工藝及成分含有量上均優于炮附片，值得深入挖掘與研究。

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Variations of six alkaloids in Shengfupian heated with sand and Paofupian before and after preparation

CHEN Jiong， TAN Peng， WU Yue-jiao， QIN Yu-xin， WANG Lei， LIFei*

（Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China）

AIM To study the possibi1ity of Shengfupian heated with sand substituted for Paofupian（Heishunpian heated with sand）.METHODS Nifuzi was s1iced and processed to Shengfupian，which was then heated with sand，and the appearance characters were observed.The tota1 contents of monoester-type（benzoy1mesaconine，benzoy1aconitine and benzoy1hypacoitine）and diester-type（mesaconitine，aconitine and hypaconitine）a1ka-1oidswere determined by HPLC.RESULTS The appearance characters of these two processed products showed no significant difference.The tota1content of diester-type a1ka1oids in Shengfupian was 0.067 5%before preparation，and decreased to 0.001 5%after preparation，whi1e that in Paofupian was not detected before and after preparation.The tota1 content ofmonoester-type a1ka1oids in Shengfupian was 0.014 1%before preparation，and increased to 0.038 2%after preparation，whi1e that in Heishunpian was 0.019 5%before preparation，and decreased to 0.011 4%after preparation.Both of them meet Chinese Pharmacopeia requirement（the tota1content of diester-type a1ka1oids shou1d not be more than 0.020%）.CONCLUSION Shengfupian heated with sand（Zhongjingmethod）has the characteristics of 1ow toxicity and high efficacy，which isworthing further study.

Shengfupian；Paofupian；heated with sand；a1ka1oids；HPLC

R284.1

A

1001-1528（2016）06-1342-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2016.06.028

2015-10-04

中醫藥行業科研專項 （201107008）；北京中醫藥大學在讀研究生項目 （2015-JYB-XS094）

陳 炯（1990—），女，碩士生，研究方向為中藥炮制。E-mai1：chenjiong886@163.com

李 飛（1964—），女，碩士，教授，研究方向為中藥炮制。E-mai1：1f668@sina.com