高效液相色譜法測定羊乳制品中的三聚氰胺

姚欣

摘 要：采用高效液相色譜法對羊乳制品中的三聚氰胺進行測定。羊乳制品中三聚氰胺使用乙腈提取、高速離心，使用二極管陣列檢測器測定。該方法三聚氰胺的檢出限和定量限分別為0.0176mg/kg（S/N=3）和0.0586mg/kg（S/N=10），1.00mg/L三聚氰胺標準溶液重復進樣六次，峰面積RSD為1.64%，在向四種不同的羊乳制品中添加10-50μg三聚氰胺時回收率為92.65%～94.13%。并使用該方法對富平羊乳制品中三聚氰胺進行測定，結果均為陰性。結果表明，方法檢出限高、準確可靠、操作簡便，并適用于羊乳制品中三聚氰胺的測定。

關鍵詞：高效液相色譜法；三聚氰胺；羊乳制品

中圖分類號： TS252.7 文獻標識碼： A 文章編號： 1673-1069（2016）27-186-2

0 引言

陜西省富平縣由于其地理位置和氣候條件，特別適宜關中奶山羊的飼養。經過多年來的不斷發展，年產羊乳制品十幾萬噸，已成為全國羊乳制品產量之首，是名副其實的“中國羊乳之都”。羊乳具有脂肪顆粒小，便與人體的吸收；鈣含量高；含有多種的維生素和微量元素；其蛋白質含量與母乳接近，長期食用不會引起發胖等優點[1]，越來越受到消費者的歡迎，已逐漸從鮮乳向大眾食品、嬰幼兒食品等多元化發展。由于羊乳制品比牛乳制品蛋白質含量更高，價格更貴，就可能存在以次充好的現象。2008年中國爆發的毒奶粉事件就不乏存在商販追求高蛋白的原因所致，從而造成了廣泛且及其惡劣的影響。因此，本文在針對羊乳制品對國標 測定三聚氰胺的方法進行優化上，并對本地羊乳制品中三聚氰胺的含量進行測定。

1 儀器及試劑

1.1 儀器

HPLC（LC-20，日本島津），配備LC-20AD高壓泵，SPD-M20A二極管陣列檢測器及自動進樣器；分析天平（CPA224S，德國賽多利斯）；pH計（640，上海英格）；高速離心機（GL-20G-II、安亭飛鴿）；恒溫振蕩器（HHZ-98AB，上海一橫）。

1.2 試劑

乙腈（JDH.色譜純）；磷酸、磷酸二氫鉀（GR，國藥集團化學試劑有限公司）；三聚氰胺標準物質（中國計量科學研究院），實驗用水為高純水，電阻率為18.25 MΩ·cm-1。

1.3 樣品來源

市售羊奶粉、嬰幼兒配方羊奶粉、羊乳（生羊乳、巴氏滅菌羊乳）、羊乳酸奶等均購于當地超市。

2 方法與結果

2.1 標準工作溶液的制備

三聚氰胺標準溶液：稱取100.0mg三聚氰胺標準物質，用水完全溶解后定容至100mL，混勻，此為三聚氰胺標準儲備液，三聚氰胺濃度為1.00g/L。用水逐級稀釋三聚氰胺標準儲備液至1.00mg/L，此為三聚氰胺標準溶液。分別移取標準溶液0.50mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00mL、25.0mL、50.0mL和100.0mL至100mL容量瓶中，并用水定容至刻線，此標準工作溶液三聚氰胺含量分別為5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L、250μg/L、500μg/L、1000μg/L。

2.2 樣品處理方法

羊奶粉制品、羊乳酸奶：稱取混合均勻的15g樣品，置于50ml具塞刻度試管中，加入30ml乙腈，置于水平震蕩儀中震蕩10min，加水定容至刻度，轉移至50mL離心管中，5000r/min離心10min，取乙腈層溶液過0.45μm濾膜，作為供試樣。

生羊乳制品：稱取混合均勻的30g樣品，置于100ml具塞刻度試管中，加入60ml乙腈，置于水平震蕩儀中震蕩15min，加水定容至刻度，轉移至100mL離心管中，10000r/min離心15min，取乙腈層溶液過0.45μm濾膜，作為供試樣。

2.3 色譜條件及線性關系考察

色譜柱：SCX強陽離子交換柱，5μm，4.6 mm×250mm（Waters）。

0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖溶液：稱取6.8g磷酸二氫鉀，加水800mL，用2mol/L磷酸溶液調節pH至3.0，超聲脫氣15min

乙腈：超聲脫氣15min。

流動相：0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖溶液：乙腈=95：5

流速：1.5mL/min；檢測波長：240nm

取標準工作溶液各20μL進樣，平行三次，取平均值。以三聚氰胺濃度（Y，μg/L）對色譜峰面積（X）的均值作圖（見圖1），得出回歸方程：Y=1.7487×10-5X-1.1638×10-3，線性相關系數（r2）0.9994，保留時間為9.61min，表明工作濃度范圍內線性良好。

2.4 檢出限、定量限及精密度試驗

以空白樣品按選定的實驗條件，以3倍噪聲為檢出限，10倍噪聲為定量限，三聚氰胺檢出限和定量限分別為0.0176mg/kg和0.0586mg/kg。取1.00mg/L三聚氰胺標準工作溶液20μL進樣，重復六次，三聚氰胺峰面積的RSD為1.64%，表明該方法靈敏度高、精密度良好。

2.5 加標回收試驗

向樣品中加入一定量三聚氰胺，按3.2方法處理，準確吸取供試樣20μL。根據回歸方程計算被檢測試樣中的三聚氰胺的含量，并計算加標回收率如表1。

由表1可知四種不同樣品平均三聚氰胺回收率為92.65%～94.13%，表明該方法準確度良好，適宜羊乳制品中三聚氰胺的測定。

2.6 樣品測定

使用3.2樣品前處理方法和3.3色譜柱條件，對四種不同羊乳制品共計52批次進行三聚氰胺的測定，檢驗結果均為陰性。

3 結論

試驗表明，使用0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖溶液-乙腈（95：5）作為流動相，測定羊乳制品中三聚氰胺的含量，方法檢出限高、準確可靠、操作簡便。該方法適用于羊乳制品中三聚氰胺的測定。

參 考 文 獻

[1] 中國百科大辭典編委會.中國百科大辭典[M].北京：華廈出版社，1990，1214.

[2] GB/T 22400-2008，原料乳中三聚氰胺快速檢測液相色譜法[S].