川崎病患兒急性期免疫功能變化及其意義

王　瓊　沈方方　吳　鳴浙江省嘉興市第二醫院兒科，浙江嘉興　314000

川崎病患兒急性期免疫功能變化及其意義

王瓊沈方方吳鳴
浙江省嘉興市第二醫院兒科，浙江嘉興314000

目的探討川崎病（KD）患兒急性期細胞免疫和體液免疫功能的變化，以及其對臨床診治的意義。方法 選取2014年1月~2015年6月本院收治的KD患兒50例作為KD組，以及同期健康體檢兒童50例為對照組，分別測定外周血淋巴細胞亞群（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD16+56）與血清免疫球蛋白（IgG、lgA、IgM）水平，比較兩組之間的變化。結果 與對照組比較，KD組的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、IgG、IgA、IgM水平均明顯升高（P＜0.05），而CD16+56則出現下降（P＜0.05）。結論 KD患兒在急性期存在免疫系統的高度活化。

川崎病；淋巴細胞亞群；免疫球蛋白；活化

[Abstract]Objective To analyze the immunity condition in acute period children with Kawasaki disease．Methods Selected 50 children with KD and 50 healthy children,which were treated in our hospital from January 2014 to June 2015,were divided into KD group and control group．The level variation of lymphocyte subsets(CD3+,CD4+,CD8+, CD4+/CD8+,CD16+56)and immune globulin(IgG,IgA,IgM)were compared between two groups．Results Compared with the control group,the level of CD3+,CD4+,CD8+,CD4+/CD8+,IgG,IgA,IgM increased(P＜0.05)in the children with KD,while the level of CD16+56 decreased(P＜0.05)at the same time．Conclusion Children in the acute period of KD have active function in immunity condition,which means their immune system activated．

[Key words]Kawasaki disease;Lymphocyte subsets;Immune globulin;Activation

皮膚黏膜淋巴結綜合征又稱川崎病（Kawasaki disease，KD），是一種以全身血管炎癥為主要病變的疾病，好發于5歲以下的兒童，可累及全身多系統病變，其中以心血管系統冠狀動脈損害（coronary artery lesions，CAL）最為嚴重，且可能并發冠狀動脈擴張（coronary artery dilatation，CAD），進一步甚至可能形成冠狀動脈瘤（coronary artery aneurysms，CAA）。冠狀動脈的炎性損傷導致冠狀動脈阻塞性擴張，可進一步發展為心肌缺血最終發生心肌梗死及猝死，這也是本病的主要死因[1]。本病的發病率逐漸升高[2]，而在急性期有35%的患兒存在冠狀動脈擴張[3]。大多數患兒的冠狀動脈擴張可在緩解期自然恢復正常，但仍有約4%的患兒發生CAL病后1年仍持續存在，并最終演變為冠狀動脈狹窄，到成人期可能出現冠狀動脈粥樣硬化以及心肌梗死發生。統計表明在發達國家，KD導致的兒童心血管并發癥的發生率已超過風濕性心臟病，是兒童時期獲得性心臟病的主要病因[4]。KD的病因和發病機制目前尚未完全明確，早期發現、早期確診及治療并減少CAL的發生是本病研究的熱點。現階段研究證實，本病與多種感染導致的機體免疫功能活化有較密切的相關性，其中T細胞介導的免疫應答以及細胞因子的級聯放大反應是血管炎癥發生的基礎[5，6]。本文旨在探討KD患兒急性期細胞免疫及體液免疫功能變化情況，現報道如下。

1　對象與方法

1.1研究對象

選擇2014年1月~2015年6月本院收治的KD患兒共50例為KD組，均符合KD診斷標準[7]，并排除存在心臟疾病的病例。其中男31例，女19例，年齡11個月~10歲，平均年齡5.8歲，在進行檢驗前均未使用有影響免疫功能的藥物。對照組為同時期健康體檢的兒童共50例，男30例，女20例，年齡8個月~10歲，平均年齡5.5歲。家長理解并愿意參加本項臨床試驗，同時簽署知情同意書。兩組兒童在年齡、性別等方面比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2方法

KD組在入院第1天即予以采集靜脈血標本檢查上述指標。其中T淋巴細胞亞群檢測采用方法為免疫熒光法，測定范圍包括CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋、CD16+56，儀器為美國貝克曼庫爾特公司的Cytomics FC500型流式細胞儀，所用試劑等均為原裝配套試劑。免疫球蛋白IgG、IgA、IgM檢測采用方法為散射比濁法，所用儀器為日立7600-020全自動生化分析儀。對照組在體檢時抽取相同量的標本，采用相同方法檢測相應指標。

1.3統計學方法

所有數據使用SPSS17.0統計學軟件進行數據處理，計量資料以表示，組間比較采用t檢驗，P＜ 0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1兩組外周血T淋巴細胞亞群水平比較

KD組患兒的CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋水平均明顯高于對照組（P＜0.05），同時CD16+56水平則明顯低于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1　兩組外周血T淋巴細胞亞群水平比較

表1　兩組外周血T淋巴細胞亞群水平比較

CD3＋（%）CD4＋（%）CD8＋（%）　CD4＋/CD8＋CD16+56 （%）組別　n KD組對照組50 50 t值　P 63.27±4.38 61.22±3.82 3.59 ＜0.05 41.46±4.82 35.72±3.88 6.53 ＜0.05 27.29±2.83 24.32±1.98 5.21 ＜0.05 1.48±0.28 1.02±0.13 8.07 ＜0.05 8.01±1.98 10.05±0.89 1.32 ＜0.05

2.2兩組免疫球蛋白水平比較

KD組患兒的免疫球蛋白IgG、IgA、IgM水平均明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2　兩組患兒血清免疫球蛋白水平比較

表2　兩組患兒血清免疫球蛋白水平比較

組別　n　IgA　IgM　IgG KD組對照組t值P 50 50 1.05±0.21 0.72±0.14 4.67 ＜0.05 1.67±0.18 1.41±0.23 5.01 ＜0.05 18.75±3.29 15.23±2.31 2.47 ＜0.05

3　討論

KD的臨床表現多樣，且個體差異較大，其病理過程是以血管內皮細胞的免疫損傷為特征，主要為全身中小血管的非特異性炎癥，在本病的發病早期發現血管壁水腫、壞死，同時存在內皮細胞改變和外膜炎癥，即出現血管重構[8]，其典型特征為內源性彈性蛋白被破壞，進而導致系統性血管炎或冠狀動脈瘤。但其病因及具體發病機制至今未明，較被認可的機制主要為發病急性期的免疫系統高度激活所導致的血管炎性損害，如AECA與血管內皮細胞的損傷結合后，可以發生多種免疫反應，對血管內皮細胞造成損傷，而ANCA這種作用則更為強烈[9]。也有作者認為支原體（MP）感染也是導致KD發病的病因之一，而且其中存在著相類似的免疫反應過程[10]。另外，近年來研究發現本病在急性期時有大量單核/巨噬細胞浸潤，從而產生大量炎性細胞因子，最終結果則是直接損傷血管內皮細胞[11]，進一步導致細胞外基質的代謝紊亂、血管基底膜通透性的增加，以及細胞凋亡和遷移，乃至血管結構重建等病理生理變化，最后促使冠狀動脈炎性病變及擴張，甚至狹窄的冠狀動脈瘤等形成。多種炎癥因子如MMP-9、IL-6和TNF-α參與了KD的病理生理過程[12]，Tan等[13]的研究還發現川崎病患兒不同時期的血清MMP-1、VEGF水平較健康兒童顯著升高，均提示免疫學因素在KD的發生和發展中起了重要作用，故而推論本病的急性期可能存在著免疫系統的高度活化。

T淋巴細胞是參與機體細胞免疫的主要細胞群組，根據其在免疫應答中功能的不同，可分為輔助性（Th）、抑制性T細胞（Ts）和調節性T細胞（Tr）。Th的主要作用是介導細胞免疫應答，促使細胞毒性T細胞形成、活化，在自身免疫性疾病的誘導發生中有著重要作用。而Ts的作用則是通過釋放抑制因子以抑制B細胞及效應T細胞的活化，從而降低機體的免疫功能[14]，CD4＋抗原和CD8＋抗原分別是其表面標志，CD4＋/ CD8＋比值與機體的免疫功能密切相關。我們的檢測結果顯示，KD患兒在急性期時CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋水平升高，與既往的文獻報道一致[15]，提示我們，在KD起病的急性期，患兒的細胞免疫功能發生變化，表現為處于高度活化狀態，即Th細胞功能的異常活化，而Ts細胞功能則相對有所減弱，進一步可以產生B細胞生長因子，促進多克隆B細胞分泌各種相應的免疫球蛋白，還可以動員淋巴細胞及單核/巨噬細胞分泌多種細胞因子，這些都參與了血管炎性損傷反應。活化的B細胞可以分泌IgG、IgA、IgM等多種Ig和抗體，參與抗原提呈以及其他免疫調節功能。在體液免疫反應過程中，Th細胞協助抗原物質刺激B細胞，形成抗體，而Ts細胞對B細胞則有抑制作用，其數量減少可以誘導B細胞功能的亢進，因而產生了大量抗體，導致了體液免疫功能紊亂。綜上所述，T細胞的異常活化是KD患兒出現免疫功能紊亂以及產生血管炎性損傷的關鍵因素。研究發現[16]，活化的免疫細胞浸潤冠狀動脈，是進一步導致冠狀動脈病變的重要病理改變。

我們在實驗中觀察到外周血IgA、IgM、IgG水平均有升高，提示KD患兒還存在有B細胞功能的活化。在患兒功能研究發現，某些患兒在KD急性期，細胞免疫可能受到抑制，但由Th2細胞介導的體液免疫功能可能增強[17]。而B細胞的分化是在T細胞的調控下進行的[18]，B細胞功能的活化，一方面是因為Th細胞過度活化后刺激B細胞發生增殖、分化；同時Ts細胞出現功能抑制，對B細胞抑制功能下降，這也加強了B細胞的活化。兩方面同時作用導致B細胞功能異常。

CD16+CD56是NK細胞的標志物，其在機體免疫監視中有重要意義[19]。在本實驗中KD患兒組下降，提示NK細胞也參與了KD的發病過程。NK細胞的降低，使得對B細胞增殖和分化的抑制功能發生減弱，導致B細胞出現過度增殖，也影響患兒的體液免疫功能，而Giordani等[20]研究的結果發現，KD急性期患兒的損傷動脈處可以檢測到有T淋巴細胞、NK細胞以及吞噬/單核細胞的聚集和浸潤，而這也引起了外周血中NK細胞水平的下降。這些改變都使得T細胞出現過度活化，從而促使B淋巴細胞和NK細胞分泌各種細胞因子，機體的免疫功能發生紊亂，而這些因素也都參與促使了血管壁的炎癥性損傷，是KD發病過程中的免疫學關鍵改變。臨床上給予丙種球蛋白治療KD，因大劑量丙種球蛋白可以封閉單核/巨噬細胞、淋巴細胞等的Fc受體，抑制機體免疫細胞出現過度活化，檢測發現CD8+細胞比例升高，與此同時被活化的CD4+細胞比例相應減少，這些變化使得IgG合成下降，從而負反饋調節，抑制了多克隆活化的B細胞產生自身抗體。而不完全性KD由于在臨床上，尤其是起病早期，各種癥狀表現均不典型，影響了疾病的早期診斷，以至于在治療方面發生延誤，如不能早期給予丙種球蛋白治療，故而不完全KD所導致冠狀動脈病變發生率明顯升高[21-23]。但是其免疫學改變與典型KD相似，可以通過觀察免疫功能改變幫助早期診斷。

綜上所述，KD患兒存在著細胞免疫和體液免疫的異常變化，患兒的免疫系統處于失衡狀態之中。在KD急性期，患兒由于T淋巴細胞調控網絡的失衡，使CD4+/CD8+的比值較正常生理狀態時明顯增高，故而患兒機體的免疫系統處于活化狀態。而活化的T細胞又會分泌過量細胞因子，從而導致一系列的血管炎性病變以及臟器損傷。我們在臨床治療過程中，對KD患兒在其發病早期檢測T淋巴細胞亞群及免疫球蛋白水平，有助于明確KD患兒的細胞免疫和體液免疫功能的變化，對本病進行早期臨床干預及早期治療，以緩解及阻止冠狀動脈損害的發生。而進一步明確各種細胞因子在KD發病過程中的作用，開展封閉細胞因子的致炎性反應作用的研究，對于KD的最終治療有重要意義。

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Change of immunity condition with Kawasaki disease in the acute period

WANG QiongSHEN FangfangWU Ming
Department of Paediatrics,Jiaxing Second Hospital in Zhejiang Province,Jiaxing314000,China

R725.4

A

1673-9701（2016）12-0014-03

浙江省嘉興市科技局項目（2012AY1071-12）；浙江省基層衛生適宜技術成果轉化工程項目（2013T301-17）

2015-11-10）