Smad4在卵巢粘液腺癌組織中的表達及臨床意義

江曉紅 袁軍 付亞軍

Smad4在卵巢粘液腺癌組織中的表達及臨床意義

江曉紅 袁軍 付亞軍

目的 探討Smad4 在卵巢粘液腺癌組織中的表達及意義。方法 采用免疫組織化學SP法，對20例卵巢原發交界性粘液性囊腺瘤、20例卵巢原發粘液腺癌和20例卵巢轉移性粘液腺癌組織進行Smad 表達水平研究。結果 Smad4蛋白在原發腺癌及交界性粘液性囊腺瘤組織中的陽性表達高于轉移性粘液腺癌組織，差異有統計學意義（P＜0.01）；Smad4蛋白在原發腺癌及交界性粘液性囊腺瘤組織中的陽性表達無明顯差異。結論 Smad4作為一種新的檢測抗體，在鑒別卵巢原發性粘液腺癌和轉移性粘液腺癌中起了重要的作用。

卵巢腫瘤 粘液腺癌 原發性 轉移性

卵巢粘液腺癌是常見的卵巢上皮性腫瘤，早期診斷較困難，確診時多屬晚期，確診后生存率低，是預后最差的惡性腫瘤之一。卵巢發生的粘液腺癌中，有原發性的，也有部分是轉移性的（大多數是胃腸道轉移來源），這兩者的鑒別大多可以通過手術探查而證實，但對于隱匿的胃腸道腺癌轉移后的鑒別比較困難，本實驗以常規甲醛固定，石蠟包埋的卵巢原發性粘液腺癌及轉移性粘液腺癌組織為材料，用SP免疫組織化學方法檢測Smad 4表達情況，從而為Smad4 蛋白對卵巢粘液腺癌鑒別是否原發提供強有力地證據。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇本院2006年1月至2014年5月經手術和病理學確診的卵巢粘液性腫瘤標本60例。年齡36～71歲，平均53.3歲。其中原發性粘液腺癌20例（A組）、卵巢原發交界性粘液性囊腺瘤20例（B組）、轉移性粘液腺癌20例（C組）（胃腸道來源18例，胰腺來源2例）。所有病例經資深病理學專家結合臨床資料確診。

1.2 實驗材料 鼠抗人Smad4單克隆抗體（武漢博士德生物工程有限公司）、超敏免疫組織化學染色試劑盒和DAB染色劑（福州邁新生物技術有限公司）。

1.3 實驗方法 所有標本均經4 %甲醛溶液固定，取材，石蠟包埋，連續3～5 mm 切片。采用免疫組織化學SP 法檢測卵巢原發性粘液腺癌和轉移性粘液腺癌組織中Smad4的表達情況。步驟按說明書操作。Smad4采用EDTA（pH 9.0）水煮高溫修復抗原DAB顯色，蘇木精對比染色。用已知陽性片作為陽性對照，用PBS代替第一抗體作為陰性對照。

1.4 結果判定 Smad4主要表達于細胞質，部分表達于細胞核。Smad4表達根據Pizer［1］的綜合判定標準：（1）陽性細胞百分率即染色范圍：不顯色為0分。陽性細胞＜10%為1分。11%～50%為2分。51%～80%為3分。＞80%為4分。（2）陽性信號強度即染色強度：不染色為0分。淡黃色為1分。棕黃色為2分。棕褐色為3分。病理切片染色結果，均由＞2名高年資病理醫生共同完成。兩項指標相加后綜合評分：陰性（＜4分）；陽性（≥4分）。

1.5 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件。計數資料采用χ2檢驗。P＜0.01為差異有統計學意義。

2 結果

Smad4表達在卵巢交界性粘液性囊腺瘤、卵巢原發性粘液腺癌組織和轉移性粘液腺癌組中的比較差異有顯著性（χ2=51.450，P＜0.01）；Smad4在卵巢交界性粘液性囊腺瘤、卵巢原發性粘液腺癌細胞和（或）胞核中可見棕黃色顆粒，陽性表達率分別為95%（19/20）、100.0%（20/20）（見圖1、2），在卵巢轉移性粘液腺癌細胞胞質、胞核中呈陰性，陽性表達率5.0%（1/20）（見圖3）。Smad 4在卵巢轉移性粘液腺癌組織中的表達低于在原發性粘液腺癌組織中的表達及卵巢交界性粘液性囊腺瘤組織中的表達，差異均有顯著性（P＜0.01）。Smad 4在卵巢原發粘液腺癌組織與原發性交界性粘液性囊腺瘤中表達差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

圖1 A組Smad4（SP×100）

圖2 B組Smad4（SP×100）

圖3 C組Smad4（SP×100）

表1 Smad4在卵巢粘液性腫瘤中的表達（n）

3 討論

Smad4又稱DPC4，最初作為抑癌基因從胰腺癌中篩選出來。Smad家族目前已確定有9名成員，根據結構和功能的不同，可將其分為受體激活型Smad、通用型Smad 和抑制型Smad。Smad4屬于通用型Smad。在Smad家族中，Smad4與腫瘤的關系尤為密切［2］。Smad4功能失活或表達低下可能影響TGF-β的信號轉導并參與腫瘤的形成［3］。

Smad4表達缺失或突變使細胞逃脫TGF-β的抑制作用，促進了癌前病變的發生及其向癌的轉化，并影響了癌細胞的生物學行為。Smad4作為腫瘤抑制基因，最初是在40% ～50% 的胰腺癌中發現有缺失和突變。近期的研究發現，多數胰腺癌存在Smad4基因的缺失或突變［4］，而Smad4的失活也可見于胃癌、結直腸癌等［5］，張朋彬等［6］研究發現Smad4蛋白在正常胃黏膜腺體主要表達于細胞漿中，以胃腺體的體部和底部最為明顯。在腸化胃黏膜及不典型增生組織，Smad4蛋白的表達主要位于細胞漿中，但在胞漿中分布不均勻，與正常胃黏膜相比，其表達未見明顯異常（P＞0.05）。

A Leng等［7］報道，胃癌組織Smad4蛋白的表達明顯低于癌旁組織，并且Smad4蛋白表達與胃癌組織分化程度有關，分化程度低的胃癌組織Smad4的表達明顯低于分化程度高的胃癌組織。

卵巢是轉移性腫瘤的肥沃土囊，不僅是因為卵巢具有豐富的血管，同時也與卵巢的自身解剖結構有著緊密的關系，腹腔內臟的惡性腫瘤極易通過播散的方式從卵巢表面排卵的小裂口進入卵巢實質，因此卵巢是女性生殖系統中轉移性腫瘤最好發的部位。對于卵巢轉移性惡性腫瘤的來源，目前已經達成共識，以胃腸道、乳腺及子宮最為多見，三者之和占卵巢轉移性惡性腫瘤的＞90%，其中又以胃癌轉移到卵巢（Krukenberg tumours）最為常見。對于卵巢原發性粘液腺癌與轉移性的腺癌，β-catenin、CA125、HAM56、MUC2、CEA、CK7、CK20等均考慮并加入到卵巢原發及轉移性腫瘤的鑒別診斷工作中，但是任何一個單一的指標并不可靠，不宜單獨使用。從形態學角度鑒別兩者非常困難，但是現有的免疫組化指標，無法滿足日常工作的需要，找到腫瘤的原發部位，對進一步臨床治療具有重要的指導意義。為了解決這一工作難題，病理工作者們一直在積極的研究與探討，隨著Smad4這一新腫瘤抑制基因的發現，提供了新的研究思路。

本次實驗應用免疫組化SP法檢測了20例卵巢原發性交界性粘液性囊腺瘤、20例卵巢原發性粘液腺癌組織和20例轉移性粘液腺癌組織中的Smad4。結果顯示Smad4在原發交界性粘液性囊腺瘤組織陽性率為95%、原發性粘液腺癌組織陽性率為100 %，在轉移性粘液腺癌中的陽性率為5.0%，在轉移性粘液性腺癌組的陽性率明顯低于原發性粘液腺癌組及原發性交界性粘液性囊腺瘤組，差異有顯著性（P＜0.01）。推測Smad4作為一種抑癌基因，其在卵巢原發性粘液性腫瘤中完全表達，因此其陰性表達有意義（可以排除卵巢原發的可能性），此應用在卵巢原發性粘液腺癌與轉移性粘液腺癌的鑒別中可能起非常重要的作用并具有廣泛而深遠的研究價值。對于大樣本研究及長遠的應用價值，Smad4與腫瘤的分化、大小、浸潤的程度以及預后等有無相關性，以及其在卵巢原發性粘液性腫瘤中的作用機制還有待于進一步的臨床及實驗研究。

1 Pizer E，Lax S，Kuhajda F，et a1.Fatty acid synthase expression in endometria1 carcinoma：corre1ation with ce11 pro1iferation and hormone receptors .Cancer，2008，83（3）：528～537.

2 Moustakas A.Souche1nytskyi S，He1din C H.Smad regu1ation in TGF-β signa1 trans duction.J Ce11 Science，2001，114（Pt24）：4359～4369.

3 De Caesteckr MIP，Yahata T，Wang D，et a1.The Smad4 activation domain（SAD）is a pro1ine-rich，p300-dependent transcriptiona1 activationdomain. JBio1 Chem，2000，275（3）：2115～2122.

4 劉成敏，張成仁，王秀梅.Smads介導的TGF-β信號通路與腫瘤關系的研究進展.中華腫瘤防治雜志，2010，17（8）：631～634.

5 Kim JY，Park DY，Kim GH，et a1.Smad4 expression in gastric adenoma and adenocarcinoma：frequent 1oss of expression in diffuse type of gastric gastric adenoma.Histo1 Histopa1ho1，2005，20（2）：543～549.

6 張朋彬，凌賢龍，郭紅.Smad4蛋白在胃癌前病變中表達的研究.激光雜志，2010，31（1）：97.

7 A Leng，T Liu，Y He，et a1.Smad4/Smad7 ba1ance：a ro1e of tumorigenesis in gastric cancer.Exp Mo1 Patho1，2009，87（1）：48～53.

314051 浙江省嘉興市婦幼保健院